熒光原位雜交技術(shù)FISH

概述：

原位雜交技術(shù)是以核酸分子堿基互補(bǔ)配對(duì)的原理為基礎(chǔ)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。通過(guò)標(biāo)記的核酸分子（探針，Probe）與目標(biāo)核酸分子雜交，再用相應(yīng)的方法檢測(cè)探針的存在，從而揭示靶部位目標(biāo)分子的位置。最早的原位雜交技術(shù)出現(xiàn)于 1969 年，Gall 和 Pardue 利用H³標(biāo)記的核糖體 RNA 與非洲爪蟾的卵母細(xì)胞雜交，揭示了核糖體 RNA 基因的基因擴(kuò)增現(xiàn)象（Gall & Pardue, 1969）。

早期的原位雜交技術(shù)使用放射性標(biāo)記，存在諸多弊端。1985 年 Rayburn 等首次將生物素（Biotin）標(biāo)記的重復(fù)序列定位到小麥的中期分裂相上（Rayburn &Gill, 1985），開創(chuàng)了非放射性標(biāo)記的雜交技術(shù)。由于非放射性標(biāo)記的原位雜交技術(shù)具有安全、經(jīng)濟(jì)、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，因而迅速發(fā)展起來(lái)。

熒光原位雜交技術(shù)（Fluorescence in situ hybridization, FISH）是指利用熒光信號(hào)檢測(cè)探針的原位雜交技術(shù)。廣義上講，F(xiàn)ISH 靶序列可以是 DNA 或者 RNA，既可以用來(lái)進(jìn)行基因組層面的研究，也可以進(jìn)行表達(dá)層面的研究。

目的：

用于基因定性、定量、整合、表達(dá)等方面的研究。

原理：

FISH 技術(shù)的基本原理是基于核酸分子堿基配對(duì)的原則，將染色體或細(xì)胞核DNA 與探針?lè)謩e變性后，將探針雜交至靶部位，然后使用熒光顯微鏡檢測(cè)雜交信號(hào)。探針可以直接用熒光物質(zhì)標(biāo)記（直接法），也可以使用一些抗原物質(zhì)標(biāo)記，然后采用熒光標(biāo)記的抗體與探針上的標(biāo)記物結(jié)合（間接法）。相對(duì)而言，間接法熒光原位雜交相對(duì)應(yīng)用更廣。

 

步驟：

1. FISH樣本的制備
2. 探針的制備
3. 探針標(biāo)記
4. 雜交
5. 染色體顯帶
6. 熒光顯微鏡檢測(cè)
7. 結(jié)果分析  
8. 流程圖：

9. 

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