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甲基化測量方法

基甲基化檢測主要幾種:

甲基化特bai異性PCR(Methylation-specific PCRMSP)

用亞硫酸氫鹽處理基組DNA所未發(fā)甲基化胞嘧啶轉化尿嘧啶甲基化胞嘧啶變;隨設計針甲基化非甲基化序列引物進行PCR通電泳檢測MSP擴增產物用針處理甲基化DNA鏈引物能擴增片段則說明該位點存甲基化;反說明檢測位點存甲基化

2、亞硫酸氫鹽測序(Bisulfite sequencing PCRBSP)

用亞硫酸氫鹽處理基組DNA則未發(fā)甲基化胞嘧啶轉化尿嘧啶甲基化胞嘧啶變隨設計BSP引物進行PCR擴增程尿嘧啶全部轉化胸腺嘧啶PCR產物進行測序判斷CpG位點否發(fā)甲基化稱BSP-直接測序PCR產物克隆至載體進行測序提高測序功率種稱BSP-克隆測序

3、甲基化敏擴增態(tài)性

(Methylation-Sensitive Amplified Polymorphism,MSAP)

MSAP利用DNA甲基化敏兩種同裂酶Hpa IIMsp I基組DNA進行酶切連接由于兩種酶能夠識別相同限制性酶切位點即CCGG位點DNA序列CCGG位點現(xiàn)同程度甲基化狀態(tài)別兩種酶識別產物式體現(xiàn)

4、焦磷酸測序(Pyrosequencing)

通準確定量單連續(xù)CpG 位點甲基化頻率焦磷酸測序能檢測并定量甲基化水平細微改變序列延伸程根據(jù)CT摻入量定量確定單位點C-T比例同位點甲基化變異能準確檢測由于焦磷酸測序提供真實序列數(shù)據(jù)甲基化狀態(tài)序列形式呈現(xiàn)

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