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食品伙伴網(wǎng)于2020年3月21-22日主辦的“微生物檢測技術(shù)網(wǎng)絡(luò)研討會”已圓滿結(jié)束！

3月21日上午，食品伙伴網(wǎng)特邀合肥天麥生物科技發(fā)展有限公司王世福老師就“培養(yǎng)基質(zhì)量控制淺談”方面與大家進(jìn)行了分享。聽課的小伙伴在學(xué)習(xí)的過程中也提出了自己實(shí)際工作中的一些疑問。對小伙伴們的疑問，王老師也進(jìn)行了仔細(xì)認(rèn)真的解答。今天小編把王老師集中答疑的內(nèi)容分享給大家。

01

如果使用的是標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的菌株（ATCC），自然應(yīng)該是名稱和菌株號都完全對應(yīng)上最好；如果使用的不是ATCC的菌株，名稱需要一致，菌株號需要具有等效性。

我發(fā)言中舉了例子，比如說：標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定使用大腸埃希氏菌ATCC25922，你不能使用同一名稱但是編號不一樣的ATCC8739、ATCC35218、ATCC98082之類的。雖然同樣來源自ATCC，都是“大腸埃希氏菌”，但是在生化特性上是有差異的。你可以使用非ATCC的菌株，但請注意兩種菌株的等效性，如FSCC149002=ATCC25922，是允許的。需要菌種保藏中心或菌株供貨商提供相應(yīng)的證明文件。

02

如果你的實(shí)驗室不使用商品化預(yù)制成品即用型培養(yǎng)基，你不需要做無菌試驗。使用的是自制培養(yǎng)基或商品化脫水合成培養(yǎng)基的話，這兩種都不可能在你配制滅菌前是無菌。只要驗證其滅菌效果，在配制滅菌后使用時同步開展空白試驗即可。

03

首先需要說明一點(diǎn)——嚴(yán)格意義上的“配方一致”，指的不僅僅是組分物質(zhì)的一致，更應(yīng)該是組分物質(zhì)的含量一致。所以組分含量不一致的配方，實(shí)際上是兩個配方。

其次，除非你是自制培養(yǎng)基，按照原始配方進(jìn)行稱量配制，否則，使用商品化培養(yǎng)基的話，不涉及組分中單組分的含量的調(diào)整。

再次，培養(yǎng)基配方中可以調(diào)整含量的組分，通常是天然物質(zhì)、加工過的物質(zhì)或其他不純的化學(xué)物質(zhì)（GB 4789.28-2013附錄C所列），其他的分子結(jié)構(gòu)和純度確定的組分含量一般不需要也不應(yīng)該調(diào)整。

綜上，培養(yǎng)基配方與標(biāo)準(zhǔn)要求一樣，但是量不一樣，作為檢驗用培養(yǎng)基來說，一般不可以！作為研究性質(zhì)來使用的話，另當(dāng)別論！

04

當(dāng)然可以。我們要求廠家提供培養(yǎng)基的質(zhì)檢報告，不是僅僅流于形式，為了存檔而存檔；應(yīng)該是基于實(shí)驗室通過該份質(zhì)檢報告獲得培養(yǎng)基質(zhì)量溯源性證明的相關(guān)信息和內(nèi)部質(zhì)量控制水平的不斷提高這兩種目的而采用的一種方式。

05

如果從“全生命周期”的培養(yǎng)基質(zhì)量保證的理念來看，培養(yǎng)基質(zhì)控的時機(jī)不是在某個階段（比如說驗收入庫）集中完成的。相應(yīng)的符合管理要求規(guī)定的驗收，是應(yīng)該在入庫之前完成，但是技術(shù)性的性能測試，需要根據(jù)培養(yǎng)基儲存和使用的情況來適時開展。

舉個通俗的例子：不能為了做性能測試，而將本來不需要馬上開封的培養(yǎng)基開封！這樣的做法是為了做質(zhì)控而做質(zhì)控！要明確我們做質(zhì)控的最終目的是為了驗證使用時其性能正常，不是為了完成一個流程而做的形式主義的事情。

另，實(shí)驗室按照廠家提供的儲存條件嚴(yán)格執(zhí)行，在此期間，開封后發(fā)現(xiàn)有質(zhì)量問題，這應(yīng)該屬于廠家需要承擔(dān)質(zhì)量責(zé)任的情況！不是說，入了實(shí)驗室的庫房，就一定退不了貨的！如果退不了貨，要么是你實(shí)驗室的管理流程刻板教條，要么是可以考慮是不是需要更換廠家了！

06

生物試劑是指從生物中提取的。生物試劑蛋白胨是純品蛋白胨，可以作為培養(yǎng)基單組分的原材料來使用。

生化試劑是指生物試劑和化學(xué)試劑合成的試劑，生化試劑的蛋白胨里面還有磷酸鹽和其他成分，不是純蛋白胨。

根據(jù)你的描述，貌似是采用自制培養(yǎng)基的方式，用各個組分配制成中和劑，建議綜合考慮性價比和非純品中的成分對于最終配制出的中和劑的功能有無不良影響，再確定購買哪一種。

07

這個問題不好回答，畢竟我沒有在你們現(xiàn)場看過你們整個操作過程，也見不到你所表述的“長得都不好”到底是咋個不好法，是具體的G值不達(dá)標(biāo)呢？還是每條線的生長情況不好判斷呢？

只能粗略談一談：

1）人員：我發(fā)言中特地提到了半定量劃線接種法，不論是6線，還是16條線的，整個結(jié)果與實(shí)驗者的操作是否規(guī)范是密切相關(guān)的（接種環(huán)直徑、菌液取量、接種角度、力度等），應(yīng)嚴(yán)格按操作規(guī)范進(jìn)行操作。

2）兩種測試菌株使用的菌株號對不對？本身的活力和特性有沒有經(jīng)過驗證？

3）工作菌懸液的制備是否正確：工作菌懸液不要用菌苔來制備，應(yīng)用非選擇性肉湯的培養(yǎng)物，活菌含量約為10? ～10?CFU/mL。

4）接種量是否正確：標(biāo)準(zhǔn)要求采用1μL接種環(huán)劃線接種。接種環(huán)的規(guī)格有沒有使用正確？

5）對于將德氏乳桿菌保加利亞亞種CICC6032和嗜熱鏈球菌IFFI 6038作為目標(biāo)菌來測試的目的，接種環(huán)在分區(qū)時不需要滅菌。

6）培養(yǎng)條件是否正確？除了培養(yǎng)溫度和時間的要求以外，請注意乳桿菌接種在MRS培養(yǎng)基上是需要厭氧培養(yǎng)的，實(shí)驗室厭氧培養(yǎng)的條件是否滿足？

08

首先，網(wǎng)友的這個問題太宏大，不是一兩句話可以定論的。

其次，同一種培養(yǎng)基，配方有變動時，對于實(shí)驗結(jié)果肯定是有影響的。關(guān)鍵是這種影響是有多大？是正向的影響？還是負(fù)面的影響？不同培養(yǎng)基改變組分，同一種培養(yǎng)基改變不同的組分，同一種組分改變不同的含量，對實(shí)驗結(jié)果的影響是需要靠數(shù)據(jù)來說話的，不能一概而論！

再次，對于實(shí)驗室來說，我網(wǎng)絡(luò)交流中也提到了CNAS-CL01-A001:2018標(biāo)準(zhǔn)中明確規(guī)定了培養(yǎng)基生產(chǎn)廠商在任何時候?qū)ε囵B(yǎng)基配方做出改變時，都應(yīng)該告知使用者。告知的主要內(nèi)容不限于僅僅通知一下配方變化，更應(yīng)該說明配方變化對培養(yǎng)基性能及實(shí)驗室使用后的實(shí)驗結(jié)果有什么影響。這個是生產(chǎn)廠商應(yīng)有的義務(wù)。

最后，回歸到使用者角度來說，實(shí)驗室應(yīng)該首選與檢驗標(biāo)準(zhǔn)中配方的規(guī)定相符合的商品化培養(yǎng)基。如果是采用自制培養(yǎng)基的使用方式，則請嚴(yán)格按照配方配制，包括一定精確度下的重量和體積的量取。

09

你在驗收環(huán)節(jié)對商品化培養(yǎng)基測定pH值，除非你使用的是商品化預(yù)制成品即用型培養(yǎng)基。因為成品培養(yǎng)基測定pH，才是最有意義的。如果是商品化脫水合成培養(yǎng)基，我不知道你在驗收時怎么測pH值？沒有配制和滅菌，你能對干粉或者顆粒形態(tài)的培養(yǎng)基測定pH值嗎？不可能。最起碼也得在脫水合成培養(yǎng)基通過配制變成液體形態(tài)（有沒有滅菌姑且不論）時，才是可以測量pH值的。

其次，滅菌前要不要測pH值，需要視實(shí)際情況而論；但是滅菌后，是需要測pH值，這時的pH值才是真正意義上我們可以使用的成品培養(yǎng)基的pH值，才具有質(zhì)控的意義。

10

其實(shí)道理很簡單——把培養(yǎng)基作為一種產(chǎn)品，比照食品保質(zhì)期內(nèi)留樣復(fù)測，或者藥品有效期內(nèi)穩(wěn)定性測試的方式進(jìn)行驗證。設(shè)置合理的性能復(fù)測的時間節(jié)點(diǎn)，直到得出最后一次復(fù)測性能不合格的結(jié)果，那么該次復(fù)測之前的上一次復(fù)測合格結(jié)果所對應(yīng)的時間節(jié)點(diǎn)就是可以用來確定培養(yǎng)基貯存有效期的終點(diǎn)時間。

另，不需要做所謂的加速或者挑戰(zhàn)實(shí)驗，只要按照該培養(yǎng)基正常的貯存條件來開展這個驗證即可。

12

我相信這一桶一桶的蒸餾水，不太可能是你跟廠家提出需求，廠家按照你要準(zhǔn)備將其用于微生物實(shí)驗室配制培養(yǎng)基用水這個的目的而特供給你的。所以，就算這個蒸餾水在具體的指標(biāo)上滿足微生物實(shí)驗室要求，但是廠家提供的檢驗報告上的相關(guān)信息也有可能會缺失部分指標(biāo)及其結(jié)果而不能滿足你對于實(shí)驗用水的質(zhì)控要求。

微生物實(shí)驗室用水，檢測非常簡單，只有兩個基本指標(biāo)，一個是物理性質(zhì)的電導(dǎo)率（或電阻率），一個是微生物污染指示性質(zhì)的菌落總數(shù)。對于任何一個實(shí)驗室，這兩個項目都沒有什么技術(shù)難度。

13

首先，需要每批都測的不是配制時的pH值,而是滅菌后成品培養(yǎng)基的pH值。

其次，要按照每個滅菌批次對滅菌后的成品培養(yǎng)基測定pH值是硬性規(guī)定，具體實(shí)施起來不存在任何技術(shù)和管理上的困難。

14

這個問題提的非常好！

首先，滅菌前后培養(yǎng)基的pH值肯定有變化，關(guān)鍵是這個變化，是不是可接受？需要以成品培養(yǎng)基規(guī)定的pH±0.2為準(zhǔn)！

其次，如果是使用商品化脫水合成培養(yǎng)基的話，其滅菌前后的pH值，只要我們嚴(yán)格控制了配制用水的質(zhì)量，一般不會變化很大，滅菌后的成品培養(yǎng)基基本都能落在規(guī)定范圍內(nèi)（當(dāng)然，渣品牌的除外?。?。

再次，如果是自制培養(yǎng)基，需要實(shí)驗室自己摸索一下，看看要使得滅菌后成品培養(yǎng)基的pH值在范圍內(nèi)的話，那么滅菌前配制時的pH有多少，如果需要調(diào)整的話，按照什么一個幅度來調(diào)整。每一種培養(yǎng)基，可能都不太一樣。

總之，培養(yǎng)基的pH值測定，是以滅菌后冷卻到25℃時的成品培養(yǎng)基的結(jié)果為準(zhǔn)的！

15

你對SC和BS的配制方式的理解有偏差。不能過度煮沸，不是不能煮沸，只要控制煮沸的程度即可，不要暴沸，也不要長時間過度加熱一直沸騰。用微波配合電爐的方式，煮沸后，稍稍放冷，再煮沸一次即可。

就事論事，SC和BS這兩種培養(yǎng)基由于配方中的成分需要加熱才能完全溶解的原因，不加熱，直接過濾除菌，可能沒法達(dá)到預(yù)期的效果。

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這個問題問得有點(diǎn)奇怪！你這樣做的目的是什么？是什么培養(yǎng)基放在50℃左右的培養(yǎng)箱呢？是滅菌后倒好了平板的固體培養(yǎng)基，放在50℃左右的培養(yǎng)箱中嗎？

如果是這樣，我猜你的目的是干燥培養(yǎng)基的表面吧？只有馬上要使用的平板培養(yǎng)基，如果表面有水汽或者水珠，才需要對其進(jìn)行干燥。方式可以是放在20至50度的烘箱或培養(yǎng)箱中烘干，也可以是放在超凈臺中利用其送風(fēng)吹干。首選后一種方式，可以避免干燥中引入污染。

至于其他的培養(yǎng)基，或者不是出于干燥目的的，滅好菌的培養(yǎng)基在放冷后，只要不是當(dāng)時使用，肯定是放入冷藏冰箱儲存，跟培養(yǎng)箱沒有任何關(guān)系！

17

微生物實(shí)驗室的染菌廢棄物，包括培養(yǎng)基，自己121度30分鐘滅菌僅僅是使其微生物危害得到了控制，但是培養(yǎng)基作為本身是一種化學(xué)物質(zhì)所具有的化學(xué)品危害并沒有得到有效控制。雖然實(shí)驗室有時候也會采取一些簡單的處理方式來控制化學(xué)危害，比如生化鑒定項目氰化鉀實(shí)驗的培養(yǎng)基，含有劇毒物質(zhì)氰化鉀，我們可以用氫氧化鈉來反應(yīng)處理，但是畢竟這種措施的處理非常粗放。因此，有必要將其集中存放后交由有資質(zhì)的固廢處理機(jī)構(gòu)來處置。

不論你是企業(yè)的實(shí)驗室，還是檢驗檢測機(jī)構(gòu)，都有保護(hù)環(huán)境的社會責(zé)任。很多時候，這種責(zé)任是被外部的監(jiān)管部門上升到了應(yīng)承擔(dān)的法律責(zé)任的高度。一定要記?。簩?shí)驗室的廢棄物，絕不能與生活垃圾同日而語。一個實(shí)驗室產(chǎn)生的對環(huán)境有害的廢棄物，在數(shù)量和程度上不會比一個小工廠要來得少！

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第一句問得我差點(diǎn)以為你對培養(yǎng)基的質(zhì)控，是挑著批次來做的，而不是每批次都進(jìn)行。

第二句的問題，其實(shí)是需要理解“質(zhì)控”一次的概念內(nèi)涵，不論是入庫驗收，還是感官檢查，抑或具體的技術(shù)性方面的性能測試，都屬于質(zhì)控的內(nèi)容。我在交流中解釋了“培養(yǎng)基或試劑的批量”這個概念，同一生產(chǎn)批次的培養(yǎng)基，其質(zhì)量應(yīng)該是相對穩(wěn)定且一致的，當(dāng)然做一次性能測試就可以反映整批的質(zhì)量水平了。每開封一瓶就做一次性能測試，那是浪費(fèi)人力物力。但是每一瓶開封時的感官檢查，還是必需的。

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需要糾正你的一個表述錯誤——作為一種比較新的菌種保藏方式與介質(zhì)，是瓷珠，不是具有磁性的或者是免疫親和性質(zhì)的“磁珠”。這個術(shù)語的文字表述不正確，反應(yīng)了使用者對其原理不甚了解的情況。

瓷珠，是類似于玻璃性質(zhì)的陶瓷材質(zhì)的中間有小孔的珠子，靠得是材質(zhì)的吸附能力將要保存的菌吸附在其表面。保藏之前，需要將其小孔中的多余的混懸液全部吸出。恢復(fù)使用時，雖然可以將菌種瓷珠直接接種于固體培養(yǎng)基或適量的液體培養(yǎng)基中，但是由于培養(yǎng)基性能測試所使用的菌株有特定的接種量和接種方式，所以需要制備準(zhǔn)確定量的菌懸液，不能簡單的使用。