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乳腺癌是女性癌癥死亡的第二大原因，具有不同的病理組織學(xué)特征和高度的遺傳變異，是一類異質(zhì)性疾病¹，其預(yù)后亦是多樣。因此，解析乳腺癌生物學(xué)進(jìn)程，制定有效靶向治療方案至關(guān)重要?；蚪M不穩(wěn)定狀態(tài)是可用于靶向治療的潛在Marker²，封閉基因組不穩(wěn)定性信號(hào)通路能增強(qiáng)抗癌藥物的療效³。該研究小組發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌形成中，蛋白激酶p38α以DNA損傷修復(fù)調(diào)節(jié)因子CtIP為底物，通過促進(jìn)其磷酸化調(diào)節(jié)DNA損傷響應(yīng)，抑制染色體不穩(wěn)定性，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，抑制p38α通過提高染色體不穩(wěn)定性來加強(qiáng)紫杉烷類抗癌藥的治療效果。

一、知識(shí)積累

1，染色體不穩(wěn)定性（chromosomal instability ，CIN）⁴：是基因組不穩(wěn)定狀態(tài)的一種，指的是染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)目的改變，可由DNA損傷修復(fù)異常、細(xì)胞周期檢驗(yàn)失控以及染色質(zhì)分離異常引起，其典型Marker是中心粒增加，出現(xiàn)多極有絲分裂。

2，p38α（Mapk14）：屬于MAPK家族，廣泛表達(dá)的蛋白激酶，在壓力響應(yīng)時(shí)，參與胞外信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，產(chǎn)生不同的生物學(xué)效應(yīng)，通常與細(xì)胞存活相關(guān)。在正常上皮細(xì)胞中，p38α可作為腫瘤抑制因子⁵，但在一些癌癥中⁶，抑制p38α卻能抑制細(xì)胞增殖。

3，EPCAM（epithelial cell compartment）⁷：指的是epithelial cell adhesion molecule，上皮細(xì)胞粘附因子，又稱CD326，在上皮癌變過程中發(fā)揮重要作用。

4，γ-H2AX：又稱p-H2AX，是DNA雙鏈斷裂（double-strand breaks，DSBs）的Marker；

5，微核（micronuclei）⁸：也叫衛(wèi)星核，是真核類生物細(xì)胞中的一種異常結(jié)構(gòu)，是染色體畸變?cè)陂g期細(xì)胞中的一種表現(xiàn)形式，一般認(rèn)為微核是由有絲分裂后期喪失著絲粒的染色體斷裂產(chǎn)生。

6，8-hydroxy-2’-deoxyguanosine（8-OHDG）：8-羥基脫氧鳥苷，作為內(nèi)源性及外源性因素引起DNA氧化損傷的生物標(biāo)志物。

7，喜樹堿（camptothecin ，CPT）和依托泊苷（etoposide）：前者選擇性抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ，后者在作用于DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ，可在S期誘導(dǎo)DNA DSBs損傷。

8，紫杉醇（paclitaxel）和多西他賽（docetaxel）：屬于紫杉烷類，可誘導(dǎo)增殖細(xì)胞有絲分裂異常，增加CIN。

9，順鉑（cisplatin）和奧沙利鉑（oxaliplatin）：以DNA為靶作用部位，鉑原子與DNA形成交叉聯(lián)結(jié)，拮抗其復(fù)制和轉(zhuǎn)錄。

10，三陰性乳腺癌（triple-negative breast tumors）：指雌激素受體、孕激素受體及人表皮生長因子受體2均陰性的乳腺癌；

11，DNA損傷響應(yīng)（DNA damage response ，DDR）、CIN和DNA復(fù)制壓力的關(guān)系：

①DNA損傷引起DDR，正常情況下抑制CIN的積累；

②DNA復(fù)制壓力增加染色體斷裂，促進(jìn)CIN積累；DNA復(fù)制壓力通常導(dǎo)致ssDNA（single-stranded DNA）增加，延緩或者停止DNA復(fù)制及合成進(jìn)程，而ssDNA能被RPA（replication protein A）識(shí)別，激活A(yù)TR和ChK1激酶，中和復(fù)制壓力。

二、主要材料和實(shí)驗(yàn)方法

1，  動(dòng)物模型

（1）MMTV-PyMT Tumor Model⁹：MMTV是導(dǎo)致小鼠乳腺腫瘤的病毒，利用其病毒組織特異性啟動(dòng)子和增強(qiáng)子，介導(dǎo)癌基因PyMT在小鼠乳腺高表達(dá)而發(fā)生乳腺癌。一般情況下，該轉(zhuǎn)基因小鼠在2.5~3月齡時(shí)腫瘤可達(dá)到150-200mm³。

（2）Patient Derived Xenografts (PDXs)：使用病人來源的腫瘤細(xì)胞接種雌性NOD/Scid鼠，當(dāng)腫瘤生長至約1500mm³后，在胎牛血清中將其切割成2~3mm大小，移植到5~6周齡的雌性NOD/Scid鼠乳腺。

2，  細(xì)胞系

（1）原代分離：PyMT誘導(dǎo)的乳腺癌組織經(jīng)過膠原酶A分解，70μM孔徑的細(xì)胞濾網(wǎng)過濾，最后富集上皮細(xì)胞，其上皮狀態(tài)用EPCAM-FITC通過流式細(xì)胞術(shù)確定，詳見文章；

（2）293T細(xì)胞系；

3，  轉(zhuǎn)基因小鼠：在PyMT轉(zhuǎn)基因鼠的背景下構(gòu)建Mapk14敲除鼠，在乳腺癌形成后，

腹腔注射4-hydroxytamoxifen（4-OHT）激活Cre酶，介導(dǎo)Mapk14敲除；

（1）Mapk14^+/+UbCre：WT；

（2）Mapk14^lox/lox：WT；

（3）Mapk14^lox/lox UbCre：Mapk14敲除鼠。

4，  實(shí)驗(yàn)方法

（1）腫瘤模型中給藥途徑：腹腔注射和灌胃，詳見文章；

（2）免疫組化；（3）FISH：fluorescence in situ hybridization，熒光標(biāo)記的原位雜交技術(shù)；

（4）蛋白質(zhì)免疫印跡（WB）；（5）BrdU染色：標(biāo)記增殖細(xì)胞；

（6）Annexin V染色：標(biāo)記凋亡細(xì)胞；（7）免疫熒光；

（8）中性彗星實(shí)驗(yàn)（Neutral COMET Assay）：測定DNA雙鏈斷裂；

（9）堿性彗星實(shí)驗(yàn)（Alkaline COMET Assay）：測定DNA單鏈斷裂；

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1，  p38α是小鼠乳腺癌生長所必須的

為確定p38α是否在乳腺癌形成過程中起關(guān)鍵作用，該研究小組在PyMT轉(zhuǎn)基因小鼠背景下構(gòu)建了Mapk14敲除鼠（p38α△），如圖1A所示，敲除p38α后，腫瘤逐漸減小，在15天時(shí)沒有明顯腫瘤，但對(duì)照組小鼠腫瘤逐漸增大，WB檢測p38α敲除鼠中p38α基本不表達(dá)（如圖1B），進(jìn)一步的免疫組化顯示，如圖1C，與WT相比，p38α敲除鼠的腫瘤區(qū)域小，增殖細(xì)胞少（Ki67標(biāo)記增殖細(xì)胞），凋亡細(xì)胞增多（Tunel標(biāo)記凋亡細(xì)胞），DNA損傷加重（γ-H2AX增加）。有趣的是在Mapk14敲除鼠中停止4-OHT腹腔注射后，乳腺癌慢慢生長（如圖1D），因此，p38α是小鼠乳腺癌生長所必須的。與預(yù)期的一致，腫瘤生長與EPCAM相關(guān)（如圖1E），進(jìn)一步分析Mapk12（Exon2）在基因組的敲除情況，如圖1F，在15天時(shí)，約25%上皮細(xì)胞仍含有Mapk12（Exon2），而在40天時(shí)，大部分上皮細(xì)胞都含有Mapk12（Exon2），這提示我們存留的表達(dá)p38α的上皮細(xì)胞具有生長優(yōu)勢(shì)，能重新形成乳腺癌。

2，  腫瘤來源的上皮細(xì)胞培養(yǎng)能重現(xiàn)乳腺癌的關(guān)鍵特征

為進(jìn)一步研究p38α在乳腺癌中的作用，該研究小組分離了小鼠乳腺癌細(xì)胞，并對(duì)其進(jìn)行鑒定，如圖2A，PyMT來源的細(xì)胞系表現(xiàn)與PyMT乳腺癌相似的分子marker表達(dá)，即原代培養(yǎng)細(xì)胞系可重現(xiàn)體內(nèi)乳腺癌關(guān)鍵特征。使用4-OHT處理培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞，仍能顯著敲除p38α（如圖2B），抑制克隆形成實(shí)驗(yàn)（如圖2C），減少DNA復(fù)制（如圖2D），促進(jìn)細(xì)胞凋亡（如圖2E），引起DNA損傷（如圖2F），因此，p38α對(duì)于乳腺癌細(xì)胞生存至關(guān)重要。

圖1 p38α對(duì)于PyMT誘導(dǎo)的乳腺癌形成至關(guān)重要

3，  p38α敲除誘導(dǎo)DNA損傷和破壞DNA復(fù)制

該研究小組在培養(yǎng)的乳腺癌細(xì)胞中通過免疫熒光進(jìn)一步確定，敲除p38α引起γ-H2AX上調(diào)，如圖3A，仔細(xì)觀察可見，γ-H2AX并不局限于細(xì)胞核，在DNA bridges和微核（micronuclei）中也存在，這提示在細(xì)胞分裂時(shí)DSBs導(dǎo)致染色體分離異常，另一個(gè)DSBs的marker 53BP1在p38α敲除時(shí)也是顯著上調(diào)（如圖3B）。為進(jìn)一步確定DNA斷裂情況，該研究小組實(shí)施了中性和堿性彗星實(shí)驗(yàn)，分別如圖3C和3D，敲除p38α導(dǎo)致DSBs和DNA單鏈斷裂（single strand breaks，SSBs），因此，敲除p38α誘導(dǎo)DNA損傷。為確定DNA損傷是否由氧化損傷引起，該研究小組首先檢測了活性氧（reactive oxygen species，ROS）和8-OHDG水平，并未發(fā)現(xiàn)其上調(diào)（詳見Figure S3A~S3B），即p38α敲除誘導(dǎo)DNA損傷并非由氧化應(yīng)激引起。

圖2 源自PyMT誘導(dǎo)形成的乳腺癌的細(xì)胞體外可重現(xiàn)體內(nèi)細(xì)胞表型

DNA復(fù)制缺陷以及DNA復(fù)制壓力都能導(dǎo)致ssDNA（單鏈DNS）和SSBs積累以及復(fù)制叉停留，這些都可促進(jìn)DSBs形成，相反，DNA損傷能激活細(xì)胞周期檢驗(yàn)點(diǎn)進(jìn)而阻礙DNA復(fù)制進(jìn)程。該研究小組使用胸腺嘧啶類似物CIdU和IdU標(biāo)記新合成的DNA，如圖3E，敲除p38α抑制DNA纖維延伸，這可能是由于復(fù)制速度降低或者復(fù)制停留引起，雙向追蹤顯示p38α敲除細(xì)胞中不對(duì)稱復(fù)制叉顯著高于對(duì)照組（如圖3F），這提示在p38α敲除細(xì)胞中存在高頻率的復(fù)制叉停留。

以上數(shù)據(jù)表明，敲除p38α通過增加復(fù)制叉停留而引起非ROS誘導(dǎo)的DNA損傷，從而抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖和生存。

4，  敲除p38α通過阻礙ATR信號(hào)通路抑制DNA損傷修復(fù)

由于p38α敲除導(dǎo)致復(fù)制叉停留及DNA損傷，該研究小組檢測了DNA損傷響應(yīng)。RPA和Chk1是ATR的底物，兩者的磷酸化在響應(yīng)DNA復(fù)制相關(guān)的DNA損傷中起著關(guān)鍵的作用¹⁰。激活A(yù)TR-Chk1信號(hào)通路及促進(jìn)同源重組修復(fù)（homologous recombination (HR)-mediated repair）的關(guān)鍵步驟是將細(xì)胞核內(nèi)DSBs切割成ssDNA，被RPA能識(shí)別結(jié)合。使用喜樹堿（camptothecin ，CPT）處理WT和p38α△細(xì)胞，如圖4A，與WT細(xì)胞，p38α△細(xì)胞中p-RPA和p-Chk1顯著降低，而這提示敲除p38α抑制了ATR信號(hào)通路的激活。接著，該研究小組統(tǒng)計(jì)了CPT處理后的WT和p38α△細(xì)胞核內(nèi)RPA foci的數(shù)量，如圖4B，在基礎(chǔ)狀態(tài)（未進(jìn)行CPT處理）時(shí)，與WT相比，p38α△細(xì)胞核內(nèi)大于50個(gè)RPA foci的細(xì)胞比例較多，這提示p38α敲除促進(jìn)ssDNA形成，然而，在CPT處理時(shí)，與WT相比，p38α△細(xì)胞核內(nèi)大于50個(gè)RPA foci的細(xì)胞比例較少，這提示DNA切除修復(fù)受損。

圖3 癌細(xì)胞敲除p38α促進(jìn)DNA損傷和破壞DNA復(fù)制進(jìn)程

由于RPA信號(hào)通路是RAD51組裝和DSBs修復(fù)所必需的，該研究小組檢測RAD51的招募情況，如圖4C，與WT細(xì)胞相比，CPT處理p38α△細(xì)胞后，RAD51⁺細(xì)胞比例減少，與同源重組效率測定結(jié)果一致，與WT細(xì)胞相比，p38α△細(xì)胞的同源重組效率少于50%（如圖4D），因此，DNA損傷后HR活性降低。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，CtIP是促進(jìn)DNA末端切除的關(guān)鍵因子¹¹，其SP/TP位點(diǎn)的磷酸化控制DSB切除活性，這些位點(diǎn)是p38α活性的潛在位點(diǎn)。該研究小組將CtIP與p38α進(jìn)行孵育，通過質(zhì)譜分析其產(chǎn)物，發(fā)現(xiàn)p38α能直接對(duì)CtIP的S276、T315和S327位點(diǎn)（調(diào)節(jié)活性）進(jìn)行磷酸化修飾，更重要的是CtIP的T847位點(diǎn)發(fā)生了磷酸化修飾，這一位點(diǎn)是ssDNA產(chǎn)生、RPA招募及磷酸化的關(guān)鍵位點(diǎn)（詳見Figure S4A），該研究小組通過WB進(jìn)一步驗(yàn)證了質(zhì)譜結(jié)果，如圖4E，p38α與CtIP孵育后，促進(jìn)T847磷酸化。如圖4F，與WT細(xì)胞相比，p38α△細(xì)胞中CtIP-Pt847顯著降低，免疫熒光進(jìn)一步確定這一結(jié)果，在基礎(chǔ)狀態(tài)時(shí)，與WT相比，CtIP-pT847陽性細(xì)胞在p38α△細(xì)胞中顯著降低（如圖4G）。為確定CtIP磷酸化對(duì)于p38α敲除后表型的作用，該研究小組構(gòu)建了模擬CtIP-T847磷酸化的蛋白CtIP-T847E，如圖4H，在p38α△細(xì)胞中，過表達(dá)CtIP-T847E可降低γ-H2AX陽性細(xì)胞，即減輕DNA損傷，此外，在p38α△細(xì)胞中，過表達(dá)CtIP-T847E可促進(jìn)DNA復(fù)制（如圖4I），因此，CtIP-pT847對(duì)于p38α敲除后的細(xì)胞表型起關(guān)鍵作用。

以上證據(jù)表明，p38α直接對(duì)CtIP-T847磷酸化，是調(diào)節(jié)DNA切割所必需的；p38α敲除后，細(xì)胞的HR受損，ATR信號(hào)通路被抑制，增加復(fù)制叉停留及誘導(dǎo)DNA損傷。

圖4 在癌細(xì)胞中p38α是DDR和HR響應(yīng)所必需的

5，  在腫瘤上皮細(xì)胞中敲除p38α增加染色體不穩(wěn)定性（CIN）

復(fù)制壓力和DNA損傷被認(rèn)為是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞CIN的主要原因，導(dǎo)致染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)的改變12。該研究小組檢測了WT細(xì)胞和p38α△細(xì)胞中染色體非整倍性（aneuploidy），如圖5A和5B，染色體的非整倍性在p38α△細(xì)胞中顯著增加。如圖5C和5D，DNA bridges和微核在p38α△細(xì)胞中顯著增加，此外，在p38α△細(xì)胞中中心粒數(shù)目（如圖5E）和多極分裂（如圖5F）顯著增加，因此，在乳腺癌細(xì)胞中，敲除p38α導(dǎo)致有絲分裂畸變、胞質(zhì)分裂異常和增加染色體非整倍性，這與DNA損傷以及復(fù)制壓力是一致的。染色體結(jié)構(gòu)變異是由于有絲分裂前期DNA bridges和染色體片段沒有中心粒牽拉引起的，而中心粒滯后標(biāo)記染色體結(jié)構(gòu)則常暗示有絲分裂障礙¹²。為確定有絲分裂前期中心粒情況，該研究小組使用中心粒抗體（anti-centromere antibody ，ACA）標(biāo)記中心粒，如圖5G，在p38α△細(xì)胞中，大多數(shù)有絲分裂異常（約72%）中存在DNA bridges，但只有26%染色體能被ACA染色，這提示在p38α△細(xì)胞中，有絲分裂缺陷導(dǎo)致分離錯(cuò)誤，但不能確定有絲分裂障礙在其中的貢獻(xiàn)多大。最后，該研究小組通過免疫組化分析了體內(nèi)敲除p38α后CIN的情況，如圖5F，與WT相比，敲除p38α后，DNA bridges顯著增加。因此，p38α在乳腺癌組織和細(xì)胞中都能抑制CIN的形成。

圖5敲除p38α誘導(dǎo)染色體不穩(wěn)定

6，  在小鼠乳腺癌中抑制p38α增強(qiáng)誘導(dǎo)CIN藥物的細(xì)胞毒性

以上數(shù)據(jù)表明，p38α能控制DSB修復(fù)和CIN，因此，靶向抑制p38α或許能增強(qiáng)癌細(xì)胞對(duì)可誘導(dǎo)復(fù)制相關(guān)的DSBs或增加染色體分離錯(cuò)誤的藥物的敏感性。為驗(yàn)證這一假設(shè)，該研究小組使用紫杉醇（paclitaxel）和多西他賽（docetaxel）［這兩種藥物可增加染色體分離錯(cuò)誤］、喜樹堿（camptothecin ，CPT）和依托泊苷（etoposide）［這兩種藥物促進(jìn)DSBs形成］、順鉑（cisplatin）和奧沙利鉑（oxaliplatin）［這兩種藥物抑制DNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄］這些藥物聯(lián)合p38α抑制劑（PH797804 ，PH； LY2228820 ，LY；SB203580 ，SB）處理小鼠乳腺癌細(xì)胞。

圖6 在PyMT誘導(dǎo)的乳腺癌中抑制p38α增強(qiáng)紫杉醇和多西他賽抗癌效應(yīng)

如圖6A，在抑制p38α的前提下，紫杉醇和多西他賽、喜樹堿和依托泊苷的IC50藥物濃度顯著降低，這提示抑制p38α的確可以增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)可誘導(dǎo)復(fù)制相關(guān)的DSBs或增加分離錯(cuò)誤的藥物的敏感性，但并不影響其他作用機(jī)制抗癌藥物（順鉑和奧沙利鉑）。如圖6B，單獨(dú)使用p38α抑制劑PH、LY、SB或者紫杉醇和多西他賽對(duì)癌細(xì)胞的凋亡基本影響不大，但是當(dāng)抑制劑與紫杉醇和多西他賽聯(lián)合使用時(shí)，顯著促進(jìn)癌細(xì)胞的凋亡。接著，該研究小組分別使用紫杉醇/多西他賽和PH以及聯(lián)合用藥治療乳腺癌小鼠，如圖6C，聯(lián)合用藥顯著抑制腫瘤生長，這與增加的DNA損傷（如圖6D）和高比例的分離錯(cuò)誤事件（如圖6D）相一致。因此，p38α抑制劑與可誘導(dǎo)復(fù)制相關(guān)的DSBs或增加染色體分離錯(cuò)誤的藥物的聯(lián)合使用能有效治療乳腺癌。

圖7 在人乳腺癌細(xì)胞中抑制P38α增強(qiáng)紫杉烷類抗癌效應(yīng)

7，  在人乳腺癌腫瘤中抑制p38α增強(qiáng)紫杉烷類藥物抗癌效應(yīng)

為進(jìn)一步將本研究應(yīng)用于臨床，該研究小組使用9例病人來源的乳腺腫瘤構(gòu)建PDX模型，其中5例是三陰性乳腺癌（TN），4例是Luminal乳腺癌（Lum）。如圖7A，對(duì)于TN1~4和Lum1~2，與單獨(dú)使用紫杉醇相比，紫杉醇和PH聯(lián)合用藥更能抑制腫瘤生長；對(duì)于TN1~4和Lun2~3，與單獨(dú)使用多西他賽相比，多西他賽和PH聯(lián)合用藥更能抑制腫瘤生長，因此，紫杉醇和多西他賽或與p38α抑制劑聯(lián)合用藥更能有效抑制腫瘤生長。接下來，該研究小組對(duì)TN1、TN2、TN5以及Lum1、Lum2、Lum4對(duì)應(yīng)腫瘤進(jìn)一步分析，如圖7B和7C， PH797804與紫杉醇/多西他賽聯(lián)合使用增加γ-H2AX及染色體分離錯(cuò)誤事件發(fā)生率，即聯(lián)合用藥更能誘導(dǎo)DNA損傷和CIN；該研究小組通過FISH實(shí)驗(yàn)更確定了上述結(jié)果，如圖7D，PH797804與紫杉醇聯(lián)合使用增強(qiáng)了紫杉醇誘導(dǎo)的染色體非整倍性，而在TN5和Lum4中，PH797804與紫杉醇聯(lián)合使用并未增加非整倍性，這也能很好解釋為什么在藥物治療時(shí)效果不佳。為進(jìn)一步理解為什么p38α抑制沒有在多有的PDX模型中發(fā)揮作用，該研究小組分析了未進(jìn)行藥物處理的PDX模型中染色體非整倍性（如圖8A）和DNA損傷（如圖8B）以及分離錯(cuò)誤事件發(fā)生率（如圖8C），與治療有效組相比，TN5和Lum4中染色體非整倍性極少，提示染色體非整倍性是聯(lián)合用藥的關(guān)鍵特征，而γ-H2AX和染色體分離錯(cuò)誤事件發(fā)生率與藥物治療效果并無太大相關(guān)性。

圖8 p38α抑制和紫杉烷類的聯(lián)合用藥對(duì)高非整倍性的乳腺癌治療效果更好

8，  小結(jié)

紫杉烷類抗癌藥物通過誘導(dǎo)CIN以及DNA損傷抑制腫瘤生長，而靶向p38α能抑制DNA損傷修復(fù)提升復(fù)制壓力誘導(dǎo)CIN和DNA損傷，兩者聯(lián)合使用進(jìn)一步加重CIN和DNA損傷，更能有效治療乳腺癌（如圖8D）。其涉及的主要分子機(jī)制概述如下：

p38α能直接對(duì)CtIP-T847進(jìn)行磷酸化，促進(jìn)RPA的招募，參與DSB中DNA切割，激活A(yù)TR-Chk1信號(hào)通路，促進(jìn)DNA同源重組修復(fù)，而敲除后將加重DNA損傷。

此外，p38α對(duì)于細(xì)胞增殖、凋亡以及CIN也起著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用，這提示p38α可作為乳腺癌治療的靶點(diǎn)。

四、討論和思考

通過體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)，該研究小組詳細(xì)闡明了p38α對(duì)于乳腺癌形成的關(guān)鍵作用及分子機(jī)制，對(duì)于乳腺癌的治療以及科研有許多值得思考和借鑒的地方：

1，乳腺癌屬于異質(zhì)性疾病，可通過檢測乳腺癌中CIN的情況對(duì)其進(jìn)行分型，有望將p38α抑制劑與可誘導(dǎo)DNA復(fù)制相關(guān)的DSBs或增加染色體分離錯(cuò)誤的抗癌藥物聯(lián)合使用，加強(qiáng)治療效果，這也提示我們可以尋找更多不同進(jìn)程中的治療靶點(diǎn)，與其對(duì)應(yīng)藥物聯(lián)合使用以期增強(qiáng)藥物作用；

2，在進(jìn)行腫瘤動(dòng)物模型構(gòu)建時(shí)，不僅要考慮對(duì)應(yīng)人源腫瘤細(xì)胞系進(jìn)行異種移植，還可考慮使用不同病人來源的腫瘤組織細(xì)胞進(jìn)行接種，然后移植，更能真實(shí)反應(yīng)研究對(duì)象及機(jī)制是否存在個(gè)體差異，對(duì)于腫瘤分型及診治有很大的提示作用；

本文中也有一些問題值得我們思考：

1，Luminal型乳腺癌又可以分為A型和B型，本文并未詳細(xì)說明使用的4例Luminal型乳腺癌病人的具體分型，這是否會(huì)與藥物治療效果有一定關(guān)系呢？此外，其他類型的乳腺癌，例如，HER-2（+）型和Basal-like型乳腺癌中p38α又起著怎樣的作用呢？

2，本文是以PyMT誘導(dǎo)的乳腺癌為基礎(chǔ)，如果能增加臨床樣本，檢測不同乳腺癌（不同分型）p38α表達(dá)差異，進(jìn)行相關(guān)性分析，或許對(duì)于其在臨床應(yīng)用會(huì)更有幫助。