下列方法已在本實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證，復(fù)性任何包涵體，必定能得到目的蛋白：

菌體為超聲法裂解，裂解溶液中含
50mM Tris-HCl, pH 8.0，
100mM NaCl，
5mM EDTA，
0.1% NaN3，
0.5% Triton-X100，
在使用前加入 0.1mM PMSF

每250毫升裂解液中加入約50克菌體，工作15s，間隔15秒，超聲破碎45分鐘，超聲后加入10mM MgSO4 和0.1mg/ml 的溶菌酶和Dnase 0.01mg/ml，室溫放置20分鐘，6000RPM離心15分鐘，保留沉淀。

再次加入裂解液，超聲破細(xì)胞后，加溶菌酶和Dnase, 上述過程重復(fù)三次。

用下述的溶液將包涵體懸浮，離心收集包涵體。
50mM Tris-HCl, pH 8.0
100mM NaCl
5mM EDTA
0.1% NaN3

用下述溶液懸浮包涵體，離心收集包涵體。
50mM Tris-HCl, pH 8.0
100mM NaCl
5mM EDTA
0.1% NaN3
1M 尿素
如暫時(shí)不用，放入－20℃保存。

包涵體的溶解
將包涵體懸浮在下述溶液中，4℃振蕩過夜。
100mM Tris
50mM Glycine
8.5M 尿素
溶液用HCl調(diào)節(jié)到pH 8.0后加入
25mM DTT

6000RPM離心，取上清，去除不溶解物。

包涵體蛋白的復(fù)性

將溶解的包涵體裝入透析袋，在4℃下將透析袋浸入下列溶液依次透析：
0.1M Tris
0.4M L-Arginine
1 mM EDTA
0.2mM PMSF
4M 尿素 溶液pH調(diào)節(jié)到8.0
透析24小時(shí)

0.1M Tris
0.4M L-Arginine
1 mM EDTA
0.2mM PMSF
2M 尿素 溶液pH調(diào)節(jié)到8.0
透析24小時(shí)

0.1M Tris
0.4M L-Arginine
1 mM EDTA
0.2mM PMSF
1M 尿素 溶液pH調(diào)節(jié)到8.0
透析24小時(shí)

0.1M Tris
0.4M L-Arginine
1 mM EDTA
0.2mM PMSF
0 M 尿素 溶液pH調(diào)節(jié)到8.0
透析24小時(shí)

0.025M Tris
0.1M L-Arginine
0.25 mM EDTA
0.2mM PMSF
0 M 尿素 溶液pH調(diào)節(jié)到8.0
透析24小時(shí)

10mM Tris-HCl pH8.0
150mM NaCl,
1mM EDTA
0.02% NaN3.
透析24小時(shí)

透析時(shí)注意透析袋的截留分子量

下面的工作就簡(jiǎn)單了，因?yàn)閺?fù)性的蛋白已經(jīng)在生理緩沖液中，進(jìn)行陰陽離子交換層析愛怎么整就怎么整它了。