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PMSF蛋白酶抑制劑（100 mmol/L）

1. 0.0174 g溶解于1 mL異丙醇中。

PMSF嚴(yán)重?fù)p害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚，吸入、吞進(jìn)或通過皮膚吸收后有致命危險(xiǎn)。一旦眼睛或皮膚接觸了PMSF，應(yīng)立即用大量水沖洗之。凡被PMSF污染的衣物應(yīng)予丟棄。

PMSF在水溶液中不穩(wěn)定。應(yīng)在使用前從貯存液中現(xiàn)用現(xiàn)加于裂解緩沖液中。PMSF在水溶液中的活性喪失速率隨pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值為8.0時(shí)，20μl mmol/l PMSF水溶液的半壽期大約為85min，這表明將PMSF溶液調(diào)節(jié)為堿性（pH>8.6）并在室溫放置數(shù)小時(shí)后，可安全地予以丟棄。

RIPA蛋白裂解液（100 mL ）

Triton X-100              1 mL

Tris.ClpH6.8  0.5 mol/L    10 mL

EDTA                    29.225mg  (或EDTA.2Na 37.224 mg)

SDS                     0.1g

脫氧膽酸鈉              1 g

NaCl                    0.876 g

使用之前，每1 mL上述溶液中，加PMSF  5μL, cocktail 10μL。

考馬斯亮藍(lán)染色液（100 mL）

在甲醇:水:冰乙酸體積比為45:45:10，共100ml中加入0.25g的考馬斯亮藍(lán)R-250。

脫色液（30%甲醇100mL）

30 mL 甲醇 + 10 mL 冰乙酸+ 60 mL H₂O。

Trypsin（胰酶）（0.25%）

1. 0.625g胰酶溶于250 mL 1×PBS中，溶解2~3h。

EGF

儲液2ng/μL：10μLEGF (200 μg/mL)加入1mL 含0.1% BSA的10mmol/L乙酸中;

工作液10ng/mL: 10μL儲液加入到2mL培養(yǎng)液中。

BSA（蛋白標(biāo)準(zhǔn)）

1%BSA=10mg/mL=0.145 mmol/L   0.1%BSA=1mg/ml

TBS

10×TBS：

Tris.Base                   24.23 g

NaCl                      80.06g

定容到800 mL,用濃HCl調(diào)到pH7.6,再定容到1 L。

1×TBST：用10×TBS稀釋10倍，并加入0.1%（v/v）Tween 2.0。

結(jié)晶紫（1%）

1. 0.1 g結(jié)晶紫溶于10 mL甲醇。

10×TAE

Tris                        48.4 g

冰乙酸                    11.42mL

EDTA 0.5 mol/L              20 mL (或稱取2.9225 g)

加水至1 L, 調(diào)pH8.0。

雙抗培養(yǎng)液

青霉素：100 U/mL

鏈霉素：100 U/mL。

10×SDS-PAGE電泳緩沖液（1L）

Tris                         30g

甘氨酸                      144g

SDS                         10g

0.5M Tris-HCl（pH6.8,250ml，4℃保存）

Tris15.125g，HCl調(diào)節(jié)pH至6.8.

1.5M Tris-HCl（pH8.8,250ml。4℃保存）

Tris 45.5g，HCl調(diào)節(jié)pH至8.8.

甘氨酸緩沖液（250ml）

甘氨酸                      0.938g

NaCl                        2.194g

HCl調(diào)節(jié)pH至2.5，室溫保存

4×Tris-Cl/SDS（pH6.8，100ml）

Tris                         6.05g

HCl調(diào)節(jié)pH至6.8，過濾后家0.4g SDS，4℃保存

2×蛋白上樣緩沖液（loadingbuffer，100ml）

4×Tris-Cl/SDS，pH6.8         25ml

甘油                         20ml

SDS                          4g

溴酚藍(lán)                       0.2g

DTT                         3.1g

1ml分裝，-70℃保存

轉(zhuǎn)膜緩沖液（1 L）

Tris                        3.07 g

甘氨酸                    14.4 g

甲醇                      100 mL

先用去離子水將固體溶解后，臨用前加甲醇并定容至1L。

SDS （10%）

SDS                                                     10 g

去離子水                          100 ml

Stripper Buffer（pH2.0,1L）

甘氨酸                     1.876g

SDS                       10-20g

使用時(shí)，15min×3次

10%福爾馬林（4%甲醛）

甲醛與水體積比1: 9。

DMEM雙抗培養(yǎng)基

      DMEM培養(yǎng)基粉末一袋                  加去離子水至1L

      青霉素                                 100U/ml

      鏈霉素                                 100μg/ml

      調(diào)節(jié)pH至7.6，過濾滅菌，4℃保存。臨用前，加入10%新生牛血清（NBS）。

磷酸緩沖液（PBS）

      NaCl                                    8.0g

      KCl                                      0.2g

      Na₂HPO₄.12H₂O                          3.58g

KH₂PO4                                  0.27g

加去離子水至1000ml，高壓滅菌，4℃保存。

Tris-Cl(1.5 mol/L pH 8.8)

Tris                                                           182 g

去離子水                                                800ml

      用濃鹽酸調(diào)pH至8.8,加水至1000ml。

Tris-Cl (0.5mol/L pH 6.8)

Tris                                                  60.5 g

去離子水                                                800ml

用濃鹽酸調(diào)pH至6.8,加水至1000ml。

4×Tris-HCl /SDS（pH6.8）

      Tris                              6.05g

去離子水                                  80ml

用HCl調(diào)節(jié)pH至6.8，加去離子水至100ml，過濾后加0.4gSDS，4℃保存。

6×電泳加樣緩沖液

4×Tris-HCl/SDS（pH6.8）                        7ml

DTT                                                             0.93 g

SDS                                                             1 g

溴酚藍(lán)                                                      1.2mg

甘油                                                          3ml

加去離子水至10 ml，分裝，-70℃保存。

封閉液（5%）

脫脂奶粉                                                 5 g

TBST緩沖液                             100 ml

細(xì)菌裂解液（100ml）

50 mM Tris pH 8.0

20% 蔗糖

10% 甘油

2mM DTT

4℃貯存，臨用前加入蛋白酶抑制劑。

MagneGST? Binding/Wash Buffer

Na₂HPO₄                   4.2mM

KH₂PO₄                    2mM

NaCl                       280mM

KCl                        10mM

沖洗液（Rinse buffer，100ml）

      50 mM Tris pH 7.5                   

      1% NP-40

      10% 甘油

      100mM NaCl

      2mM MgCl₂

         4℃貯存，臨用前加入蛋白酶抑制劑。

LB液體培養(yǎng)基

胰化蛋白胨                                                  10g

酵母提取物                                                  5g

NaCl                                                              10g

完全溶解后，用5mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH至7.0，去離子水定容至1000ml，高壓滅菌。

若需LB固體培養(yǎng)基，則在1000ml液體培養(yǎng)基中加入15g瓊脂粉，高壓滅菌，冷卻至50-60℃，倒入平板，待冷卻凝固，4℃保存。