分子生物學試驗所用水都是去離子水ddH2O雙蒸水級別的,所以器皿都要用去離子水沖洗兩三遍;配制好試劑的貼標簽標注,包括試劑名稱、配制日期、配制人;加熱和攪拌可以促溶解。
1電泳類
DNA電泳試劑
成分及終濃度
配制100mL溶液用量
2mol/L Tris
1mol/L 乙酸
100 mmol/L
EDTA
ddH2O
24.2g
5.71mL的冰乙酸(17.4 mol/L)
3.72gNa2EDTA·2H2O
補足100mL
50×Tris-乙酸(TAE,pH=8.5)緩沖液
注意事項
1. 準確稱量各物質(zhì),確保緩沖液處于最佳狀態(tài)。
2. 不要用Tris緩沖液來配制2mol/L Tris,因為常見的Tris緩沖液用了HCl調(diào)節(jié)pH,成了Tris-HCl緩沖液,使用純Tris,配制Tris-乙酸緩沖液。
蛋白SDS-PAGE電泳試劑
10×Tris-甘氨酸緩沖液
成分 配制100mL溶液用量1 L
Tris 30.2 g
甘氨酸 188 g
SDS 10g
使用時稀釋10倍使用
Western Blotting
10×轉膜緩沖液(10×running buffer) (定容至1L)
Tris 30.3g
甘氨酸 144g
不調(diào)pH
使用時稀釋10倍使用
1×轉膜工作液 (定容至1L,4℃保存)(現(xiàn)配現(xiàn)用)
10×轉膜緩沖液 100ml
無水甲醇 200ml
ddH2O 700ml
10×TBS 緩沖液(1L)
Tris-HCl 24.3g
NaCl 88g
用濃鹽酸約14ml調(diào)節(jié)pH值至約7.4(pH試紙檢測即可)
1×TBST
TBS+Tween-20 0.1%(1ml for 1L)
2培養(yǎng)基類
LB培養(yǎng)基
將下列組分溶解在0.9L ddH2O中:
蛋白胨Tryptone
10g
酵母提取物
Yeast Extract
5g
氯化鈉Nacl
10g
2×YT培養(yǎng)基
將下列組分溶解在0.9L ddH2O中:
蛋白胨Tryptone
16g
酵母提取物
Yeast Extract
10g
氯化鈉Nacl
5g
注意事項
如需用4M NaOH(約0.5mL)調(diào)整pH至7.0,再補足水至1L。分裝于錐形瓶并用封口膜進行封口,121℃滅菌20min,4℃保存。
細菌LB固體培養(yǎng)基
在LB液體培養(yǎng)基的基礎上,加入1.5g/100ml瓊脂粉Agar, 121℃滅菌20min,降溫到60℃,稍微燙手,加入抗生素迅速倒平板,每個10cm平板大約倒10ml,4℃保存三個月。
3抗生素類
氨芐青霉素(Amp)(100mg/mL)
溶解1g氨芐青霉素鈉鹽于足量的ddH2O中,定容至10mL。分裝成小份于-20℃貯存。常以常50ug/mL終濃度添加于生長培養(yǎng)基。
卡那霉素(kan)(10mg/mL)
溶解100mg卡那霉素于足量的ddH2O中,定容至10mL。分裝成小份于-20℃貯存。常以50ug/mL終濃度添加于生長培養(yǎng)基。
注意事項
1.以乙醇為溶劑的抗生素溶液無須除菌處理,用ddH2O配的用0.45或0.22um無菌過濾器過濾除菌。
2.所有抗生素溶液均應放于不透光的容器保存,也可用錫箔紙包裹。
3.抗生素配制出以后4℃可保存3個月,-20℃可保存一年。
4核酸蛋白提取類
RIPA裂解液
成分及終濃度 配制500mL溶液用量
50mM Tris(PH7.5) 3.02g
150mM NaCl 4.38g
1%TritonX-100 5ml
1%脫氧膽酸鈉 5g
0.1%SDS 0.5g
ddH2O至 500ml,調(diào)pH值至7.5?;靹蚝?℃保存,長期保存于-20℃。使用時,加入蛋白酶抑制劑cooktail。
5M NaCl
稱取29.22g氯化鈉于100mL燒杯中,加入約80mL ddH2O加熱攪拌溶解,定容至100mL,高溫高壓滅菌后使用,4℃保存。
0.5M EDTA(pH8.0)溶液
在80mL ddH2O中加入18.612g EDTA-Na2·2H2O,在磁力攪拌器上劇烈攪拌,用NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH值至8.0(約需2.2g NaOH顆粒)然后定容至100mL,分裝后高溫高壓滅菌備用。室溫長期保存。
注意事項
EDTA二鈉鹽需加入NaOH將溶液的pH值調(diào)至接近8.0,才能完全溶解。而且配制時最好使用EDTA鈉鹽(其較易溶于水,而EDTA較難溶于水,易溶于有機溶劑)。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA)
加100mg BSA于9.5ml ddH2O中,定容到10ml,分裝貯存于-20℃。
1M二硫蘇糖醇(DTT)
在DTT 5g的原裝瓶中加32.4ml ddH2O,分成貯存于-20℃。
1M HEPES
將23.8gHEPES溶于約90ml的ddH2O中,用NaOH調(diào)pH(6.8-8.2),定容至100ml。
1M HCl
加8.6ml的濃鹽酸至91.4ml的ddH2O中。
25mg/ml IPTG
溶解250mg的IPTG于10ml ddH2O中,分裝貯存于-20℃。
1M MgCl2
溶解20.3g MgCl2·6H2O于ddH2O中,定容到100ml。
100mM PMSF
溶解174mg的PMSF(苯甲基磺酰氟)于足量的異丙醇中,定容到10ml,分裝避光貯存于-20℃。
注意事項
1.PMSF劇毒,嚴重損害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚,吸入、吞進或通過皮膚吸收后有致命危險。為了安全和健康,穿實驗服并戴一次性手套操作。一旦眼睛或皮膚接觸立即用大量水沖洗之。凡被PMSF污染的衣物應予丟棄。
2. PMSF在水溶液中不穩(wěn)定。
1%溴酚藍(bromophenol blue)
加1g溴酚藍于100ml ddH2O中,攪拌或渦旋混合直到完全溶解。
4X上樣緩沖液
成分及終濃度 配制10mL溶液用量
1.0 mol/L Tris·HCl(pH6.8) 2ml
2%SDS 0.8g
0.1%溴酚藍 0.04g
10%甘油 4ml
ddH2O定容至10ml?;靹蚍盅b4℃保存。使用時稀釋成1X,加入1M DTT(10X),例如:上樣量20μl--4X上樣緩沖液 5μl+ DTT 2μl + 樣本蛋白13μl。SDS是保證樣品中的所有蛋白帶電荷一致,減少電荷對電泳結果的影響。還原劑是讓二硫鍵處于斷開狀態(tài),保證蛋白分子的線性。溴酚藍作用是指示上樣蛋白的跑膠時標記的,甘油是增加上樣重量的,以免漂浮,煮沸是使蛋白變性的永久保存。
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