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收藏┃丙型肝炎的實(shí)驗(yàn)室診斷最全方案

丙型病毒性肝炎(viral hepatitis type C,HC簡(jiǎn)稱(chēng)丙型肝炎),丙型肝炎病毒(HCV)感染所引起的疾病,主要經(jīng)血源性傳播。臨床表現(xiàn)有發(fā)熱、消化道癥狀及肝功能異常等。與乙型肝炎類(lèi)似,但較輕。下面一起來(lái)看看丙型肝炎的實(shí)驗(yàn)室檢查。


來(lái)源:檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)網(wǎng)


  1、血清生化學(xué)檢測(cè)


  ALT、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)水平變化可反映肝細(xì)胞損害程度,但ALT、AST水平與HCV感染引起的肝組織炎癥分度和病情的嚴(yán)重程度不一定平行;急性丙型肝炎患者的ALT和AST水平一般較低,但也有較高者。急性丙型肝炎患者的血清白蛋白、凝血酶原活動(dòng)度和膽堿酯酶活性降低較少,但在病程較長(zhǎng)的慢性肝炎、肝硬化或重型肝炎時(shí)可明顯降低,其降低程度與疾病的嚴(yán)重程度成正比。


  慢性丙型肝炎患者中,約30%ALT水平正常,約40%ALT水平低于2倍正常值上限。雖然大多數(shù)此類(lèi)患者只有輕度肝損傷,但有部分患者可發(fā)展為肝硬化。ALT水平下降是抗病毒治療中出現(xiàn)應(yīng)答的重要指標(biāo)之一。凝血酶原時(shí)間可作為慢性丙型肝炎患者病情進(jìn)展的監(jiān)測(cè)指標(biāo),但迄今尚無(wú)一個(gè)或一組血清學(xué)標(biāo)志可對(duì)肝纖維化進(jìn)行準(zhǔn)確分期。


  2、HCV抗原檢測(cè)


  人感染HCV到產(chǎn)生抗-HCV的平均時(shí)間約60d,被稱(chēng)為抗-HCV的窗口期。但HCV核心抗原于HCV感染后12~15d即可檢測(cè)到,較抗-HCV出現(xiàn)提前5~7周。Peterson等報(bào)告,HCV核心抗原的出現(xiàn)時(shí)間僅較HCV RNA晚1d。因此,HCV核心抗原篩查可作為HCV感染的早期診斷。


  我國(guó)《丙型肝炎病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)規(guī)范(試行)》指出:對(duì)初篩呈陽(yáng)性反應(yīng)的樣品,應(yīng)用原有試劑雙孔或原有試劑加另一種不同原理(或廠家)試劑進(jìn)行復(fù)檢,如呈一陰一陽(yáng)反應(yīng)者,應(yīng)進(jìn)行補(bǔ)充試驗(yàn)。目前常用的補(bǔ)充試驗(yàn)系用RIBA,如Chiron RIBA HCV 3.0 SIA抗HCV確證試劑(RIBA)和新加坡MP Biomedicals Asia Pacific Pte Ltd公司生產(chǎn)的丙型肝炎病毒抗體補(bǔ)充試劑盒(蛋白印跡法)(HCVBlot 3.0,簡(jiǎn)稱(chēng)MP),但該法價(jià)格較貴,操作較復(fù)雜,一般實(shí)驗(yàn)室不開(kāi)展此試驗(yàn)。因此,對(duì)這些抗-HCV呈一陰一陽(yáng)反應(yīng)性標(biāo)本可檢測(cè)HCV核心抗原,如HCV核心抗原陽(yáng)性,可確證抗-HCV為真陽(yáng)性;但如HCV核心抗原陰性,不能確證抗-HCV為陰性,需進(jìn)一步檢測(cè)HCV RNA,如HCV RNA陰性,仍不能確證其陰性,還需用RIBA試驗(yàn)確證,如RIBA試驗(yàn)陰性,則定為抗-HCV陰性;如RIBA陽(yáng)性,則定為抗-HCV真陽(yáng)性。因既往感染HCV康復(fù)者,其抗-HCV可持續(xù)陽(yáng)性,但HCV RNA和HCV核心抗原為陰性。


  3、抗-HCV檢測(cè)


  抗-HCV酶免疫法(EIA)適用于高危人群篩查,也可用于HCV感染者的初篩。但抗-HCV陰轉(zhuǎn)與否不能作為抗病毒療效的指標(biāo)。用第三代EIA法檢測(cè)丙型肝炎患者,其敏感度和特異度可達(dá)99%,因此,不需要用重組免疫印跡法(RIBA)驗(yàn)證。但一些透析、免疫功能缺陷和自身免疫性疾病患者可出現(xiàn)抗-HCV假陽(yáng)性,因此,HCVRNA檢測(cè)有助于確診這些患者是否合并感染HCV。


  4、HCV RNA檢測(cè)


  在HCV急性感染期,在血漿或血清中的病毒基因組水平可達(dá)到10∧5~10∧7拷貝/ml。在HCV慢性感染者中,HCV RNA水平在不同個(gè)體之間存在很大差異,變化范圍在5×10∧4~5×10∧6拷貝/ml之間,但同一名患者的血液中HCVRNA水平相對(duì)穩(wěn)定。


  (1) HCV RNA定性檢測(cè):對(duì)抗-HCV陽(yáng)性的HCV持續(xù)感染者,需要通過(guò)HCV RNA定性試驗(yàn)確證。HCV RNA定性檢測(cè)的特異度在98%以上,只要一次病毒定性檢測(cè)為陽(yáng)性,即可確證HCV感染,但一次檢測(cè)陰性并不能完全排除HCV感染,應(yīng)重復(fù)檢查。


 ?。?) HCV RNA 定量檢測(cè): 定量聚合酶鏈反應(yīng)(qPCR) 、分枝DNA (bDNA ) 、實(shí)時(shí)熒光定量PCR法均可檢測(cè)HCV RNA 病毒載量。國(guó)外HCV RNA定量檢測(cè)試劑盒有PCR擴(kuò)增的Cobas V2.0、SuperQuant、LCx HCV RNA定量分析法等,但bDNA的Versant HCVRNA 2.0和3.0定量分析法應(yīng)用較為廣泛。國(guó)內(nèi)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR法已獲得國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局(SFDA)的正式批準(zhǔn)。不同HCV RNA定量檢測(cè)法可用拷貝/ml和IU/ml兩種表示方法,兩者之間進(jìn)行換算時(shí),應(yīng)采用不同檢測(cè)方法的換算公式,如羅氏公司Cobas V2.0的IU/ml與美國(guó)國(guó)立遺傳學(xué)研究所的SuperQuant的拷貝數(shù)/ml換算公式是:IU/ml=0.854×拷貝數(shù)/ml+0.538。HCV病毒載量的高低與疾病的嚴(yán)重程度和疾病的進(jìn)展并無(wú)絕對(duì)相關(guān)性,但可作為抗病毒療效評(píng)估的觀察指標(biāo)。在HCV RNA檢測(cè)中,應(yīng)注意可能存在假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果。


  5、HCV基因分型


  HCV RNA基因分型方法較多,國(guó)內(nèi)外在抗病毒療效考核研究中,應(yīng)用Simmonds等1~6型分型法最為廣泛。HCV RNA基因分型結(jié)果有助于判定治療的難易程度及制定抗病毒治療的個(gè)體化方案。


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