技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及中藥制劑及制備方法，具體涉及一種抗菌抗病毒的中藥復(fù)方制劑及制備方法。
背景技術(shù)
流感是流感病毒引起的急性呼吸道傳染病。在歷史上，曾發(fā)生過多次世界范圍的流感大流行，其中以1918年的流感流行最為嚴(yán)重，其死亡人數(shù)達到2000多萬，而且死亡者多數(shù)為15-45歲青壯年。目前流感的威脅依然存在，2009年初甲型H1N1流感在南美洲被發(fā)現(xiàn)，目前已傳播至全球五大洲。截止去年7月，我國內(nèi)陸累計報告甲型H1N1流感確疹病例2003例，并有增長趨勢。WHO早在1948年就已啟動了流感計劃，并已經(jīng)在全世界83個國家建立了111個國家研究中心和4個協(xié)作中心，對流感病毒進行樣品收集、檢測和研究。盡管如此，科學(xué)家們?nèi)匀幌Ｍ?年時間投入4500萬美元建立一個全球?qū)嶒炇襾硌芯苛鞲小Ｓ纱丝梢?，流感作為一種病毒性傳染病不僅嚴(yán)重威脅著公眾健康，而且給國家和社會帶來了沉重的經(jīng)濟負(fù)擔(dān)。
流感病毒屬于正粘病毒科。可引起上呼吸感染的病毒有：1、流感甲、乙副流感1-3型。甲型流感全身癥狀較重，易發(fā)生抗原性變異而產(chǎn)生亞型變種，可引起世界性大流行。2、鼻病毒、冠狀病毒所致感冒，其癥狀主要為低熱，及上呼吸道卡他癥狀，稱為普通感冒。3、腺病毒及合胞病毒，與流感病毒常發(fā)生于嬰幼兒、兒童，且常發(fā)生毛細(xì)支氣管炎和肺炎。4、柯薩奇病毒除有上呼吸道癥狀外，與流感病毒、腺病毒均易引起心肌炎。
西醫(yī)對流感防治主要包括：1、對癥處理：用鎮(zhèn)痛退熱藥以減輕“卡他”癥狀，目前常用西藥多為對乙酰氨基酚及馬來酸苯那敏一類復(fù)方制劑。2、抗病毒藥：目前，正式上市的抗流感藥物大體分為兩類：(1)以20世紀(jì)60年代中期發(fā)現(xiàn)的金剛烷胺為代表，只對甲型流感病毒有預(yù)防和治療作用，屬于離子通道阻斷劑；(2)NA抑制劑，對甲型和乙型流感病毒均有效。另外，以流感病毒復(fù)制過程的不同環(huán)節(jié)為靶點，還有一些藥物正處于實驗室研究或臨床試驗階段。3、疫苗是預(yù)防病毒的重要措施，近年來發(fā)展很快，如活疫苗、滅活疫苗、核酸疫苗等，但目前作用尚不理想，其原因是流感抗原不斷發(fā)生變異，疫苗也就失敗了。
中醫(yī)認(rèn)為感冒是感受外來風(fēng)寒之邪所致，而且有普通感冒和流行感冒之分，早已認(rèn)識到流感具有流行性。《傷寒論》有桂枝湯、麻黃湯、大青龍湯?！稖夭l辯》中桑菊飲，退熱銀翹散等治感冒的方劑應(yīng)用至今。中醫(yī)中藥在防治流感方面積累了豐富經(jīng)驗，在退熱、消除癥狀等方面均具有很好的療效，而且無毒副作用。流感中成藥在臨床上被廣泛采用，深受患者歡迎。但迄今為止用于防治流感的中成藥的藥理作用研究仍停留在抗炎、退熱、鎮(zhèn)痛，改善臨床癥狀等方面，對抗上呼吸道病毒藥理作用方面的研究尚不多，故開發(fā)一種既能改善癥狀又有抗上呼吸道病毒的新流感中成藥很有必要。
我們研究的用于治療感冒、流行性感冒及上呼吸道感染的中藥復(fù)方制劑，其適應(yīng)癥為藥功能辛涼解表，清熱利咽，主治感冒風(fēng)熱表證及風(fēng)溫初起，經(jīng)多年臨床證明該藥治療上呼吸道感冒療效顯著，急性咽炎、扁桃體炎、氣管炎等各種上呼吸道感染療效均顯著，并能緩解頭昏頭痛、鼻塞流涕、咽干、咽痛，退熱效果快，與此同時，在90年代中期同濟醫(yī)院曾對該藥進行多方面研究，發(fā)現(xiàn)該藥在體外體內(nèi)對流感病毒甲3型、柯薩奇病毒B4型及腺病毒7型均有顯著抗病毒作用。用流感甲3型病毒致死量LD50的100倍接種小鼠，用藥組可免除動物死亡?，F(xiàn)我公司在一些中醫(yī)老專家的指導(dǎo)下，結(jié)合現(xiàn)代制藥技術(shù)對該藥進行深入研究，進一步擴大毒譜試驗，將其開發(fā)成具有廣譜抗菌抗病毒作用的新藥，相信此新藥將會具有良好的臨床運用前景。
發(fā)明內(nèi)容：
我們公司開發(fā)出一種新的治療感冒、流行性感冒及上呼吸道感染的中藥復(fù)方制劑，該制劑的活性成分配方由重量百分比為10-15％金銀花、15-20％葛根、10-15％黃芩、10-15％板藍根、10-15％柴胡、10-15％連翹、8-12％貫仲、5-8％白芷、5-8％桔梗組成。
上述活性成份配方可以與一定比例的常用藥用輔料相配，制成各種顆粒劑、片劑及膠囊劑等制劑。
本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問題是提供上述治療感冒、流行性感冒及上呼吸道感染的中藥復(fù)方制劑的制備方法。
本發(fā)明公開的治療感冒、流行性感冒及上呼吸道感染的中藥復(fù)方制劑的制備方法步驟如下：
(1)活性成份揮發(fā)油及提取物的制備
將柴胡、黃芩、連翹粉碎成粗粉加水蒸煮提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油備用，濾過，水蒸液及藥渣備用，葛根用90％乙醇回流提取2次，每次1.5小時，濾過，合并濾液及水蒸液備用，將葛根藥渣及柴胡等藥物藥渣加水煎煮1.5小時，濾過，濾液與上述溶液合并，其余五味藥材加6倍水煎煮2次，每次1.5小時，濾過，濾液與上述溶液合并，減壓濃縮合并液至稀溶液，加3倍體積的75％乙醇溶液，攪拌，靜置，濾過，濾液噴霧干燥，即得提取物。
(2)顆粒劑、片劑、膠囊劑的制備
取上述提取物，加入適當(dāng)?shù)乃幱幂o料，加75％乙醇過12-20目篩制粒，干燥后，將揮發(fā)油與干顆粒混合，得半成品顆粒，直接分包裝即得顆粒劑，將半成品顆粒與助流劑混合后壓片即得片劑；將半成品顆粒與助流劑混合后裝入空膠囊殼中即得膠囊劑。
本發(fā)明解決的再一個技術(shù)問題是提供本發(fā)明中藥復(fù)方制劑在流行性感冒，優(yōu)期是甲型流感、乙型流感方面的應(yīng)用。本發(fā)明治療感冒、流行性感冒及上呼吸道感染的中藥復(fù)方制劑的治療劑量為一日口服2-3次，每天總服用量相當(dāng)于生藥25-75g，3-5天為一個療程。
本發(fā)明治療的感冒、流行性感冒及上呼吸道感染的中藥復(fù)方制劑是在湖北中醫(yī)附院內(nèi)兒科幾位教授在中醫(yī)傳統(tǒng)辯證治理指導(dǎo)下，總結(jié)長期大量臨床治療外感風(fēng)熱、風(fēng)溫肺熱等急性上呼吸道感染的經(jīng)驗基礎(chǔ)上，參照柴葛解肌湯方(傷寒論)、銀翹片方(溫病條辯)組方原則，結(jié)合制代的制藥技術(shù)，選葛根、金銀花等9味中藥組成復(fù)方制劑，我們對此藥進行了藥理藥效、毒理學(xué)試驗，結(jié)果如下：
藥效學(xué)實驗研究：
1、抗H1N1甲型流感病毒實驗：
A、活化病毒：甲型H1N1流感病毒種，經(jīng)雞胚尿囊腔和羊膜活化后，感染Vero細(xì)胞，加維持液rpmil60，3-4天后可見細(xì)胞變圓、腫大、融合和脫落等特異細(xì)胞病變出現(xiàn)，按常規(guī)方法測定病毒的感染滴TCID50。供本實驗用病毒原液的柯薩廳病毒B4型毒和腺病毒7型種在Hela細(xì)胞中活化，所用維持液同前。病毒所致細(xì)胞變園、腫脹和形成葡萄串狀，同上測定病毒感染滴度，供本實驗用病毒原液。
B、細(xì)胞毒性測定：用RPMI1640將此中藥原液作倍比稀釋，在96孔已形成細(xì)胞單層的微孔內(nèi)，加入不同稀釋銀葛液，37℃作用30分種后加入等量維持液，培養(yǎng)24、48和72小時觀察藥物對細(xì)胞的毒性，同時保留幾孔未經(jīng)藥物處理的細(xì)胞作為正常對照組。
C、細(xì)胞培養(yǎng)中藥物對病毒的抑制：將不同稀釋濃度銀葛液分別與等量已知滴度的病毒液配合，接種于已形成細(xì)胞單層的微孔內(nèi)，35℃吸附1小時，吸去多余病毒-藥物混合液，每孔加等量細(xì)胞維持液37℃培養(yǎng)，種毒后分別于2日、4日、6日記錄培養(yǎng)孔的細(xì)胞變化。
D、結(jié)論：抗甲型H1N1病毒藥效學(xué)試驗結(jié)果表明，此中藥復(fù)方制劑有明顯抗甲型H1N1流感病毒作用。以20倍于成人用量的銀葛制劑，可對致死劑量流感病毒(100TCID50)接種小鼠明顯保護作用。
2、抗其它病毒實驗：
綜合體內(nèi)、外抗病毒藥效學(xué)試結(jié)果表明，此中藥復(fù)方制劑有明顯抗流感病毒(甲3型)、柯薩基(B4型)、腺病毒(7型)作用。以20倍于成人用量的銀葛制劑，可對致死劑量流感病毒(100TCID50)接種小鼠明顯保護作用；體外試驗結(jié)果證明：此中藥復(fù)方制劑可明顯抑制大劑量(100TCI50)流感病毒(甲3型)、柯薩基(B4型)、腺病毒(7型)所致Hela或Velo細(xì)胞病變作用(CPE)。
3、抗細(xì)菌試驗：
(1)此中藥復(fù)方制劑抗菌載體試驗：用肺炎鏈球菌和乙型溶血性鏈球菌感染動物，氨芐青毒素膠囊作為對照陽性藥物，結(jié)果肺炎鏈球菌感染未用藥治療的實驗動物全部死亡，而此中藥復(fù)方制劑治療組存活率為50％，與氨芐青霉素治療組療效相同。用乙型溶血性鏈球菌感染未用藥治療組，全部死亡，銀葛沖劑治療組存活率在40％，療效低于氨芐青霉素膠囊組。
(2)此中藥復(fù)方制劑體外抗菌試驗：對臨床分離的106株呼吸道臨床常見菌株均有較好作用，對革蘭氏陽性球菌(金黃色葡萄球菌、A群鏈球菌、肺炎球菌)的MICS明顯低于對革蘭氏陽性桿菌(銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯氏菌)的MICS，同樣對照組藥物氨芐青霉素對革蘭氏陽性球菌也有較好的抑菌作用。
4、此中藥復(fù)方制劑的解熱、鎮(zhèn)痛和抗炎作用試驗：
(1)解熱作用：對細(xì)菌毒素和蛋白胨所引起的感染性和非感染性發(fā)燒家兔與阿斯匹林熱幅度均無明顯差異，但銀葛沖劑的解熱作用特點為緩和而逐步降溫。
(2)鎮(zhèn)痛作用：對冰乙酸和熱板所致化學(xué)性和物理性刺激的“疼痛”反應(yīng)，此復(fù)方制劑能提高痛閾，有顯著的鎮(zhèn)痛效果，鎮(zhèn)痛作用特點為逐步加強，持續(xù)時間長。
(3)抗炎作用：對大鼠蛋白血清性足跖和冰乙酸所致毛細(xì)血管通透性增高，銀葛沖劑均有顯著抑制作用，其抗炎效力銀葛沖劑與阿斯匹林無明顯差異。
5、此中藥復(fù)方制劑對免疫功能的影響：此中藥復(fù)方制劑能增強巨噬細(xì)胞吞噬功能和增強體液血清抗體水平，從而在穩(wěn)定機制和抗感染中具有重要作用。
毒理實驗：
1、急性毒性實驗：
以臨床用量50、100、200倍劑量給小鼠灌胃給藥，連續(xù)觀察七天，無一例死亡，未出現(xiàn)毒性反應(yīng)，再以臨床用藥劑量306、383倍，容積為0.8ml最高耐藥量試驗，連續(xù)觀察七天，無一例死亡，未出現(xiàn)毒性反應(yīng)，處死動物病理檢查各組動物臟器無異常。
2、長期毒性試驗：
以臨床用藥量12.5、25、50倍大鼠灌胃組藥，試驗期為2月，結(jié)果顯示，對大鼠行為、飲食、糞便等無影響，未發(fā)現(xiàn)毒性癥狀和副作用，對血液系統(tǒng)肝腎功能無不良影響。病理組織學(xué)檢查未發(fā)現(xiàn)病理性變化。
具體實施方式：
實例1：活性成份揮發(fā)油及提取物的制備
配方：金銀花300、葛根450、黃芩300g、板藍根300g、柴胡300g、連翹300g、貫仲250g、白芷150g、桔梗150g
將柴胡、黃芩、連翹粉碎成粗粉加水蒸煮提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油備用，濾過，水蒸液及藥渣備用，葛根用90％乙醇回流提取2次，每次1.5小時，濾過，合并濾液及水蒸液備用，將葛根藥渣及柴胡等藥物藥渣加水煎煮1.5小時，濾過，濾液與上述溶液合并，其余五味藥材加6倍水煎煮2次，每次1.5小時，濾過，濾液與上述溶液合并，減壓濃縮合并液至稀溶液，加3倍體積的75％乙醇溶液，攪拌，靜置，濾過，濾液噴霧干燥，即得提取物。
實例2：顆粒劑的制備
配方：金銀花300、葛根450、黃芩300g、板藍根300g、柴胡300g、連翹300g、貫仲250g、白芷150g、桔梗150g、甘露醇500-600g、乳糖200g、阿司帕坦3g
按實例1制成提取物和揮發(fā)油，將提取物與甘露醇、乳糖與阿司帕坦混合后，加75％乙醇過12目篩制成顆料，減壓干燥后，噴入揮發(fā)油，每袋按10g分包裝。使每袋含生藥為25g。
實例3：片劑的制備
配方：金銀花300、葛根450、黃芩300g、板藍根300g、柴胡300g、連翹300g、貫仲250g、白芷150g、桔梗150g、淀粉70-130g、微晶纖維素50g、羧甲基淀粉鈉20g、硬脂酸鎂3g
按實例1制成提取物和揮發(fā)油，將提取物與淀粉、微晶纖維素混合后，加75％乙醇過20目篩制成顆料，減壓干燥后，噴入揮發(fā)油，后加入崩解劑羧甲基淀粉鈉與助流劑硬脂酸鎂混合均勻后，壓片，使片重為0.5g/片，含生藥為3.125g。
實例4：膠囊劑的制備
配方：金銀花300、葛根450、黃芩300g、板藍根300g、柴胡300g、連翹300g、貫仲250g、白芷150g、桔梗150g、淀粉100g、乳糖100g、硬脂酸鎂3g
按實例1制成提取物和揮發(fā)油，將提取物與淀粉、乳糖混合后，加75％乙醇過20目篩制成顆料，減壓干燥后，噴入揮發(fā)油，后加入助流劑硬脂酸鎂混合均勻后，裝膠囊，使膠囊重為0.55g/粒，含生藥為3.125g。
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