人類免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus, HIV）屬于單股正鏈核糖核酸（RNA）逆轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒亞科，是艾滋病的主要病原體，主要傳播途徑為性傳播、血液傳播和母嬰傳播。至今，艾滋病仍然是無有效療法的致命性傳染病。HIV基因組是兩條相同的正鏈RNA，每條RNA長約9.2-9.8kb。HIV載量是指血漿中的病毒負(fù)荷，即體內(nèi)復(fù)制的病毒的數(shù)量，它可以準(zhǔn)確地反映血液中病毒的活躍程度。
在艾滋病的預(yù)防過程中，艾滋病高危人群的診斷是“防艾”的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。血清中HIV RNA是病毒復(fù)制和艾滋病進(jìn)程的確切標(biāo)志。所以血清中HIV RNA的檢測(cè)已經(jīng)成為診斷艾滋病的金標(biāo)準(zhǔn)方法，也是通過國家認(rèn)證的臨床PCR實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目之一，在艾滋病確診、用藥、療效預(yù)判以及康復(fù)治療過程中具有重要的指導(dǎo)意義。
檢測(cè)HIV-1病毒載量可以監(jiān)控和預(yù)測(cè)病程，指導(dǎo)艾滋病病人的HAART治療，包括確定治療時(shí)機(jī)、選擇治療方案、評(píng)價(jià)治療效果；并且結(jié)合疾病臨床癥狀和其他實(shí)驗(yàn)指標(biāo)，還可用于早期感染的輔助診斷。另外，檢測(cè)血漿HIV-1病毒載量還可作為嬰兒早期HIV感染的輔助診斷以及采供血機(jī)構(gòu)樣品的窗口期檢測(cè)方法。具體來說包括：
?、?監(jiān)測(cè)抗病毒藥物治療效果?？共《舅幬镏委熐昂螅ㄆ诓《据d量分析和監(jiān)測(cè)，結(jié)合CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)，有助于抗病毒藥物治療方案的確定和修改。
?、?監(jiān)測(cè)疾病進(jìn)展。定期檢測(cè)HIV-1病毒載量，有助于監(jiān)測(cè)感染者和病人的病程變化，結(jié)合CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)，為抗病毒藥物治療提供病毒學(xué)依據(jù)。
⑶ 診斷急性HIV-1感染。針對(duì)HIV-1抗體篩查陰性、近期有流行病學(xué)史的個(gè)體，或確證結(jié)果不確定，核酸定量檢測(cè)可用于診斷HIV-1急性期感染。
?、?確定HIV-1感染。針對(duì)HIV-1抗體篩查陽性或確證結(jié)果不確定的個(gè)體，結(jié)合流行病、和臨床病史和CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)等，使用核酸定量檢測(cè)幫助確定HIV-1感染。
HIV-1病毒載量檢測(cè)方法有多種原理，常用的包括核酸等溫?cái)U(kuò)增、實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction PCR）、分支DNA技術(shù)、非核酸的酶法檢測(cè)等，另外很多交叉學(xué)科也在HIV檢測(cè)方面進(jìn)行了試驗(yàn)型探索。目前國際上常用的病毒載量檢測(cè)方法主要有分支DNA雜交（Branched DNA, bDNA）、核酸序列擴(kuò)增（Nucleic Acid Sequence Based amplification, NASBA）方法及實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)（Real time Polymerase chainreation, 實(shí)時(shí)-PCR）。分支DNA雜交（Branched DNA, bDNA）基于其獨(dú)特的信號(hào)放大系統(tǒng)，即分枝DNA信號(hào)放大系統(tǒng)，這是一個(gè)人工合成的分枝DNA，分枝DNA的分枝可結(jié)合多個(gè)酶標(biāo)記物，從而將病毒的信號(hào)放大，以便進(jìn)行檢測(cè)。NASBA技術(shù)是一種等溫?cái)U(kuò)增系統(tǒng)，其擴(kuò)增基礎(chǔ)在于系統(tǒng)內(nèi)的混合酶系統(tǒng)，此系統(tǒng)內(nèi)含有逆轉(zhuǎn)錄酶AMV-RT和T7-DNA多聚酶在體外模擬逆轉(zhuǎn)錄病毒體內(nèi)復(fù)制過程。實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。這三種方法的原理、敏感性均不同，各有優(yōu)勢(shì)及不足。
隨著HIV載量應(yīng)用的普及，檢測(cè)技術(shù)的快速進(jìn)步，目前HIV-1病毒載量檢測(cè)技術(shù)總體上分為以下幾個(gè)發(fā)展方向。
第一，實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)技術(shù)成為主流，該技術(shù)由于成本低、操作簡(jiǎn)單、技術(shù)積累豐富等優(yōu)點(diǎn)，在病毒載量檢測(cè)中發(fā)揮越來越大的作用。目前國內(nèi)廠家的病毒載量檢測(cè)試劑均是基于實(shí)時(shí)PCR技術(shù)開發(fā)的，其他技術(shù)例如分支DNA技術(shù)已逐步退出載量檢測(cè)領(lǐng)域。
第二，檢測(cè)設(shè)備趨向于一體化，或者是大型的全自動(dòng)設(shè)備完成樣本處理和檢測(cè)，或者發(fā)展成小型的POCT （point-of-care testing, 現(xiàn)場(chǎng)快速檢驗(yàn)）產(chǎn)品，而核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)由于對(duì)反應(yīng)條件要求很低，最有希望開發(fā)成POCT產(chǎn)品。第三，由于抗病毒藥物的使用，多數(shù)HIV-1感染者血漿中的病毒會(huì)得到控制，表現(xiàn)為經(jīng)典的病毒載量檢測(cè)結(jié)果小于檢測(cè)下限，此時(shí)為了更好地評(píng)價(jià)治療效果，細(xì)胞基因組中整合的HIV成為研究熱點(diǎn)，它的水平高低決定著患者預(yù)后。
由于HIV有很高的遺傳變異性，所以對(duì)于HIV核酸檢測(cè)試劑來說，所用擴(kuò)增引物的保守性和基因型覆蓋能力，以及檢測(cè)不同基因型樣本的靈敏度，是評(píng)價(jià)此類產(chǎn)品的性能之一，也是困擾當(dāng)今HIV診斷試劑向國際化發(fā)展的壁壘之一。目前國內(nèi)已上市的HIV核酸檢測(cè)試劑不多，僅有6種，這些試劑都是針對(duì)HIV-1型的主要基因型進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)HIV-1型中的不常見基因型則很難檢測(cè)出來，從而造成漏檢以及各亞型定量不準(zhǔn)確，而且靈敏度低，一般在1000 IU/ml左右，對(duì)于低值樣本無法準(zhǔn)確檢測(cè)。國外性能優(yōu)異的試劑有羅氏CAP-CTM-HIV-version-2.0試劑盒，靈敏度較高，但只能對(duì)HIV M組和O組樣本進(jìn)行檢測(cè)，無法檢測(cè)出HIV-N組樣本，且試劑盒對(duì)樣本需求量大，試劑和耗材價(jià)格比較昂貴，很難在醫(yī)院廣泛開展。因此研究開發(fā)艾滋病病毒新一代核酸檢測(cè)試劑，對(duì)實(shí)現(xiàn)對(duì)艾滋病病毒早期、超敏診斷成功，全面提升我國艾滋病的診、防、治水平起著至關(guān)重要的作用。
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