豬場疫病與抗體監(jiān)測是掌握豬群疾病發(fā)生、流行、凈化重要工具,檢測樣品的質(zhì)量是進行樣品檢測前提,血清質(zhì)量直接影響著檢測結(jié)果的準確性。因此,如何獲得符合實驗室檢測要求、高質(zhì)量的樣品是進行檢測的第一步,本文就豬只血液采集與樣品運輸進行簡單闡述。
1.豬的血液循環(huán)系統(tǒng)
豬的采血部位有前腔靜脈、橈頭靜脈、耳靜脈等。目前,大多數(shù)使用耳靜脈采血,該方法存在很多缺點,費時、易失敗、血樣易被污染;豬前腔靜脈采血是一種適用的采血方法,但能熟練運用這種方法的并不是很多。
2.血液組成血液包括血漿和血細胞,血細胞包括紅細胞、白細胞和血小板。我們平時用做ELISA檢測的血清是指血液凝固后,在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。
3.樣品采集
3.1準備工作
物品準備:采樣箱、一次性注射器(規(guī)格下述)、75%酒精棉球、5ml真空采血管(無/有抗凝劑,按檢測需要選擇)、登記表等。
人員準備:2-3人。
3.2前腔靜脈采血(30kg以下)
豬只采取仰臥保定方式。前肢攤開,于胸骨突處形成的四個凹陷,選擇前面的凹陷處,酒精棉球消毒后,持注射器(10-30kg小豬,選擇9號針頭,10kg以下仔豬,選擇7號針頭),回抽針筒,由上而下,稍偏向中央及胸腔方向入,見有回血,即可采血,一般采集3-4mL,采血完畢,拿酒精棉球緊壓針孔處,迅速拔出采血針管,為防止出血,針孔處應(yīng)按壓片刻。
3.3頸靜脈采血(30kg以上)
豬用繩子或套口固定上頜,上提保定,盡可能抬得高些,使豬的頭頸與水平面呈30°以上,身體平直,前肢伸向后方,在胸腔入口前下方兩側(cè)的凹陷處向心臟位置的胸腔方向進針,邊進針邊抽吸,當(dāng)有大量血液進入針管時,說明刺中了前腔靜脈,此時停止進針,采到足量血樣。采用前腔靜脈采血,應(yīng)選擇頸右側(cè)為宜,不宜刺到神經(jīng),安全性高。
3.4耳緣靜脈采血
該方法由于血管細、血量少且血流速度非常慢,采血速度較慢,操作不熟練容易導(dǎo)致溶血。方法為豬站立保定,助手用力在耳根捏壓靜脈的近心端,手指輕彈后,用酒精棉球反復(fù)涂擦耳靜脈使血管怒張,針頭朝著耳尖方向沿著血管刺入,緩慢抽取所需血液量。用干棉球或棉簽按壓止血。
4.血液樣品處理
血液成功采出后,要將其立即推入采血管/離心管中(按要求選擇采血管),防止注射器內(nèi)凝血。針頭緊貼管壁緩慢注入,防止損壞血細胞,造成溶血,使血清不能分離出來,標(biāo)明豬只的耳牌號。
5.樣品處理
血液樣品應(yīng)置于2-8℃低溫環(huán)境中冷藏保存,嚴禁冷凍,需冷藏過夜,待血清析出后,將血清分離,-20℃保存(有條件的情況下,可進行離心處理后,分離血清)。若需抗凝全血,在注射器或試管內(nèi)需預(yù)先加入抗凝劑或選擇合適的抗凝管。
6.樣品運輸
樣品(血清/全血)放入泡沫保溫箱中運輸,根據(jù)季節(jié)溫度情況和運輸時間長短放入足夠冰袋。做檢測需要附帶豬場、免疫背景等詳細信息。
通過對豬群進行抗體水平檢測,及時了解和跟蹤豬群抗體水平,從而制定和調(diào)整免疫程序,對指導(dǎo)生產(chǎn)、控制疫病起著至關(guān)重要的作用。
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