蛋白質(zhì)錯(cuò)誤折疊是所有常見(jiàn)的神經(jīng)退行性疾病最明顯的特征，每一種疾病都牽涉到不同的、但又相互重疊的主要蛋白質(zhì)--。α-突觸核蛋白（αSyn）作為突觸核蛋白病的致病誘因、疾病標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)已被廣泛研究。帕金森病（PD）的主要診斷標(biāo)準(zhǔn)主要依賴于臨床癥狀的組合，然而神經(jīng)退行性過(guò)程被認(rèn)為是在觀察到明顯的臨床癥狀之前許多年就已經(jīng)開(kāi)始了。因此，迫切需要在臨床癥狀出現(xiàn)之前識(shí)別高?；颊摺?/span>
圖1：論文封面圖
近年來(lái)，人們?cè)诖_定特定的疾病標(biāo)志物和開(kāi)發(fā)早期檢測(cè)突觸蛋白病的診斷工具方面投入了大量的精力，其中許多都集中在檢測(cè)組織和生物液體中錯(cuò)誤折疊的αSyn聚集物。
在為檢測(cè)αSyn形式而建立的不同檢測(cè)方法中，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）是一種簡(jiǎn)單和快速的技術(shù)，它允許敏感和特異性地定量分析有關(guān)的分析物，并且便于在臨床上進(jìn)行大規(guī)模的篩選。盡管大多數(shù)為檢測(cè)αSyn蛋白形式而開(kāi)發(fā)的ELISA檢測(cè)方法具有較高的分析精度、強(qiáng)有力的實(shí)驗(yàn)室間和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的相關(guān)性以及良好的可重復(fù)性，但在區(qū)分PD患者和對(duì)照組方面的診斷準(zhǔn)確性一直不能令人滿意。
在探索αSyn蛋白形式（低聚物和/或聚集物）作為PD和路易體癡呆（DLB）的潛在生物標(biāo)志物時(shí)，已獲得令人鼓舞的結(jié)果。一些研究表明，僅CSF中的總αSyn不是PD診斷或進(jìn)展的可靠標(biāo)志物，這表明αSyn的其他疾病相關(guān)形式可能更適合。研究表明，在PD和DLB患者中，CSF中的αSyn低聚物水平持續(xù)升高，并與PD運(yùn)動(dòng)功能呈正相關(guān)。我們以前描述了幾種ELISA檢測(cè)方法的發(fā)展，以檢測(cè)生物液體中的αSyn低聚物，使用同一抗體進(jìn)行捕獲和檢測(cè)或構(gòu)象特異性抗體。
最近的研究表明，種子擴(kuò)增法（SAAs）有能力檢測(cè)腦勻漿和CSF樣品中的αSyn疾病相關(guān)聚集物-。SAAs在區(qū)分PD和DLB患者與對(duì)照組受試者方面顯示出顯著的準(zhǔn)確性。然而，目前的SAAs主要是二元測(cè)試（陽(yáng)性或陰性），只有半定量的讀數(shù)，使得它們?cè)诒O(jiān)測(cè)αSyn聚集物水平在疾病過(guò)程中的縱向變化或?qū)χ委煹姆磻?yīng)方面不夠理想。
本研究中探討的主要研究問(wèn)題是：將αSyn SAA和寡聚物特異性ELISA結(jié)合起來(lái)，是否能提供準(zhǔn)確和穩(wěn)健的可測(cè)量的測(cè)試讀數(shù)，以反映PD患者的疾病嚴(yán)重程度。人們一直在努力產(chǎn)生這樣的信息，或者通過(guò)計(jì)算SAA動(dòng)力學(xué)參數(shù)、端點(diǎn)稀釋分析，或者使用參考標(biāo)準(zhǔn)作為解釋生物樣品中水平的指南。然而，目前的αSyn SAA在反映PD的嚴(yán)重程度、臨床表型或預(yù)后方面仍然不能令人滿意。
藉此，英國(guó)UCL的Nour Majbour等提出了一份全面的概念驗(yàn)證報(bào)告，強(qiáng)調(diào)了我們創(chuàng)新的多重測(cè)試在提供CSF種子αSyn低聚物水平的強(qiáng)大定量讀出方面的臨床價(jià)值，該水平與疾病階段相關(guān)。
他們將種子擴(kuò)增試驗(yàn)（SAA）和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）結(jié)合起來(lái)，以提供一個(gè)反映PD患者臨床嚴(yán)重程度的定量測(cè)試讀數(shù)。為了實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)，他們首先用兩組人腦勻漿（試驗(yàn)組和驗(yàn)證組）探索了我們測(cè)試的潛力，然后用兩個(gè)獨(dú)立的人腦脊液隊(duì)列進(jìn)行了驗(yàn)證；發(fā)現(xiàn)組（62名PD和34名對(duì)照）和驗(yàn)證組（49名PD和48名對(duì)照）。
低聚物特異性ELISA能穩(wěn)健地定量來(lái)自PD或DLB受試者的SAA終末產(chǎn)物，具有較高的敏感性和特異性分?jǐn)?shù)（100%）。分析還表明，用低聚物ELISA作為測(cè)試讀數(shù)而不是單獨(dú)的SAA，可以更早地檢測(cè)到播種活動(dòng)。更重要的是，復(fù)用檢測(cè)提供了關(guān)于患者臨床疾病階段的有力信息。
圖2：論文結(jié)果圖
在發(fā)現(xiàn)隊(duì)列中，CSF種子αSyn低聚物的水平與PD臨床癥狀的嚴(yán)重程度相關(guān)，這是由UPDRS-運(yùn)動(dòng)（r=0.58，p<0.001）和H&Y評(píng)分（r=0.43，p<0.01）衡量的。在驗(yàn)證隊(duì)列中觀察到CSF種子αSyn低聚物的濃度與UPDRS-運(yùn)動(dòng)（r= 0.50，p <0.01）和H&Y評(píng)分（r= 0.49，p <0.01）之間有類似的相關(guān)性。
20小時(shí)后，ROC分析得出的靈敏度為91.9%（95%CI，82.4%-96.5%），特異性為85.3%（95%CI，69.8 %-93.5%），曲線下面積為0. 在Discovery CSF隊(duì)列中，用CSF播種的αSyn寡聚體區(qū)分PD和對(duì)照組的敏感性為969，而用ThT Imax在同一時(shí)間點(diǎn)的敏感性為80.7%（95%CI，69.1%-88.5%），特異性為76.5%（95%CI，60.0 %-87.5%），曲線下面積為0.860。
該研究的重要意義在于發(fā)現(xiàn)了：結(jié)合SAA和ELISA檢測(cè)比單獨(dú)的SAA是更有希望的診斷工具，通過(guò)與疾病嚴(yán)重程度的臨床措施相關(guān)聯(lián)來(lái)提供有關(guān)疾病階段的信息。
原文出處
Majbour N, Aasly J, Abdi I, et al. Disease-Associated α-Synuclein Aggregates as Biomarkers of Parkinson Disease Clinical Stage. _Neurology_. Published online September 12, 2022:10.1212/WNL.0000000000201199. doi:[10.1212/WNL.0000000000201199](https://doi.org/10.1212/WNL.0000000000201199)
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