中藥來源廣泛、成分復雜，容易受溫度、濕度、空氣、日光及包裝材料等環(huán)境因素和儲存條件的影響，發(fā)生腐敗、潮解、蟲蛀、變色、泛油、氣味散失、風化及霉變等一系列質量變異現(xiàn)象，影響中藥質量以及療效[1]。藥品有效期是指在規(guī)定的貯藏條件下藥品質量能夠符合規(guī)定要求的時限，或藥品含量下降到90%所需的時間，通過限制貯藏條件和時間保障藥品的質量[2]。制定有效期能夠保障臨床用藥安全性、有效性，改善中藥貯藏條件，完善有關中藥有效期的國家標準及我國中藥質量管理制度，加快實現(xiàn)中藥現(xiàn)代化國際化進程[3-4]。目前關于中藥有效期還沒有明確的規(guī)定，在儲存中藥過程中，中藥的質量和療效難以得到保障，因此，本文對有毒中藥穩(wěn)定性和有效期的研究進展、有效期研究中采用的常用方法進行綜述，為后期中藥有效期的制定提供參考。
中藥的毒性分為內在和外在毒性，內在毒性包括肝、腎、胃腸道毒性等，外在毒性包括種植過程中的污染，如重金屬和農藥污染土壤、加工貯藏過程中產生的毒性[5-8]。影響中藥質量的因素很多，如藥物的配伍不當、炮制工藝不當、煎煮方法不正確、用藥劑量過大等，且會導致不良反應的發(fā)生[9]。按照中藥內在毒性的大小將有毒中藥分為大毒、有毒和小毒中藥3類。
《中國藥典》2020年版中共收載毒性中藥83種，包括大毒中藥10種、有毒中藥42種、小毒中藥31種[10]。大毒中藥毒性劇烈，治療劑量接近于中毒劑量，容易導致中毒或死亡；有毒中藥毒性較強，使用時應當注意控制用藥劑量，使用不當會導致中毒或死亡；小毒中藥毒性較低，長時間用藥或過量服用均會導致中毒或死亡[11]。中藥中的活性成分和毒性成分二者相互轉換相互制約[12-13]，有毒中藥通常被認為是藥效成分和毒性成分的組合體，二者之間存在著辨證關系，明確“毒-效”關系有利于開展有效期研究，根據(jù)“毒-效”特點將有毒中藥分為以下3類。
多數(shù)中藥的藥效成分和毒性成分是同種物質。在19世紀就有報道馬錢子Strychni Semen在臨床應用中出現(xiàn)中毒反應，馬錢子的毒性經(jīng)歷了“無毒”到“有毒”到“大毒”的認識過程，最終以大毒為概括[14]。士的寧是馬錢子引起毒性反應的主要成分，士的寧口服20 min后會引起中毒反應，同時也是馬錢子發(fā)揮藥效作用的主要成分[15-16]。
天仙子Hyoscyami Semen有大毒，服用過量會引起中毒反應，東莨菪堿、阿托品等生物堿是天仙子發(fā)揮毒理和藥理作用的主要成分，藥理學研究表明天仙子具有降壓、抗炎鎮(zhèn)痛、抗驚厥、抗焦慮等作用，東莨菪堿和阿托品等托烷類生物堿影響神經(jīng)系統(tǒng)產生毒蕈堿樣作用，引起思維障礙、頭痛、發(fā)熱、譫妄、狂躁、眩暈等不良反應[17-19]。巴豆Crotonis Fructus有大毒，脂肪油既是巴豆的藥效成分也是毒性成分，巴豆油對皮膚具有刺激性，用量過多會造成急性皮炎[20]。
有些中藥的藥效成分和毒性成分是不同種物質，需要分別監(jiān)測。如白果Ginkgo Semen，具有斂肺定喘、止帶縮尿的功效，酚酸類物質是其主要活性成分，抗病毒作用明顯；氫氰酸類成分發(fā)揮小毒作用，中毒后表現(xiàn)為惡心、嘔吐、頭暈、驚厥等癥狀[21]。
蒼耳子Xanthii Fructus，具有散風濕、通鼻竅、祛風寒的功效，酚酸及其衍生物類成分是蒼耳子發(fā)揮抗炎鎮(zhèn)痛作用的有效活性成分，而水溶性苷類羧基蒼術苷、蒼術苷及其衍生物是其主要的毒性成分，目前對蒼耳子毒性機制還不明確，仍有待于進一步研究[22-25]。
天南星Arisaematis Rhizoma，有效成分中主要含有生物堿類、黃酮類、脂肪酸類、甾醇類成分，具有抗腫瘤、抑菌、殺蟲、抗炎、抗凝血等藥理活性；毒性成分主要是草酸鈣針晶，具有刺激性毒性，口服粗制天南星會引起腎臟毒性[26]。
半夏Pinelliae Rhizoma有效成分復雜，主要成分為生物堿氨基酸，具有燥濕化痰、降逆止嘔、消痞散結的功效；草酸鈣針晶是其主要的刺激性成分，毒性主要體現(xiàn)在肝臟、消化道方面[27-28]。
此外香加皮Periplocae Cortex、朱砂Cinnabaris、輕粉Calomelas、兩頭尖Anemones Raddeanae Rhizoma[11]等中藥的有效成分和毒性成分也不同。
少數(shù)中藥的藥效成分和毒性成分在一定的條件下可以實現(xiàn)相互轉化。川烏Aconiti Radix、草烏Aconiti KusnezoffiiRadix、附子Aconiti LateralisRadix Praep Arata是常用烏頭類中藥，用藥歷史悠久[29]?，F(xiàn)代藥理、毒理研究表明烏頭類中藥具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗休克、抑制呼吸中樞等多種藥理毒理作用。烏頭類中藥的主要成分是雙酯型二萜型生物堿，既是藥效成分，也是主要毒性成分，使用過程中容易引起中毒反應[30]，雙酯型生物堿在炮制和提取過程中發(fā)生降解，生成單酯型及胺醇型生物堿，此過程中毒性降低但藥理活性并未明顯改變[31-32]。附子中的雙酯型生物堿在治療心衰時是有毒物質，在治療疼痛時會轉化為有效成分，但超過一定劑量又會產生心臟毒性[33]。
目前開展的有效期研究大多是對有效成分進行穩(wěn)定性考察，藥物在儲存過程中會發(fā)生降解，通過開展藥物穩(wěn)定性試驗可以保障臨床用藥的療效[34]。穩(wěn)定性試驗包括影響因素試驗、加速試驗和長期穩(wěn)定性試驗，穩(wěn)定性研究的數(shù)據(jù)應建立在良好的實驗設計基礎上獲得，以此表征有效期[35-36]。中藥的穩(wěn)定性試驗考察指標主要包括外觀性狀、理化性質、化學性質和微生物性質等，穩(wěn)定性的結果應考慮所有檢驗指標的變化情況[37]；有效期的評價指標主要包括感官指標、含量指標、水分指標、藥效指標等[38]。
傳統(tǒng)經(jīng)驗法的研究思路是根據(jù)藥材的理化性質或藥材成分的變異特性分類確定藥材的有效期。中藥在發(fā)展過程中來源和種類不斷增加，當前已有較多的經(jīng)驗鑒別方法[39]，如含淀粉多的藥材容易出現(xiàn)蟲蛀、霉變現(xiàn)象；含糖分和油脂多的藥材容易出現(xiàn)“走油”現(xiàn)象；含揮發(fā)油多的藥材容易“失香”；無機鹽類礦物藥材在潮濕環(huán)境中容易潮解等。經(jīng)驗鑒別也稱為感官鑒別，傳統(tǒng)的經(jīng)驗鑒別法快速便捷，但該方法不具有科學性和準確性，不能鑒別輕微的變質現(xiàn)象，不建議日后作為中藥有效期的研究方法。
在加速條件下預測藥物穩(wěn)定性主要基于2個基本規(guī)律[40]。一是藥物含量隨時間的變化規(guī)律，即反應速度方程，用公式（1）表示。
f(C)＝?kdt＋f(C0) （1）
t為反應時間；C0為初始的濃度（反應時間為零時的濃度）；C為起始濃度（反應時間為t時的濃度）；k為反應速度常數(shù)
二是藥物含量隨溫度的變化規(guī)律，即Arrhenius 指數(shù)定律，用公式（2）表示。
k＝Ae?Ea/RT （2）
A為指前因子；Ea為活化能；T為熱力學溫度；R為摩爾氣體常數(shù)8.314 J/(mol·k)
Arrhenius指數(shù)定律是經(jīng)典恒溫加速法的理論依據(jù)。根據(jù)樣品性質及穩(wěn)定性預實驗結果設計實驗，將樣品放置在不同溫度的恒溫器中，不同時間取樣測定含量，求出不同溫度不同時間的藥物濃度，根據(jù)濃度與時間的關系作圖判斷反應級數(shù)，根據(jù)直線斜率求出各溫度下藥物的k值，最后求出Ea和有效期t0.9。Arrhenius模型是預測藥物有效期的經(jīng)典模型，對不同溫度下的有效期t與溫度T進行擬合，結合預測公式ln t＝Ea/2.303RT＋A進行有效期的判斷[1,41-42]。
經(jīng)典恒溫法的結果準確，但也存在一定局限性，如工作量大、處理繁瑣、Arrhenius指數(shù)只適用于樣品的指標成分含量變化符合一級反應、實驗只考慮溫度的影響、未考慮相關分析物所處的微環(huán)境、實驗結果只是針對指標成分的降解時限、在溫度升高條件下進行的加速穩(wěn)定性研究得到的實驗結果與實際條件下的穩(wěn)定性結果存在誤差[43-44]。
經(jīng)典恒溫法分析工作量大，數(shù)據(jù)處理繁瑣，由此發(fā)展起來的簡化恒溫法如初均速法、單測點法、溫度指示法、威布爾擬合法等[45]。初均速法以反應初速度V0代替品質k值，V0＝(C0－C)/t，預測公式為ln(C0－C)/t＝?Ea/RT＋lnA[46]。
長期穩(wěn)定性試驗一般需要3批試驗樣品，在溫度25 ℃、濕度65%的條件下存放12個月，每3個月取樣1次，1年后繼續(xù)觀察，在18、24個月再取樣監(jiān)測，使用統(tǒng)計分析的方法獲得有效期。留樣觀察法是長期穩(wěn)定性試驗的另一種形式，被廣泛應用。朱孝芹等[47]將北豆根總堿分散片置于40 ℃，相對濕度75%的條件下，在0、1、2、3個月進行取樣測定，采用加速試驗和室溫留樣觀察法，2年后其性狀、崩解時限和含量均沒有發(fā)生明顯變化，初步預測北豆根總堿分散片的貯藏期是2年。
電子感官技術依靠電子鼻、電子眼、電子舌、色彩測量裝置等電子感官設備模擬人類感官，建立外觀性狀與內在質量的關系模型對中藥質量進行客觀評價，具有快速、靈敏、準確的特點，為中藥有效期的制定提供新方法[48]。苦杏仁Armeniacae Semen Amarum是小毒中藥，富含脂肪油類物質，容易出現(xiàn)走油現(xiàn)象，貯藏過程中油脂的酸敗是引起走油現(xiàn)象的主要原因，此外，酸敗過程還可能會產生毒性，影響用藥安全[49-51]。
苦杏仁質量與苦杏仁苷含量、油脂含量、酸值和過氧化值有關，選取上述4個內在指標對苦杏仁含量變化過程進行模擬，通過建立苦杏仁走油變質模型監(jiān)測其質量變化，主成分分析法和偏最小二乘判別法模型能準確判斷藥材能否繼續(xù)藥用，穩(wěn)定性試驗結果為苦杏仁的儲存提供參考[51-53]。目前已經(jīng)建立了易變質中藥的質量預警模式，酸敗度可以作為評價易走油中藥質量的重要指標，基于數(shù)學模型擬合走油變質過程不僅預測藥材有效期，同時還為易走油中藥的儲存和變質過程的研究提供指導。
近年來對中藥有效期的研究大多依靠中藥中所含藥效成分的穩(wěn)定性考察結果，測定不同存放期的中藥成分含量進行藥效評價，穩(wěn)定性試驗考察中藥主要成分含量變化的時間和速度，預測有效期[1]。明確藥品穩(wěn)定性的變化需要考察指標變化程度的臨界值，確定有效期時應該注意幾個問題，如至少研究3批不同規(guī)模樣品的穩(wěn)定性，穩(wěn)定性試驗過程中注意選擇不同的溫度和濕度條件等[37]。有毒中藥相對無毒中藥來說，通常被認為是毒性成分和有效成分的組合體，目前，關于有毒中藥的研究主要集中在化學成分、藥理作用、炮制工藝、藥理毒理學研究等方面，對其有效期的研究尚不多見，本文對已有報道中的有毒中藥的穩(wěn)定性和有效期進行整理。
二萜型生物堿類是烏頭類中藥的主要成分，李萌等[31]在研究烏頭生物堿的穩(wěn)定性試驗中，重點考察溫度、pH值及水解時間與烏頭生物堿降解相關的因素，并通過高效液相色譜-離子阱質譜法對降解產物進行鑒定。結果表明溫度越低水解越慢，產物越復雜；中性pH值條件下，烏頭堿、新烏頭堿、次烏頭堿容易生成相應的單酯型生物堿；pH值為8.5時，烏頭堿和新烏頭堿水解生成相應的胺醇型生物堿。赫清雪[54]利用現(xiàn)代色譜及光譜技術，對臨床常用的虎力散膠囊等制劑進行烏頭堿、次烏頭堿等6種烏頭類生物堿的含量測定，結果顯示虎力散膠囊中未檢測出雙酯型生物堿，為提高此類藥物的質量標準提供科學依據(jù)。
制川烏有毒，具有祛風除濕、溫經(jīng)止痛的作用，目前對于制川烏的研究主要集中在化學成分、炮制工藝、藥理作用及不同制劑的研究等方面，對于有效期方面的研究還較少[55-61]。王芳等[62]采用初均速加速試驗法預測制川烏的有效期，在試驗過程中，將9份制川烏粉末置于不同溫度下進行加速試驗。根據(jù)Arrhenius定律，以單酯型生物堿為指標得到回歸方程lnV＝20 406/T＋56.961（r＝0.963 1），以雙酯型生物堿為指標得到回歸方程lnV＝?223 074/ T＋64.454（r＝0.968 2）。
二萜類雙酯型生物堿不僅與制川烏毒性大小有關，還與制川烏的藥效強弱有關[63]。因此，選擇雙酯型生物堿含量變化為監(jiān)測指標，25 ℃條件下根據(jù)公式t＝(1－90%)/V計算制川烏的有效期，初步預測有效期是0.69年，實際有效期有待進一步留樣觀察。北豆根Menispermi Rhizoma有小毒，蝙蝠葛堿是其有效成分，劉全宇等[64]根據(jù)Arrhenius公式推出線性方程lgk＝?2 622.6/T＋4.973 1（r＝0.957 5），25 ℃條件下外推k≈701.4 d，通過經(jīng)典恒溫加速法預測蝙蝠葛堿單體成分質量分數(shù)下降10%需要1.92年。
苦楝皮Meliae Cortex是有毒中藥，通過超聲波提取法和溶劑浸提法提取苦楝皮色素，對影響苦楝皮色素穩(wěn)定性的因素進行分析，從pH值、溫度、氧化劑、還原劑、光照等方面進行考察。結果表明pH值變化影響色素的穩(wěn)定性，酸性增強色素穩(wěn)定性變好；高溫條件下熱穩(wěn)定性差；苦楝皮色素具有一定的抗氧化性和耐光性；抗還原性較差[65]。
商陸Phytolaccae Radix是有毒中藥，商陸果漿中富含豐富的紅色素，在pH 3.2～8.0時比較穩(wěn)定，但在強酸強堿情況下易被破壞，具有一定的耐熱性、耐光性和抗氧化活性[66-67]。
九里香Murrayae Folium et Cacumen有小毒，用水作為提取劑對九里香葉色素進行提取，考察溫度、pH值等不同因素對色素穩(wěn)定性的影響，穩(wěn)定性試驗表明溫度和pH值對色素的穩(wěn)定性影響較??；食品添加劑中只有淀粉會對色素穩(wěn)定性造成影響；色素具有一定的抗氧化性和抗還原性；不同金屬離子對色素穩(wěn)定性的影響程度不同；日光對色素穩(wěn)定性影響較大應避光保存[68]。
苦木Picrasmae Ramulus et Folium是小毒中藥，對苦木的研究主要集中在藥理活性和莖葉、枝皮的化學成分等方面，對果實的研究較少，Yoshikawa等[69]、何可群等[70]初步研究了苦木果色素的穩(wěn)定性，考察pH、氧化劑、還原劑、食品添加劑（維生素C、乙二胺四乙酸、檸檬酸）、自然光及金屬離子對苦木果色素穩(wěn)定性的影響，結果表明pH對苦木果色素穩(wěn)定性具有較大的影響，氧化劑、還原劑、食品添加劑以及自然光均不影響色素穩(wěn)定性，金屬離子中的K+和Fe3+會在一定程度上影響色素穩(wěn)定性。對色素穩(wěn)定性的研究將為苦木果的進一步利用提供參考依據(jù)。
吳茱萸Euodiae Fructus有小毒，主要成分是生物堿和揮發(fā)油，甄攀等[71]采用水蒸氣蒸餾法提取吳茱萸揮發(fā)油，進行恒溫加速破壞，通過阿貝折光儀測定折光率，用數(shù)理統(tǒng)計方法處理得到線性回歸方程Y＝?18.625 X＋58.192（r＝0.998），根據(jù)一級動力學反應方程求出t0.9＝0.39年，通過初均速法預測吳茱萸的貯存期是0.39年。
蒼耳子主要含揮發(fā)油、脂肪酸、酚酸類、木脂素類等多種化學成分[23]，張利民等[72]通過提取蒼耳子中脂肪油進行恒溫加速破壞試驗，用阿貝折光儀測脂肪油的折光率并進行數(shù)據(jù)分析，求出反應活化能Ea＝286.525 kJ/mol，根據(jù)Arrhenius公式的回歸方程（r＝0.993）求出25 ℃時的k值，根據(jù)一級動力學方程式推測出t0.9、t0.8、t0.7分別為1.47、3.11、4.97年。根據(jù)有效期定義預測蒼耳子油的有效期是1.47年，該數(shù)據(jù)為控制蒼耳子的質量提供參考。中藥揮發(fā)油穩(wěn)定性受諸多因素影響，如溫度、光照、氧氣以及金屬雜質等，探究中藥揮發(fā)油穩(wěn)定性的影響因素具有重要現(xiàn)實意義[73]。
雄黃Realgar是一種常用的礦物藥，用藥歷史悠久，雄黃飲片有毒，張爽等[74]和Chen等[75]對雄黃微生物浸提液的穩(wěn)定性進行研究，以期增加雄黃的臨床應用，通過考察溫度、光照、pH值及抗氧化劑和螯合劑聯(lián)合應用時對雄黃微生物浸取液的穩(wěn)定性影響，結果表明雄黃微生物浸提液應該在避光避高溫的條件下保存；抗氧劑亞硫酸氫鈉和螯合劑乙二胺四乙酸二鈉聯(lián)合應用能夠明顯增強雄黃微生物浸提液的穩(wěn)定性。作為開發(fā)雄黃注射劑的原料藥pH應控制在4.0～9.0，可以選擇加入乙二胺四乙酸二鈉保持溶液pH值。
蟾酥Bufonis Venenum的主要活性成分分為3類，蟾毒配基類、蟾蜍毒素類以及吲哚類生物堿類。有研究對蟾酥中蟾毒配基類成分，華蟾酥毒基和脂蟾毒配基進行高溫、強光照射及pH值穩(wěn)定性考察，表明二者在高溫、強光照射及弱酸條件下穩(wěn)定[76]。
李國雁等[77]對蟾酥中吲哚類生物堿總蟾毒色胺進行穩(wěn)定性考察，結果表明總蟾毒色胺在高溫及強光照射下降解較快，提示蟾酥制劑應低溫避光保存以防止有效成分的降解，后續(xù)還應繼續(xù)考察蟾酥提取液中整體成分的穩(wěn)定性。
關宏峰等[78]和陳曉莉等[79]初步考察了馬錢子總生物堿緩釋片的穩(wěn)定性，通過高溫、高濕、光照以及暴露空氣試驗，考察緩釋片的外觀、含量、釋放度的變化情況，結果表明緩釋片穩(wěn)定性良好；加速試驗結果表明緩釋片在3個月內的恒溫恒濕條件下穩(wěn)定性良好，但只依據(jù)體外釋放度評價制劑質量是片面的，今后研究還需考慮體內釋放度。
鴉膽子油口服液主要原料是鴉膽子油，鴉膽子油中油酸含量較高，李進明[80]以油酸含量為指標對鴉膽子油口服液進行穩(wěn)定性試驗，發(fā)現(xiàn)鴉膽子油乳注射液的質量與穩(wěn)定性有直接關系，針對未啟封的鴉膽子油乳注射液要置冷處保存這一要求，方孝華[81]和虞希晨等[82]對鴉膽子油乳注射液進行室溫下的穩(wěn)定性考察，結果表明注射液在室溫下24 h內穩(wěn)定。因此，應該對說明書中要求冷藏的藥品進行室溫下的穩(wěn)定性考察，進而保障藥品質量。
鴉膽子Bruceae Fructus有小毒，采用恒溫加速試驗法，取不同濃度的樣品，通過中和法測定油酸含量，用阿倫尼烏斯公式C＝C0e?kt k＝Ae?Ea/RT進行數(shù)據(jù)分析，表明油酸含量符合一級動力學過程，得到方程logk＝?3.593 7×103/T＋8.042 1（r＝0.987 1），預測出鴉膽子油口服液在25 ℃下有效期是2.2年[80]。對于含有易發(fā)生變化、相互轉化、毒性等成分的中藥制劑，應當在考察穩(wěn)定性的過程中監(jiān)測其變化程度，通過對含有有毒中藥成分制劑進行穩(wěn)定性考察可以為其質量控制提供參考[78]。以苦杏仁中的苦杏仁苷的含量變化為指標，結合經(jīng)典恒溫法初步預測浙貝化痰顆粒的穩(wěn)定性，其有效期t0.9＝2.44年，有待于結合長期留樣觀察法進一步確定[83]。
中藥的質量和療效受多種因素影響，如藥材來源、貯藏條件、炮制方法、包裝材料等，因此在中藥有效期的制定過程中應該根據(jù)中藥自身特點綜合考慮多種因素，收集樣品不同條件下的穩(wěn)定性試驗數(shù)據(jù)，采用科學的統(tǒng)計分析方法得到可信度高的有效期。其中中藥的貯藏會直接影響到藥材的質量，建立科學系統(tǒng)的貯藏方法評價體系成為亟待解決的問題[84-85]。
在藥品有效期的管理方面，一要結合傳統(tǒng)經(jīng)驗法進行總結分析，二要利用新技術對有效期的研究方法進行優(yōu)化創(chuàng)新[86]，有效期的管理是一項艱巨而復雜的工作，在管理過程中需要不斷完善，促使有效期管理更加標準化。有毒中藥的監(jiān)管及質量控制問題是影響中藥安全性的關鍵問題，關系著中藥現(xiàn)代化的進程，應用生物檢測手段對中藥進行質量評價，重視重要有毒制劑的質量控制[87-88]。此外，有待于開展中藥的毒性成分的穩(wěn)定性研究，制定相關安全性與有效性的標準，以期為后續(xù)有毒中藥有效期的研究奠定基礎。
利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突
參考文獻（略）
來 源：徐振娜，劉思佳，宋麗麗?，李遇伯．有毒中藥穩(wěn)定性和有效期的研究進展 [J]. 中草藥, 2023, 54(7):2301-2308.
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