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芯片+分析+PCR=SCI5分文章:高性價(jià)比的臨床樣品lncRNA研究套路

作者:Dr.饕餮

轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明:解螺旋·臨床醫(yī)生科研成長(zhǎng)平臺(tái)


長(zhǎng)鏈非編碼RNA(lncRNA)是一類長(zhǎng)度大于200nt的非編碼的RNA分子,其數(shù)目遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于編碼基因數(shù),現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)的長(zhǎng)鏈非編碼RNA的作用方式非常多樣。

特別的是,長(zhǎng)鏈非編碼RNA在多種疾病中被證明有獨(dú)特的表達(dá)模式,具有重要作用,也可以作為潛在的分子標(biāo)志物。

因?yàn)槠湓诓煌膊≈芯哂斜萴RNA更獨(dú)特的表達(dá)模式,近年來(lái),關(guān)于長(zhǎng)鏈非編碼RNA在不同疾病中的表達(dá)芯片研究成為的研究熱點(diǎn),對(duì)于擁有很多臨床樣品收集機(jī)會(huì)的醫(yī)院科研工作者,長(zhǎng)鏈非編碼RNA的表達(dá)芯片更是成為了進(jìn)入科研領(lǐng)域和發(fā)表文章的實(shí)惠之選,往往只通過(guò)表達(dá)芯片和分析加上PCR的驗(yàn)證就可以發(fā)表高點(diǎn)數(shù)SCI文章。

今天,就帶大家來(lái)了解下lncRNA表達(dá)芯片的研究套路。下面,就通過(guò)一個(gè)例子帶大家了解一下lncRNA表達(dá)芯片是怎么研究的:

這是一篇中國(guó)學(xué)者今年發(fā)表在Oncotarget(IF=5.16)上的文章(回復(fù)關(guān)鍵詞070903可下載該文獻(xiàn)原文)

第一步(芯片):首先,是選擇一種合適的疾病類型

當(dāng)然,沒(méi)人報(bào)道最佳。來(lái)看看文章,研究者選擇的是非小細(xì)胞肺癌的一種亞型:肺鱗狀細(xì)胞癌(lung squamous cell carcinoma;LSCC),其早期階段缺乏靈敏的診斷標(biāo)志物(此類疾病診斷標(biāo)志物的研究尤其適合長(zhǎng)鏈非編碼RNA)。

以此為出發(fā)點(diǎn),作者在3對(duì)早期階段的LSCC樣品和相應(yīng)的癌旁組織進(jìn)行了lncRNA和mRNA的芯片分析(很多國(guó)內(nèi)公司的lncRNA芯片包含mRNA),一共檢測(cè)到了30,586 個(gè)lncRNAs和 26,109 個(gè)mRNA,其中,1407個(gè)lncRNA在癌癥樣品中上調(diào),1261個(gè)下調(diào)。

第二步(分析):lncRNA和mRNA共表達(dá)分析

得到了lncRNA和mRNA的差異表達(dá)之后,lncRNA行使的功能如何研究呢?大多數(shù)lncRNA是沒(méi)有注釋的,怎么辦,很多研究者在這里就卡住了。

解決方法很簡(jiǎn)單,lncRNA沒(méi)有注釋,但是mRNA有呀,這里有一個(gè)基本假設(shè),和mRNA表達(dá)模式類似的lncRNA可能互相調(diào)控具有相似的功能。作者對(duì)三類lncRNA(芯片結(jié)果會(huì)給lncRNA分類)和基因都做了共表達(dá)分析。

第三步(分析):lncRNA功能聚類

有了共表達(dá)的mRNA之后,就可以對(duì)差異表達(dá)的lncRNA進(jìn)行基于此的功能聚類(GO)分析啦,可以得到可能lncRNA參與的通路。

第四步(PCR實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證):qPCR驗(yàn)證lncRNA的表達(dá)

通過(guò)聚類分析得到的一些可能具有功能的lncRNA之后,作者擴(kuò)大樣品使用qPCR驗(yàn)證了他們?cè)贚SCC癌和癌旁組織的表達(dá),在選取的26個(gè)lncRNA,其中5個(gè)有和芯片類似的表達(dá)模式。

第五步(分析):尋找和LSCC早期診斷相關(guān)的lncRNA

最后,回到作者問(wèn)的第一個(gè)問(wèn)題,是否能發(fā)現(xiàn)LSCC早期診斷的標(biāo)志物,作者把上一步驗(yàn)證道德差異表達(dá)的5個(gè)lncRNA作為一個(gè)集合,發(fā)現(xiàn)它們的表達(dá)變化能很好的區(qū)分癌和癌旁組織,提示可以作為診斷的標(biāo)志物。

總結(jié):

整篇文章僅僅做了qPCR一個(gè)實(shí)驗(yàn),剩下的就是芯片和功能臨床分析,其中,很多分析芯片公司可以代做,結(jié)果發(fā)表在了很不錯(cuò)的雜志上。對(duì)于醫(yī)學(xué)工作者來(lái)說(shuō),是性價(jià)比很高的發(fā)表文章方式。

總結(jié)下來(lái),重點(diǎn)就在于疾病類型的選取和臨床樣品的收集,各位醫(yī)學(xué)工作者,趕快去看看自己手上有什么樣的臨床樣品吧,開(kāi)啟屬于你的lncRNA的研究之旅。

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