本發(fā)明屬于生物領(lǐng)域；具體涉及一種豬糞便除臭劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
養(yǎng)豬業(yè)迅速發(fā)展，豬場(chǎng)大量糞污蓄積，引發(fā)了諸多環(huán)境污染問題，也越來越引起人類的重視。由于糞污會(huì)排放大量惡臭氣體，可導(dǎo)致豬只食欲不振、煩躁、免疫力和生產(chǎn)性能下降等不良影響；硫化氫、硫醇、胺類、氨等可直接對(duì)呼吸系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)及神經(jīng)系統(tǒng)造成危害，直接排放會(huì)造成土壤、水體及空氣的污染，從而破壞周邊生態(tài)環(huán)境。豬糞便中h2s和nh3含量較高，我國畜禽場(chǎng)環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定，硫化氫濃度標(biāo)準(zhǔn)10mg/m3，氨氣濃度標(biāo)準(zhǔn)為25mg/m3。有調(diào)查顯示，在豬舍內(nèi)的氨濃度平均達(dá)6～10mg/m3，h2s濃度平均達(dá)0.03～0.37mg/m3，在豬舍內(nèi)可聞到明顯的刺激性氣味。
目前，我國豬場(chǎng)糞污處理系統(tǒng)不夠完善，目前還有一種有效解決生豬養(yǎng)殖場(chǎng)糞污臭氣處理問題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明提供了一種豬糞便除臭劑及其制備方法；本發(fā)明的豬糞便除臭劑有效降解豬場(chǎng)內(nèi)外h2s和nh3，提高豬只增重，降低呼吸道、腹瀉和消化道疾病的發(fā)病率；同時(shí)降低糞污對(duì)土壤、水體和大氣等生態(tài)環(huán)境的污染。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明中的豬糞便除臭劑是將嗜酸乳桿菌、羅伊乳桿菌、解淀粉芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌分別進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)后得到的液體制劑后按1:1:1:1的體積比混合制得的；具體是通過下述步驟完成的：
步驟a、將嗜酸乳桿菌活化后接種到乳酸桿菌液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為2％～4％，在35～37℃條件下厭氧培養(yǎng)36～48h；
步驟b、將羅伊乳桿菌活化后接種到乳酸桿菌液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為2％～4％，在35～37℃條件下厭氧培養(yǎng)36～48h；
步驟c、將解淀粉芽孢桿菌活化后接種到芽孢桿菌液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為1％～3％，在35～37℃條件下，以100～150rpm速度震蕩培養(yǎng)24～48h；
步驟d、將枯草芽孢桿菌活化后接種到芽孢桿菌液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為1％～3％，在35～37℃條件下，以100～150rpm速度震蕩培養(yǎng)24～48h；
步驟e、將步驟a、步驟b、步驟c、步驟d得到的液體制劑按1:1:1:1的體積比混合，得到豬糞便除臭劑。
步驟a所述活化：將嗜酸乳桿菌菌種接種mrs液體培養(yǎng)基中，置于35-37℃厭氧培養(yǎng)36-48h，然后劃線接種于mrsa平板上，選取5個(gè)以上典型菌落，接種于mrsa斜面若干支，置于37℃培養(yǎng)36-48h，取斜面菌種接種于mrs液體培養(yǎng)基中，置于37℃培養(yǎng)36-48h。
步驟b所述活化：將羅伊乳桿菌菌種接種mrs液體培養(yǎng)基中，置于35-37℃厭氧培養(yǎng)36-48h。
步驟c所述活化：將解淀粉芽孢桿菌菌種接種營(yíng)養(yǎng)肉湯中，置于35-37℃培養(yǎng)24-36h。
步驟d所述活化：將枯草芽孢桿菌菌種接種營(yíng)養(yǎng)肉湯中，置于35-37℃培養(yǎng)24-36h，
本發(fā)明豬糞便除臭劑的使用方法：噴淋，重點(diǎn)噴淋豬排泄處和存在糞污處，處理時(shí)間一般為10d，每天噴淋2次。
本發(fā)明利用微生物的生物發(fā)酵作用，將惡臭物質(zhì)轉(zhuǎn)化為無臭或少臭的物質(zhì)，以達(dá)到去除臭味的目的。同時(shí)惡臭物質(zhì)(如h2s和nh3)被微生物作為其營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸附、分解和利用。對(duì)豬場(chǎng)處理過程為微生物菌群吸附并吸收惡臭物質(zhì)成為微生物的能源，通過微生物新陳代謝被分解、利用和變成細(xì)胞物質(zhì)而去除。其中含硫的惡臭物質(zhì)(h2s)可硫桿菌等的作用而被氧化成s、so32-、so42-，成為其新陳代謝能量的供給源。此外，一些芽孢桿菌可將氨氮轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽，再把亞硝酸鹽轉(zhuǎn)化為硝酸鹽，實(shí)現(xiàn)生物脫臭。
本發(fā)明的生物除臭制劑可降低糞便臭氣中h2s和nh3的濃度，改善養(yǎng)殖場(chǎng)空氣環(huán)境，提高豬只生長(zhǎng)性能，降低相關(guān)疾病發(fā)病率，減少養(yǎng)殖場(chǎng)因疾病治療，病畜死亡造成的藥殘問題和經(jīng)濟(jì)損失。此外，生物除臭制劑可減少糞污對(duì)空氣等生態(tài)環(huán)境的污染，實(shí)現(xiàn)節(jié)能減排，對(duì)生豬綠色生態(tài)養(yǎng)殖理念的推廣也具有較強(qiáng)的示范帶動(dòng)作用。
本發(fā)明的復(fù)合生物除臭制具有活菌數(shù)高、安全、無殘留等特點(diǎn)，提高豬只生產(chǎn)性能6.5％，控制腹瀉發(fā)病率10％以下，減少了豬只糞便h2s和nh3排放量，分別降低了20％和38％。在提高豬只生產(chǎn)性能方面，按每頭豬增加20元利潤(rùn)計(jì)算，推廣應(yīng)用1萬頭仔豬，可提高經(jīng)濟(jì)效益20元×10000頭＝20萬元。通過降低豬只腹瀉率，可減少獸藥使用量，獸醫(yī)費(fèi)等支出約10萬元，合計(jì)：30萬元。
本發(fā)明可減少臨床上治療豬腹瀉抗生素的使用量。在一定程度上降低抗生素殘留問題對(duì)人類生產(chǎn)生活的影響，滿足人們對(duì)綠色豬肉的需求。實(shí)現(xiàn)也可觀的社會(huì)效益。
具體實(shí)施方式
下述使用的sy1-嗜酸乳桿菌(lactobacillusacidophilus)公開自2011第7期《豬業(yè)科學(xué)》94～97頁的《齊齊哈爾周邊地區(qū)仔豬腸道乳酸桿菌的分離與鑒定》。
所述羅伊乳桿菌(lactobacillusreuteri)dyf5公開自2015年第47卷第9期《畜牧與獸醫(yī)》76-79頁的《羅伊乳桿菌噴霧干燥工藝條件優(yōu)化》。
所述解淀粉芽孢桿菌(bacillusamyloliquefaciens)ssyb公開自2016年第46卷第10期《中國獸醫(yī)科學(xué)》1328-1334頁的《解淀粉芽胞桿菌固態(tài)發(fā)酵黃芪培養(yǎng)基的研究》。
所述枯草芽孢桿菌(bacillussubtilis)sy6公開自2013年第26卷第1期《中國生物制品學(xué)雜志》122-128頁的《豬源枯草芽孢桿菌噴霧干燥工藝的優(yōu)化》。
具體實(shí)施方式一：本實(shí)施方式中一種豬糞便除臭劑的制備方法是通過下述步驟完成的：
步驟a、將sy1-嗜酸乳桿菌sy1菌種接種mrs液體培養(yǎng)基中，置于35-37℃厭氧培養(yǎng)36-48h，完成活化，然后劃線接種于mrsa平板上，選取5個(gè)以上典型菌落，接種于mrsa斜面若干支，置于37℃培養(yǎng)36-48h，取斜面菌種接種于mrs液體培養(yǎng)基中，置于37℃培養(yǎng)36-48h，然后接種到乳酸桿菌液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為3％，在37℃h值6.0～7.0條件下厭氧培養(yǎng)48h；
乳酸桿菌液體發(fā)酵步驟b、將羅伊乳桿菌dyf5菌種接種mrs液體培養(yǎng)基中，置于37℃厭氧培養(yǎng)48h，然后接種到乳酸桿菌液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為3％，在37℃h值6.0～7.0條件下厭氧培養(yǎng)48h；
步驟a和b中所述的乳酸桿菌液體發(fā)酵培養(yǎng)基均為：大豆蛋白胨45g，葡萄糖8g，酵母粉20g，低聚乳糖2g，低聚果糖2g，蒸餾水加至1000ml，ph7.0。
乳酸桿菌液體發(fā)酵步驟c、將解淀粉芽孢桿菌ssyb菌種接種營(yíng)養(yǎng)肉湯中，置于37℃培養(yǎng)36h，然后接種到芽孢桿菌液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為2％，在37℃h值6.0～7.0條件下，以150rpm/min速度震蕩培養(yǎng)24h；
步驟d、將枯草芽孢桿菌sy6菌種接種營(yíng)養(yǎng)肉湯中，置于37℃培養(yǎng)36h，完成活化，將活化后接種到芽孢桿菌液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為2％，在37℃ph值6.0～7.0條件下，以150rpm/min速度震蕩培養(yǎng)24h；
步驟c和d中所述的芽孢桿菌液體發(fā)酵培養(yǎng)基均為：蛋白胨12g，牛肉粉4g，nacl3g，葡萄糖2g，蒸餾水加至1000ml，ph7.0。
步驟e、將步驟a、b、c、d得到的液體制劑按1:1:1:1的體積比混合，得到豬糞便除臭劑。
采用下述試驗(yàn)驗(yàn)證發(fā)明效果
步驟a、b、c、d中5000ml放大培養(yǎng)試驗(yàn)，試驗(yàn)重復(fù)3次。試驗(yàn)結(jié)果表明，三次發(fā)酵罐培養(yǎng)試驗(yàn)中，嗜酸乳桿菌培養(yǎng)液的od600值分別為1.252、1.265和1.261，平均od600值為1.259，羅伊乳桿菌培養(yǎng)液的od600值分別為1.212、1.235和1.241，平均od600值為1.229，解淀粉芽孢桿菌培養(yǎng)液的od600值分別,1.846、1.851和1.843，平均od600值為1.847，枯草芽孢桿菌培養(yǎng)液的od600值分別，1.866、1.871和1.863，平均od600值為1.867。
生物除臭劑臨床試驗(yàn)
①除臭劑
實(shí)驗(yàn)組：具體實(shí)施方式一制備的豬糞便除臭。
對(duì)照組：飼喂試驗(yàn)所用生物制劑復(fù)配了羅伊乳桿菌液態(tài)制劑。
②生物除臭劑對(duì)豬舍內(nèi)硫化氫和氨氣濃度的影響
選擇齊齊哈爾周邊豬場(chǎng)，每個(gè)豬場(chǎng)選擇兩棟育肥舍，分別設(shè)為試驗(yàn)組豬舍和對(duì)照組豬舍。實(shí)驗(yàn)組噴淋生物除臭制劑，重點(diǎn)噴淋豬排泄處和存在糞污處，對(duì)照組噴淋滅菌蒸餾水，試驗(yàn)天數(shù)為10d，每天噴淋2次，噴淋試驗(yàn)天數(shù)為7d，每日測(cè)量舍內(nèi)硫化氫和氨氣的濃度。舍內(nèi)采樣點(diǎn)為中心位置，采用真空采氣袋，每日采氣2次，采集氣體樣品及時(shí)運(yùn)研究室，進(jìn)行化驗(yàn)和分析。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)照組豬舍內(nèi)硫化氫和氨氣的濃度均高于試驗(yàn)豬舍。臨床試驗(yàn)前7d對(duì)照組豬舍內(nèi)硫化氫和氨氣濃度最大值分別為0.38和35mg/m3，實(shí)驗(yàn)組分別為0.32和2.6mg/m3。臨床試驗(yàn)后3d，試驗(yàn)組硫化氫和氨氣濃度有所上升，但仍低于對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組豬舍內(nèi)7d時(shí)的硫化氫濃度較對(duì)照組分別降低了20％，6d時(shí)氨氣濃度降低了38％。具體結(jié)果見表1。
表1生物除臭劑對(duì)豬舍內(nèi)硫化氫和氨氣濃度的影響(單位：mg/m3)
③除臭制劑對(duì)豬生長(zhǎng)性能及其糞便h2s和nh3排放量的影響
在齊市周邊豬場(chǎng)進(jìn)行復(fù)合除臭制劑飼喂試驗(yàn)，選擇健康育肥豬120頭，隨即分成2組，其中，試驗(yàn)組：飲水液態(tài)制劑；對(duì)照組：飲水(不添加制劑)，試驗(yàn)周期為30d。液態(tài)制劑飼喂量為1.0×108cfu/d/頭。
試驗(yàn)期內(nèi)記錄每天每組豬只增重情況，計(jì)算頭均日增重；記錄每天各組豬出現(xiàn)腹瀉的頭數(shù)，計(jì)算腹瀉率。腹瀉率＝試驗(yàn)期內(nèi)每日腹瀉病發(fā)生頭數(shù)之和/試驗(yàn)天數(shù)×試驗(yàn)頭數(shù)×100％；監(jiān)測(cè)每組豬只糞便h2s和nh3的平均排放量。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，試驗(yàn)組豬頭均日增重較對(duì)照組高6.3％，在預(yù)防腹瀉方面，試驗(yàn)組豬只腹發(fā)病率低于對(duì)照組，由此可見，飼喂液態(tài)制劑可在一定程度上提高豬生長(zhǎng)性能，預(yù)防腹瀉。實(shí)驗(yàn)組豬只糞便h2s和nh3的平均排放量為5.4和2.2(μg/20g)，均低于對(duì)照組。具體結(jié)果見表2
表2飼用除臭制劑對(duì)豬生長(zhǎng)性能、腹瀉率及臭氣排放量的影響
不同體積比制得的豬糞便除臭劑處理效果
處理7天的效果，見表3
表3
步驟a、b、c、d得到的液體制劑按1:1:1:1的體積比混合，對(duì)豬糞便除臭效果最好。
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