• 核酸檢測(cè)法

核酸檢測(cè)的物質(zhì)是病毒的核酸。核酸檢測(cè)是查找患者的呼吸道標(biāo)本、血液或糞便中是否存在外來(lái)入侵的病毒的核酸，來(lái)確定是否被新冠病毒感染。因此一旦檢測(cè)為核酸“陽(yáng)性”，即可證明患者體內(nèi)有病毒存在 。

新冠病毒感染人體之后，首先會(huì)在呼吸道系統(tǒng)中進(jìn)行繁殖，因此可以通過(guò)檢測(cè)痰液、鼻咽拭子中的病毒核酸判斷人體是否感染病毒。  所以說(shuō)，核酸檢測(cè)陽(yáng)性可以作為新型冠狀病毒感染確診的金標(biāo)準(zhǔn)。 

核酸檢測(cè)原理

所有生物除朊病毒外都含有核酸，核酸包括脫氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），新型冠狀病毒是一種僅含有RNA的病毒，病毒中特異性RNA序列是區(qū)分該病毒與其它病原體的標(biāo)志物。新型冠狀病毒出現(xiàn)后，我國(guó)科學(xué)家在極短的時(shí)間里完成了對(duì)新型冠狀病毒全基因組序列的解析，并通過(guò)與其它物種的基因組序列對(duì)比，發(fā)現(xiàn)了新型冠狀病毒中的特異核酸序列。臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)過(guò)程中，如果能在患者樣本中檢測(cè)到新型冠狀病毒的特異核酸序列，應(yīng)提示該患者可能被新型冠狀病毒感染。 

新型冠狀病毒核酸檢測(cè)原理

檢測(cè)新型冠狀病毒特異序列的方法最常見的是熒光定量PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）。因PCR反應(yīng)模板僅為DNA，因此在進(jìn)行PCR反應(yīng)前，應(yīng)將新型冠狀病毒核酸（RNA）逆轉(zhuǎn)錄為DNA。在PCR反應(yīng)體系中，包含一對(duì)特異性引物以及一個(gè)Taqman探針，該探針為一段特異性寡核苷酸序列，兩端分別標(biāo)記了報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；如反應(yīng)體系存在靶序列，PCR反應(yīng)時(shí)探針與模板結(jié)合，DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性將探針酶切降解，報(bào)告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離，發(fā)出熒光。每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子產(chǎn)生。熒光定量PCR儀能夠監(jiān)測(cè)出熒光到達(dá)預(yù)先設(shè)定閾值的循環(huán)數(shù)（Ct值）與病毒核酸濃度有關(guān)，病毒核酸濃度越高， Ct值越小。不同生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品會(huì)依據(jù)自身產(chǎn)品的性能確定本產(chǎn)品的陽(yáng)性判斷值。 

新型冠狀病毒的核酸檢測(cè)流程

對(duì)于新型冠狀病毒的核酸檢測(cè)，首先根據(jù)試劑盒說(shuō)明書”樣本要求“部分進(jìn)行樣本采集，常規(guī)的樣本類型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液等。

獲得患者樣本后，需盡快進(jìn)行檢測(cè)，如無(wú)法立即檢測(cè)需要轉(zhuǎn)運(yùn)的樣本，應(yīng)按照說(shuō)明書的要求進(jìn)行低溫封裝，并送到專門的檢測(cè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)機(jī)構(gòu)收到樣本后，對(duì)樣本進(jìn)行核酸提取，核酸提取試劑應(yīng)使用批準(zhǔn)產(chǎn)品說(shuō)明書中指定的核酸提取試劑盒。

病毒RNA需要首先逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，再進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)。PCR擴(kuò)增和檢測(cè)應(yīng)使用批準(zhǔn)產(chǎn)品說(shuō)明書中指定的熒光定量PCR儀，通過(guò)熒光定量PCR所得到的樣本Ct值的大小，可以判斷患者樣本中是否含有新型冠狀病毒。

上述過(guò)程中樣本的采集、保存、轉(zhuǎn)運(yùn)，樣本核酸的提取和檢測(cè)、結(jié)果的判讀均須嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書要求進(jìn)行。 

核酸檢測(cè)的“假陽(yáng)性”與“假陰性”

核酸檢測(cè)的“假陽(yáng)性”是指患者本來(lái)沒感染新冠病毒，但核酸檢測(cè)出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果。此“假陽(yáng)性”的出現(xiàn)通常是由于實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)過(guò)程中標(biāo)本間的交叉污染或?qū)嶒?yàn)室核酸污染造成的。在技術(shù)層面上講，只要實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)格落實(shí)質(zhì)控工作，可有效避免“假陽(yáng)性”的產(chǎn)生。

核酸檢測(cè)的“假陰性”是指從患者的臨床癥狀、肺部影像學(xué)結(jié)果甚至流行病學(xué)史都支持為新冠肺炎，但患者病毒核酸檢測(cè)結(jié)果為“陰性”，檢測(cè)結(jié)果與臨床不符。

通?！凹訇幮浴碑a(chǎn)生原因?yàn)椋?/p>

（1）病毒入侵人體初期，人體內(nèi)病毒量尚未達(dá)到可檢測(cè)的程度。在病毒潛伏期、輕度癥狀、嚴(yán)重癥狀的不同時(shí)期，人體的不同部位（如鼻咽部、口咽部、氣管、支氣管和肺泡）的病毒載量會(huì)存在差異。所以，采樣時(shí)機(jī)和采樣部位的不同，可能導(dǎo)致所采集的標(biāo)本中沒有足夠量的病毒；

（2）任何檢測(cè)試劑都有其檢測(cè)下限（即敏感性），如果患者標(biāo)本內(nèi)的病毒達(dá)不到所使用試劑的檢測(cè)下限，則會(huì)出現(xiàn)假陰性；

（3）實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備性能和人員檢測(cè)能力差、質(zhì)量管理落實(shí)不到位等也會(huì)產(chǎn)生“假陰性”；

（4）采樣不規(guī)范、采集部位不當(dāng)、采集標(biāo)本不典型，導(dǎo)致標(biāo)本中被病毒感染的細(xì)胞太少或沒有。即可能造成“假陰性”。