流式細(xì)胞儀是一項集激光技術(shù)、電子物理技術(shù)、光電測量技術(shù)、計算機(jī)技術(shù)以及細(xì)胞熒光化學(xué)技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)為一體的新型高科技儀器。概括來講，流式細(xì)胞術(shù)就是對于處在快速直線流動中的細(xì)胞或生物顆粒進(jìn)行多參數(shù)的快速的定量分析和分選的技術(shù)。從開始設(shè)想到第一臺儀器的問世，科技工作者進(jìn)行了不懈的努力。隨著各相關(guān)技術(shù)的迅速發(fā)展，流式細(xì)胞術(shù)已經(jīng)成為日益完善的細(xì)胞分析和分選工具。目前，流式細(xì)胞儀已普遍應(yīng)用于免疫學(xué)、血液學(xué)、腫瘤學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、生物化學(xué)等臨床醫(yī)學(xué)和基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域[2]。我科于2010年6月引進(jìn)了一臺BD公司的FACSCalibur流式細(xì)胞儀，現(xiàn)已投入到臨床的應(yīng)用中，為臨床診斷和科研提供了強(qiáng)有力的手段。
流式細(xì)胞分析(flowcytometryFCM),又稱流式細(xì)胞術(shù)。其原理是將待測細(xì)胞經(jīng)特異性熒光染料染色后放入樣品管中，在氣體的壓力下進(jìn)入充滿鞘液的流動室。在鞘液的約束下細(xì)胞排成單列由流動室的噴嘴噴出，形成細(xì)胞柱，后者與入射的激光束垂直相交，液柱中的細(xì)胞被激光激發(fā)產(chǎn)生熒光。儀器中一系列光學(xué)系統(tǒng)(透鏡、光闌、濾片、和檢測器等)收集熒光、光散射、光吸收、或細(xì)胞電阻抗等信號。計算機(jī)系統(tǒng)進(jìn)行收集、儲存，顯示并分析被測定的各種信號，對各種指標(biāo)作出統(tǒng)計分析
流式細(xì)胞術(shù)在腫瘤學(xué)上的應(yīng)用大量的臨床應(yīng)用表明，流式細(xì)胞術(shù)對腫瘤細(xì)胞學(xué)的診斷正確率已達(dá)常規(guī)細(xì)胞學(xué)診斷水平。腫瘤細(xì)胞對化療藥物的耐受性是腫瘤治療的主要障礙。腫瘤細(xì)胞的耐藥性可分為原發(fā)耐藥和繼發(fā)耐藥，前者在化療前就存在于腫瘤細(xì)胞中，與用藥無關(guān)，后者是由化療藥物誘導(dǎo)產(chǎn)生的，即在藥物使用前對藥物敏感，而在用藥之后產(chǎn)生耐藥。繼發(fā)耐藥根據(jù)耐藥譜的不同又可分為原藥耐藥(PDR)和多藥耐藥(MDR)。MDR 相關(guān)蛋白包括P 糖蛋白、多藥耐藥相關(guān)蛋白等。它們都屬于ATP 酶活性轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，均是通過藥物外排泵的作用降低細(xì)胞中藥物的聚集。因此應(yīng)用FCM 檢測腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥相關(guān)蛋白的表達(dá)水平，對監(jiān)測臨床腫瘤化療效果及藥物的選擇有一定意義。
流式細(xì)胞術(shù)在臨床細(xì)胞免疫中的應(yīng)用淋巴細(xì)胞亞群的測定 淋巴細(xì)胞分為T淋巴細(xì)胞(CD3)、B淋巴細(xì)胞(CD19)、NK淋巴細(xì)胞(CD16+56)三大群；T淋巴細(xì)胞又分為T輔助細(xì)胞/誘導(dǎo)細(xì)胞(CD4)、T抑制和細(xì)胞毒細(xì)胞(CD8)。
臨床應(yīng)用 總的T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)可以用來判斷某些免疫缺陷和自身免疫性疾病。了解CD4+和CD8+淋巴細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)有助于監(jiān)測患有免疫缺陷疾病、自身免疫性疾病或有免疫反應(yīng)的患者的免疫狀態(tài)。正常人淋巴細(xì)胞CD4+/CD8+比值大約為2/1，比值升高表明機(jī)體免疫機(jī)能亢進(jìn)，見于自身免疫性疾病，如SLE、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、自身免疫性溶血等。比值降低表明機(jī)體免疫機(jī)能下降，如艾滋病、病毒感染、腫瘤患者、活動性肝硬化、AA等。
流式細(xì)胞術(shù)在血液病中的應(yīng)用
流式細(xì)胞術(shù)對白血病的診斷與分型、治療方案選擇與預(yù)后判斷、發(fā)病機(jī)理研究等有重要價值[4]。白血病系列分化抗原T淋巴細(xì)胞白血病：CD3、CD5、CD7。B淋巴細(xì)胞白血?。篊D10、CD19、CD22。NK淋巴細(xì)胞白血?。篊D16、CD56、CD57。髓系白血病：CD13、CD14、CD33、MPO(髓過氧化物酶)。紅白血?。篏lyA(血型糖蛋白A)。巨核細(xì)胞白血?。篊D41、CD42、CD61。臨床應(yīng)用:①用流式檢測白血病和淋巴瘤：對于形態(tài)學(xué)、細(xì)胞化學(xué)染色不能肯定的病例。白血病的流式分析是形態(tài)學(xué)的補(bǔ)充和深化;②形態(tài)學(xué)為急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)或急性未分化白血病(AUL)，但缺乏特異性淋巴細(xì)胞系列抗原標(biāo)記者;③混合性白血病;④部分髓系白血病，目前免疫分型對粒細(xì)胞和單核細(xì)胞白血病的鑒別尚有一定困難;⑤慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL);⑥微小殘留白血病。
流式細(xì)胞術(shù)在網(wǎng)織紅細(xì)胞方面的應(yīng)用 網(wǎng)織紅細(xì)胞生成指數(shù)(RMI)是骨髓移植后的早期監(jiān)測指標(biāo)，是評價貧血藥物療效的一個重要和敏感的指標(biāo)。網(wǎng)織紅細(xì)胞生成指數(shù)不但是一個監(jiān)測腎移植后紅細(xì)胞生成活性的準(zhǔn)確指標(biāo)，而且比網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)更敏感。
流式細(xì)胞術(shù)在血栓或出血性疾病中的應(yīng)用血小板活化程度可由血小板膜糖蛋白(GP)表達(dá)水平的高低來判斷。FCM測定GP的表達(dá)情況以成為檢測血小板功能的一種新方法。血小板活化時其質(zhì)膜糖蛋白較其靜止期發(fā)生很大變化。FCM用于分析血小板或血小板亞群GP，此外，F(xiàn)CM還可通過單抗免疫標(biāo)記(GPⅡb/Ⅲa,CD62,CD63等)檢測血小板功能及活化情況，有利于血小板無力癥、巨大血小板綜合征及血栓栓塞性疾病的診斷和治療。FCM可以通過熒光抗體標(biāo)記測定血小板抗體含量，直接測定血小板表面的相關(guān)抗體；間接法可測定血清中的相關(guān)抗體[5]。利用FCM對血小板相關(guān)免疫球蛋白(PAIg)的檢測對免疫性血小板減少癥的診斷具有一定的價值。
FCM在醫(yī)學(xué)檢驗與研究中的應(yīng)用之廣泛是當(dāng)今先進(jìn)醫(yī)學(xué)儀器中屈指可數(shù)的，F(xiàn)CM的應(yīng)用范圍之所以得到飛速擴(kuò)展主要得益于它的幾個特點(diǎn)：①FCM能對單一細(xì)胞從單色到同時進(jìn)行多色染色，這也使它區(qū)別于傳統(tǒng)的免疫染色法;②它不僅能測定細(xì)胞膜表面標(biāo)記，還可檢測細(xì)胞內(nèi)成分;③FCM還可對液體中的可溶性成分(如細(xì)胞液中的細(xì)胞因子，血液中的自身抗體等)進(jìn)行分析，只要將液體中的可溶性成分結(jié)合到類似于細(xì)胞大小的顆粒上，再進(jìn)行熒光免疫標(biāo)記即可。
流式細(xì)胞技術(shù)優(yōu)勢與特點(diǎn)流式細(xì)胞技術(shù)具有操作簡便、快速分析、客觀精確等優(yōu)點(diǎn)，作為臨床實驗室尖端的檢測技術(shù)被廣泛應(yīng)用，當(dāng)前流式細(xì)胞分析已成為臨床檢驗醫(yī)學(xué)發(fā)展的一個熱點(diǎn)，相信隨著FCM新試劑、新方法的不斷開發(fā)和利用，F(xiàn)CM應(yīng)用領(lǐng)域?qū)絹碓綄拸V
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