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1 移液的基本準(zhǔn)則
檢查溶液的狀態(tài)。這是最重要、也是經(jīng)常缺失的一步。無論你是要吸取無菌水，酶的buffer，還是質(zhì)粒提取試劑盒的溶液II（裂解液，含SDS，在實(shí)驗(yàn)室冬天不恒溫的地區(qū)幾乎一定會沉淀），檢查溶液的狀態(tài)是必不可少的。
無菌水或者無菌培養(yǎng)基要檢查有沒有長霉或者渾濁；buffer等所有從冰箱拿出來的試劑，需要充分解凍，確保所有的固體都溶解（特別是DTT、PMSF、SDS等低溫下會沉淀的化合物），輕彈混勻，簡短離心將所有液體收集到底部，這樣可以避免開蓋時污染手套以及污染試劑本身。特別是量少昂貴的酶溶液，甘油濃度高粘度大，特別容易粘附在管壁和蓋子上，需要加重混勻的力度，加大離心的離心力（個人一般8000~10000g離心一兩秒）。
這里還是要再強(qiáng)調(diào)一下保持移液器垂直和適當(dāng)槍頭深度的重要性。槍頭伸入液面過多、傾斜移液器都會增大移液誤差。
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盡量將液面置于視線所及處。例如從離心管中吸液時可以將離心管抬高至接近眼平。監(jiān)視吸液和放液的全過程很有必要，有的時候因?yàn)闃岊^伸入液面深度不合適或者活塞松開太快的原因，有可能會導(dǎo)致槍頭里有氣泡或者實(shí)際吸液體積不足，甚至沒有吸到任何液體；放液的時候沒有靠壁可能導(dǎo)致液體飛濺損失。如果你目睹了移液放液的全過程，你就有機(jī)會糾正這些問題。
縮短移液距離。移液距離過長不僅增加漏液的風(fēng)險，動作過大也可能導(dǎo)致移液器污染，盡可能將源和目標(biāo)靠近。
標(biāo)記移過的離心管。沒有人能夠持續(xù)100%專注一個小時，如果沒有養(yǎng)成標(biāo)記移液位置的習(xí)慣，一旦做實(shí)驗(yàn)的時候有人跟你插話，等你回過神的時候就很難再回到正確的位置了。下面我說說我自己的習(xí)慣，供大家參考。假如你有兩排離心管，需要從上排離心管吸取液體到對應(yīng)的下排離心管。我會把第一個離心管拿到眼前吸液，蓋好后放到原來位置的上面一排，以作吸過液的標(biāo)記。然后拿起下排對應(yīng)的離心管，放液之后放到原來位置的下面一排，作為放液完成的標(biāo)記。以此類推，這樣即使中途有人跟你說話，只要回過頭來看離心管的位置就能快速恢復(fù)。實(shí)際操作中為了更好地執(zhí)行第三條準(zhǔn)則，我會將兩個離心管同時持握，這樣移液距離幾乎為最小，非常適合需要多次從源中轉(zhuǎn)移液體至目標(biāo)的過程，例如從離心之后的離心管中吸取上清至質(zhì)粒純化柱中，我會從200微升的移液器多次轉(zhuǎn)移。
熒光定量PCR加樣的時候，孔多比較容易出錯，集中注意力是準(zhǔn)確率最好的保障。也可以用一些小卡片標(biāo)記加樣的行或者列，用記號筆在板子上畫一些記號點(diǎn)等幫助自己確定加樣位置。也有人會用消耗的槍頭的位置來標(biāo)定加樣位置，一般一盒10微升槍頭的數(shù)量和一整板加樣孔數(shù)量都是96個，可以一一對應(yīng)。
一般質(zhì)粒提取試劑盒，裂解中和離心之后的上清約為750微升左右，用1000微升的槍可以一次吸完，為什么我會用200甚至100的槍吸多次？這就是移液中的另一個重要原則，遇到非均相液體盡量使用小量程移液器。這里非均相液體指的是溶液中有固體沉淀或者有不同密度的不相溶液體。質(zhì)粒提取離心之后管壁管底有大量細(xì)胞碎片，有時這些沉淀比較疏松，如果用大口徑移液器，松開活塞又太快的話，會將沉淀一下子吸起來，降低質(zhì)粒質(zhì)量。用小口徑槍頭還有一個好處，就是很容易將上清盡量吸干凈，用大槍頭是幾乎不可能的總有殘余。很多人明明照著說明書一步一步地提質(zhì)粒，質(zhì)量和產(chǎn)量卻總是比別人差一些，怎么找都找不到原因，其實(shí)問題都出在最基礎(chǔ)的移液上，基本功沒有打好。
非均相液體還有一個典型的例子是酚氯仿純化，吸取上清水相。這是一個比較難的例子，往往中間還有一層不是很緊密的蛋白沉淀。用1000微升槍幾乎都會吸到中間層，而且上清的轉(zhuǎn)移率很低，直接降低了產(chǎn)量。用一把100的槍慢慢吸就能解決這個問題。
還有一種情況是所需的液體密度較大在下層溶液中。這種情況是最難對付的，需要一點(diǎn)技巧，因?yàn)槊芏却笥谒囊后w往往是高密度高揮發(fā)的有機(jī)溶劑，氯仿、二氯甲烷之類。此時如果把槍頭伸入下層之后還想吹打潤洗的話，大氣泡會把中間層攪散。個人目前的方法是，活塞推到一檔底部，把槍頭伸入有機(jī)層，等一會兒。你會看到有機(jī)溶液在槍頭尖端不斷揮發(fā)造成的正壓會自動從槍頭里推出一些小氣泡出來，這些氣泡夠小不會攪散沉淀。稍等一會兒待氣泡幾乎不產(chǎn)生了，緩緩吸一大半量程液體，保持活塞不動，這時由于正壓繼續(xù)產(chǎn)生，你會看到液面逐漸下降。繼續(xù)等一會兒，待液面相對穩(wěn)定了，將槍頭貼在管壁上移出液面放液。然后再用同一個槍頭繼續(xù)伸入有機(jī)相吸液，由于上一次吸液已經(jīng)讓槍頭內(nèi)部有機(jī)溶劑蒸氣壓分壓升高，一般第二次再吸液面下降的現(xiàn)象就很弱了，第三次再吸幾乎就不會感覺到液面下降。
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