熟悉不同臨時(shí)玻片制作方法；通過(guò)觀察，認(rèn)識(shí)病原真菌的營(yíng)養(yǎng)體及其變態(tài)，認(rèn)識(shí)真菌的子實(shí)體、有性繁殖、無(wú)性繁殖產(chǎn)生的各種類(lèi)型孢子。 二、實(shí)驗(yàn)用具 挑針、刀片、木板、酒精燈、火柴、載玻片、蓋玻片、紗布、（棉藍(lán)）乳酚油、二甲苯、顯微鏡、擦鏡紙、吸水紙等。 三、內(nèi)容與方法 1．臨時(shí)玻片的制作 臨時(shí)玻片制作方法很多，如涂、撕、粘、挑和切片等，可以根據(jù)病原物的類(lèi)型選擇使用。（1）涂抹法：細(xì)菌和酵母菌的培養(yǎng)物常用涂抹法制片。將細(xì)菌或酵母菌的懸浮液均勻地涂在潔凈的載玻片上，在酒精燈火焰上烘干、固定，再加蓋玻片封固。加蓋玻片前還可進(jìn)行染色處理，使菌體或鞭毛著色而易于觀察。（2）撕取法：用小金屬鑷子仔細(xì)撕下病部表皮或表皮毛制成臨時(shí)玻片。（3）粘貼法：將塑料膠帶紙剪成邊長(zhǎng)5mm左右的小塊（注意膠帶上不要印有指?。鼓z面朝下貼在病部，輕按一下后揭下制成玻片。（4）挑取法：用挑針從病組織或基物（如培養(yǎng)基）上挑取表面的霉?fàn)钗?、粉狀物或孢子團(tuán)制成玻片。（5）組織透明法：將少量病組織材料切成細(xì)絲后放在載玻片上，滴加乳酚油后在酒精燈上徐徐加熱至蒸氣出現(xiàn)。如此處理數(shù)次使組織透明，冷卻后加蓋玻片進(jìn)行鏡檢。此法可以觀察到病原物在寄主內(nèi)的原有狀態(tài)。（6）徒手切片：徒手切片時(shí)選取病狀典型、病征明顯的病組織材料，先在病征明顯處切取病組織小塊（邊長(zhǎng)5－8mm），放在小木塊上，用食指輕輕壓住，隨著手指慢慢地后退，用刀片的刀尖將壓住的病組織小塊切成很薄的絲或片，用沾有浮載劑的挑針或接種針挑取薄而合適的材料放在一干凈載玻片上的浮載劑液滴中央，蓋上蓋玻片，仔細(xì)擦去多余的浮載劑（注意浮載劑過(guò)多會(huì)使觀察物出現(xiàn)晃動(dòng)不穩(wěn)定現(xiàn)象），即制成一張臨時(shí)玻片。 水：溢菌、線蟲(chóng)活動(dòng)、真菌孢子萌發(fā)、大小測(cè)量– 優(yōu)點(diǎn)：方便– 缺點(diǎn)：產(chǎn)生氣泡；易干燥乳酚油：除上述外均可用。– 優(yōu)點(diǎn)：殺菌固定、孢子膨脹復(fù)原、組織透明– 缺點(diǎn)：不易封固、有毒 取小麥白粉病葉片，分別用上述6種方法制片，觀察白粉病菌的分生孢子梗、分生孢子、菌絲和吸器。并比較每種方法分別適于觀察白粉菌的什么形態(tài)特征。 2． 病原真菌的營(yíng)養(yǎng)體 用挑針挑取平板上培養(yǎng)好的瓜果腐霉病菌（Pythium aphanidermatum）、立枯絲核菌（Rhizoctonia solani）和鏈格孢菌（Alternaria sp.）的菌絲體，用
蒸餾水作浮載劑，制臨時(shí)玻片鏡檢，觀察菌絲有無(wú)隔膜？菌絲體直徑變化是否明顯？顏色有無(wú)差別？ 2．1 真菌營(yíng)養(yǎng)體的變態(tài) （1）吸器：吸器的形態(tài)有圓球狀、棒狀、裂片狀、掌狀、根狀等。觀察用撕取法制片的小麥白粉病菌（Blumeria graminis）吸器形態(tài)，注意吸器的形狀和在細(xì)胞內(nèi)的位置。為便于清楚觀察，也可以用棉藍(lán)乳酚油作為浮載劑。（2）假根：是由菌絲分化的根狀分枝。挑取甘薯軟腐病菌（Rhizopus stolonifer）平板培養(yǎng)物制片鏡檢，觀察在孢囊梗基部的假根的形態(tài)和顏色。（3）菌核：是菌絲體的菌絲糾結(jié)而成的堅(jiān)固的顆粒狀休眠體。觀察油菜菌核病菌（Sclerotium sclerotiorum）的菌核和小麥麥角病菌(Claviceps purpurea)的菌核標(biāo)本。比較兩種菌核的大小、形狀和色澤有何不同？（4）根狀菌索：許多菌絲體平行生長(zhǎng)并糾結(jié)成繩索狀，稱為根狀菌索。在示范鏡下觀察蘋(píng)果或甘薯紫紋羽病菌(Helicobasidium purpureum)的根狀菌索。 （5）子座：由菌絲體或由菌絲體和寄主組織共同組成的著生子實(shí)體的墊狀物。在子座上形成無(wú)性或有性孢子。在顯微鏡下觀察麥角病菌（Claviceps purpurea）頭狀子座的切片，注意其內(nèi)部結(jié)構(gòu)與菌核有何區(qū)別，或鏡檢大葉黃楊葉斑病菌或紫荊葉斑病菌（Cercospora sp.）的墊狀子座。 3． 病原真菌的繁殖體——子實(shí)體 3．1 無(wú)性孢子 （1）游動(dòng)孢子囊和游動(dòng)孢子：鞭毛菌亞門(mén)真菌的無(wú)性繁殖器官是孢子囊。大多數(shù)鞭毛菌孢子囊可釋放出具鞭毛、在水中能游動(dòng)的游動(dòng)孢子，故其孢子囊又稱為游動(dòng)孢子囊。鏡檢腐霉菌(Pythium sp.)和疫霉菌(Phytophthora sp.)的游動(dòng)孢子囊形態(tài),注意孢囊梗與菌絲有無(wú)區(qū)別。（2）孢子囊和孢囊孢子：接合菌亞門(mén)真菌的無(wú)性繁殖器官是孢囊孢子。鏡檢根霉菌（Rhizopus spp.）、毛霉菌（Mucor spp.）、犁頭霉菌（Absidia spp.）的孢子囊、孢囊孢子。（3）分生孢子：半知菌亞門(mén)真菌和子囊菌的無(wú)性世代繁殖時(shí)都可產(chǎn)生分生孢子。分生孢子多著生在分生孢子梗上。分生孢子梗有色或無(wú)色、散生或聚生，或著生在分生孢子座、分生孢子盤(pán)或分生孢子器內(nèi)。采用挑、刮或切片的方法制作臨時(shí)玻片，觀察下列病原菌分生孢子的顏色、分隔；分生孢子梗的形態(tài)、顏色，是否分枝及分枝的類(lèi)型、著生位置等。玉米小斑病菌（Bipolaris maydis）花生黑斑病菌（Cercospora arachidicola）小麥白粉病菌（無(wú)性世代）（Oidium monilioides）柑桔青霉病菌（Penicillium italicum） 棉花黃萎病菌（Verticillium dahliae）稻瘟病菌（Pyricularia oryzae）馬鈴薯早疫病菌（Alternaria solani）（4）厚壁孢子：又稱厚垣孢子。由菌絲中個(gè)別細(xì)胞膨大、細(xì)胞壁(cell wall)加厚而形成的一種厚壁孢子。對(duì)不良環(huán)境的抵抗能力較強(qiáng)。挑取棉花枯萎病菌（Fusarium oxysporum）或樟疫霉（Phytophthora cinnarnomi）的培養(yǎng)物制片鏡檢，觀察厚垣孢子的形狀、顏色和孢子壁的厚度。 3．2 有性孢子 （1）卵孢子：是鞭毛菌亞門(mén)真菌產(chǎn)生的有性孢子，常由形態(tài)、大小不同的雌、雄性器官交配形成。卵孢子通常形成于藏卵器內(nèi)，每個(gè)藏卵器內(nèi)可包含1至多個(gè)卵孢子，其數(shù)目因真
菌種類(lèi)不同而異。挑取疫霉（Phytophthora sp.）的培養(yǎng)物（連同培養(yǎng)基）制片、鏡檢觀察藏卵器的形態(tài)、色澤、壁有無(wú)飾紋或光滑；雄器形態(tài)及其位置；卵孢子形態(tài)、每個(gè)藏卵器內(nèi)卵孢子的數(shù)目、卵孢子是否充滿藏卵器。（2）接合孢子：是接合菌亞門(mén)真菌產(chǎn)生的有性孢子，由兩個(gè)形狀和大小相似的雌、雄配子囊結(jié)合而成。挑取根霉（Rhizopus sp.）、毛霉(Mucor sp．）或犁頭霉（Absidia sp.）正、負(fù)菌株在PDA培養(yǎng)基上交配7－10天后的培養(yǎng)物制片、鏡檢，觀察接合孢子的形狀、表面的飾紋、色澤、配囊柄的形狀及有無(wú)絲狀附屬物。（3）子囊孢子：子囊菌亞門(mén)真菌的有性孢子，產(chǎn)生在子囊內(nèi)。子囊孢子有色或無(wú)色、單胞或多胞，具多種形狀。采用挑、刮或切片的方法制作臨時(shí)玻片或直接觀察永久玻片，鏡檢下列病原物。觀察子囊孢子的形態(tài)、顏色；子囊的形態(tài)；子囊果的類(lèi)型。桃縮葉病菌（Taphrina deformans）小麥白粉病菌（Erysiphe graminis）桑里白粉病菌（Phyllactinia corylea）小麥赤霉病菌（Gibberella zeae）蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌（Valsa mali）麥角病菌（Claviceps purpurea）（4）擔(dān)孢子：擔(dān)子菌亞門(mén)真菌產(chǎn)生的有性孢子。擔(dān)孢子產(chǎn)生在擔(dān)子上。觀察膠銹菌（Gymnosporangium sp.）冬孢子萌發(fā)形成的擔(dān)子及擔(dān)孢子的形態(tài)。 四、作業(yè)與思考題 （1）認(rèn)識(shí)病原真菌菌絲、無(wú)性孢子、有性孢子有何意義？（2）說(shuō)明針對(duì)不同的病征類(lèi)型在顯微鏡觀察時(shí)應(yīng)采用何種制片方法？（3）填圖，注明圖1中各部分的名稱。 圖1病原真菌子實(shí)體形態(tài)圖（填注各部分名稱）
1.鞭毛菌 2.接合菌 3.子囊菌 4.擔(dān)子菌 五、所需學(xué)時(shí)
