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那些美麗的花兒-再談測序儀異同(輸入和輸出的區(qū)別)
微微有個夢想,在一個美麗的花園(實驗室)中,擁有好多好多測序儀。
就像千姿百態(tài)的花兒們一樣,每款測序儀都有其自身的美好(特點)。欣賞它,了解它,使用它,就像在花園中輕撫含苞待放的花朵一樣,是多么賞心悅目心曠神怡的事情啊~
之前,微微也與同好們交流過每款測序儀的特點,測序儀之華山論劍測序儀華山論劍之Nanopore
今天,微微再和大家聊聊三款常用的高通量測序儀輸入和輸出方面的異同~


01

以Miseq為代表的Illumina測序儀

(二代)

輸入:

支持預(yù)先準(zhǔn)備好的SampleSheet作為文件輸入(部分機器也支持全界面式下一步操作)

優(yōu)點:1、提前配置好測序類型,如單端測序或雙端測序、測序讀長、文庫類型和數(shù)量、樣本名稱等。2、支持樣本名和文庫的直接配對,輸出測序文件名稱中涵蓋樣本名,便于區(qū)分。

缺點:如填寫不正確,影響測序分樣。雖然有補救方法可重新分樣,但浪費時間。

輸出:在默認(rèn)路徑(如D:\Illumina)下,建立時間戳文件夾,在該文件夾下輸出分樣后的測序文件。文件格式為*.fastq.gz。

優(yōu)點:直接分樣;按照samplesheet中樣本名分樣,容易區(qū)分。

02

BGIseq華大測序儀

(二代)

輸入:

測序儀自帶可視化操作系統(tǒng),設(shè)置時基本是下一步下一步的方式進(jìn)行,無samplesheet

優(yōu)點:簡單,無需單獨填寫文庫信息

輸出:

在默認(rèn)路徑下,建立時間戳文件夾,在該文件夾下輸出分樣后的測序文件。文件格式為*.fastq.gz。

優(yōu)點:直接分樣。

缺點:(1)輸出所有文庫(包含沒有上機的)。比如上機的樣本數(shù)是48,只用了48個barcode,但是測序儀還是會按照96個barcode執(zhí)行拆分,拆分出一些空文件。

(2)輸出fastq文件是按barcode命名,與樣本的對應(yīng)關(guān)系需要分析人員一一對應(yīng)。



03

Nanopore

(三代)

輸入:

測序儀自帶系統(tǒng)設(shè)置,下一步下一步的方式進(jìn)行,無samplesheet

輸出:在默認(rèn)路徑下,建立時間戳文件夾,在該文件夾下的pass/fastq文件夾下輸出多個fastq格式的文件(默認(rèn)為每4000條序列保存于一個文件)。

優(yōu)點:數(shù)據(jù)實時產(chǎn)生。

缺點:對于多個樣本同時上機的情況,需對測序數(shù)據(jù)額外進(jìn)行分樣。

簡單的小結(jié)一下:

三款測序儀的相同點:

1、輸出的都是fastq或fastq.gz文件。

2、各測序儀都有圖形化的操作軟件供實驗人員使用。

3、輸出文件都存放在默認(rèn)路徑下的帶時間戳的文件夾下。

三款測序儀的不同點:

1、Illumina和BGIseq支持自動分樣,Nanopore不支持。

2、Nanopore實時產(chǎn)生測序數(shù)據(jù),Illumina和BGIseq需要在測序反應(yīng)全部完成的情況下再等1個小時左右時間等待數(shù)據(jù)文件輸出。

3、Illumina通過samplesheet的方式支持樣本管理以及樣本與數(shù)據(jù)的配對。

End

微微碎碎念:以上信息只是基于筆者操作過的測序儀所總結(jié)的,也有特殊型號測序儀有不同要求的可能性哦。具體信息還是要以測序儀廠家官方信息為準(zhǔn)。


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Mypathogen

微微悅明

科學(xué)的樂趣是獲得新知識的喜悅

高通量測序、大數(shù)據(jù)

病原微生物檢測和監(jiān)測

健康大數(shù)據(jù)行業(yè)資訊記錄與分享

每一天獲得一點微小的收獲和進(jìn)步。小確幸的科研也很好。與君共勉!

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