原理：Trizol試劑是直接從細(xì)胞或組織中提取總RNA的試劑。在樣品裂解或勻漿過程中，Trizol能保持RNA的完整性。加入氯仿后離心，樣品分成水樣層和有機(jī)層。RNA存在于水樣層中。收集上面的水樣層后，RNA可以通過異丙醇沉淀來還原。在除去水樣層后，樣品中的DNA和蛋白也能相繼以沉淀的形式還原。乙醇沉淀能析出中間層的DNA，在有機(jī)層中加入異丙醇能析出有機(jī)層的蛋白。共純化DNA對于樣品間標(biāo)準(zhǔn)化RNA的產(chǎn)量十分有用。
Trizol試劑可用于小量樣品（50~100mg組織，5×106細(xì)胞），也可用于大量樣品（≥1g組織或≥107細(xì)胞），對人、動物、植物和細(xì)菌、血液提取都適用，可同時處理大量不同樣品。一個小時內(nèi)即可完成反應(yīng)，提取的總RNA沒有DNA和蛋白質(zhì)污染，可用于Northern blot、RT-PCR、Dot blot、RNase保護(hù)分析等。
本試劑為紅顏色，便于區(qū)分水相和有機(jī)相，同時最大限度的保持RNA的完整性。
保存條件：2~8℃避光保存12個月。
實(shí)驗(yàn)前需要準(zhǔn)備的試劑：
Trizol，氯仿，異丙醇，75%乙醇（用RNase-Free水配制），RNase-Free水。
實(shí)驗(yàn)前需要準(zhǔn)備的物品：
1ml注射器，1.5ml EP管（DEPC處理過），大、中、小號槍頭（DEPC處理）
樣品前處理注意點(diǎn)：
選擇新鮮血液，不得超過4小時。
選擇新鮮組織，生長旺盛的組織。
選擇新鮮的幼嫩組織。
選擇處于生長旺盛的時期收集細(xì)胞。
RNA純化要求：
純化后不應(yīng)存在對酶（如逆轉(zhuǎn)錄酶）有抑制作用的物質(zhì)。
排除有機(jī)溶劑和金屬離子的污染。
蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子等的污染降到最低程度。
排除DNA分子的污染。
RNA提取的注意事項(xiàng)：
杜絕外源酶的污染。
嚴(yán)格戴好口罩，手套。
實(shí)驗(yàn)所涉及的離心管，Tip頭，移液器桿，電泳槽，實(shí)驗(yàn)臺面等要徹底處理。
實(shí)驗(yàn)所涉及的試劑/溶液，尤其是水，必須確保RNase-Free。
阻止內(nèi)源酶的活性。
選擇合適的勻漿方法。
選擇合適的裂解液。
控制好樣品的起始量。
明確自己的提取目的。
任何裂解液系統(tǒng)在接近樣品最大起始量時，提取成功率急劇下降。
RNA提取成功的唯一經(jīng)濟(jì)的標(biāo)準(zhǔn)是后續(xù)實(shí)驗(yàn)的一次成功，而不是得率。
Rnase污染的10大來源
手指頭、槍頭、水/緩沖液、實(shí)驗(yàn)臺面、內(nèi)源Rnase、RNA樣品、質(zhì)粒提取、RNA保存、陽離子（Ca，Mg）、后續(xù)實(shí)驗(yàn)所用的酶
文章轉(zhuǎn)自英格恩生物技術(shù)博客！
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