目前針對(duì)miRNA研究,已經(jīng)有很完整的體系,小優(yōu)也多次的對(duì)miRNA研究的其他技術(shù)進(jìn)行多次講解,本期是針對(duì)細(xì)胞水平miRNAs的定位研究--原位雜交(ISH)的介紹哦~
原位雜交技術(shù)(in situhybridization)是以標(biāo)記的核酸分子為探針,在組織細(xì)胞原位檢測(cè)特異核酸分子的技術(shù)。
圖注:miRNA原位雜交示意圖。左側(cè)為ISH在細(xì)胞/組織水平上的步驟,右側(cè)是分子水平上的步驟。紅色和綠點(diǎn)代表熒光團(tuán),正方形代表非熒光配體。黑色的十字架表示miRNA的固定化。
在最早的ISH中,通常使用由DNA或RNA核苷酸組成的探針。未經(jīng)修飾的DNA和RNA探針對(duì)目標(biāo)序列的結(jié)合親和力相對(duì)較差,因此有人提出了一些修飾來改善它們的性質(zhì),最早也是最經(jīng)典的修飾就是LNA修飾,這仍然是RNA FISH的金標(biāo)準(zhǔn)。
圖注:LNA結(jié)構(gòu)圖
miRCURY LNA miRNA Detection Probe為經(jīng)典的LNA修飾miRNA ISH檢測(cè)探針,除此之外,對(duì)mRNA和lncRNA的檢測(cè)也有很大的幫助哦~
LNA探針已經(jīng)成功的使用在多種樣本類型中(圖3),包括whole mount,單細(xì)胞,冷凍切片及FFPE組織樣本等。
miRNA detection in FFPE
miRNA detection in zebrafish.
LNA探針還可以用于核酸和蛋白的共定位,熒光標(biāo)記的探針與IHC同時(shí)進(jìn)行,更簡(jiǎn)單獲得鮮明的結(jié)果哦~
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