曲水解淀粉為還原糖的能力叫糖化力。糖化力是評(píng)定曲子質(zhì)量的重要指標(biāo)。測(cè)定糖化力的方法有廉-愛(ài)農(nóng)法和碘量法,廉-愛(ài)農(nóng)法最為常用,本節(jié)主要講此法。
1、原理
一定條件下,用試樣浸出液在一定的pH、溫度下水解淀粉,一定時(shí)間后生成葡萄糖量的多少表示試樣的糖化力。
2、儀器
水浴鍋
3、試劑
⑴ 斐林氏試液(參見(jiàn)還愿糖的測(cè)定)
⑵ 1.0g/L葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液(參見(jiàn)還原糖的測(cè)定)
⑶ pH=4.6醋酸-醋酸鈉緩沖溶液
2mol/L醋酸溶液:量取118mL冰醋酸,加水稀釋至1000mL。
2mol/L醋酸鈉溶液:稱(chēng)取272克醋酸鈉(CH3COONa.3H2O),加水溶解,并用水稀釋至1000mL。
⑷ 20g/L淀粉溶液
稱(chēng)取2.00g預(yù)先于100~105℃烘干2小時(shí)的可溶性淀粉,加入約10mL水調(diào)勻,傾入約80mL煮沸的蒸餾水中,繼續(xù)煮沸至透明,冷卻后,用水稀釋至100mL。
⑸ 氫氧化鈉溶液C(NaOH)=0.1mol/L(參見(jiàn)白酒中總酸的測(cè)定)
4、操作
⑴ 5%固體曲浸出液的制備
按計(jì)算量,稱(chēng)取相當(dāng)于5.00g絕干曲的試樣量,置于250毫升燒杯中,加90毫升水及pH=4.6的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液10mL,搖勻。置燒杯于35℃恒溫水浴中保溫1h,保溫間隔15min攪拌一次。浸出液用脫脂棉或多層紗布過(guò)濾,濾液盡快測(cè)定。
⑵ 糖化
吸取25.0mL20g/L淀粉溶液于50毫升容量瓶中,將容量瓶置于35℃水浴中保溫10min。加入5.00ml固體曲浸出液,立即混勻計(jì)時(shí)。
準(zhǔn)確于35℃保溫1h,迅速加入15mlC(NaOH)=0.1mol/L的氫氧化鈉溶液,終止酶解反應(yīng)。
冷至室溫后,用水定容至50毫升,搖勻,得到糖化液。
⑶ 空白試驗(yàn)
吸取25.0mL20g/L淀粉溶液于50毫升容量瓶中,將容量瓶置于35℃水浴中保溫10min。先加入15mLC(NaOH)=0.1mol/L的氫氧化鈉溶液,然后再準(zhǔn)確加入5.00mL固體曲浸出液,用水定容至50毫升,搖勻。
⑷ 測(cè)定
吸取斐林氏甲液、乙液各5毫升于150毫升三角瓶中,加入5.0毫升制備好的糖化液,自滴定管中加入一定量1.0g/L的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液(使隨后滴定時(shí)其用量不超過(guò)1mL),于電爐上加熱至沸騰,保持沸騰2min,在沸騰下繼續(xù)用1.0g/L葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液以每秒1滴的速度滴定至藍(lán)色剛好消失,溶液呈淺黃色。此滴定操作需在1min內(nèi)完成。其消耗的1.0g/L的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)控制在1毫升內(nèi)。記錄消耗糖液的體積。同時(shí)作一空白試驗(yàn)。
空白試驗(yàn)吸取斐林氏甲、乙液各5.0ml于三角瓶中,加入5.0mL制備好的空白液,以下操作同試樣的測(cè)定。
5、計(jì)算
固體曲糖化力的定義:在35℃pH=4.6時(shí),1g絕干曲1h內(nèi)酶解可溶性淀粉為葡萄糖的質(zhì)量。
X=
式中:
X:糖化力,葡萄糖mg/g.h;
v0:標(biāo)定斐林氏試液時(shí)消耗葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積,mL;
V:測(cè)定試樣時(shí)消耗葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積,mL;
ρ;葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度,g/L;
m:試樣的取樣量,g;
t:酶解時(shí)間,h。
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