獼猴桃的繁殖方式是多樣化的,有實生繁殖、嫁接繁殖、扦插繁殖,這三種方式就是屬于常見且容易上手類型的,所需要的硬件條件也不是十分嚴(yán)格。但是還有一種繁殖方式,只是在硬件條件上相對要復(fù)雜一些,上手難度較大,但是如果遇到不能量產(chǎn)的稀有品種,通過此方法就能取得重大的效果,所以了解其過程以及繁殖方法是有一定的好處。
從理論上講,植物的每一個細(xì)胞都具有成長為一個完整植株的功能,只要能滿足它成為植株的條件。正是這樣,植物組織培養(yǎng)成為一種重要的繁殖技術(shù)。
獼猴桃組織也同其它植物組織一樣具有無限增殖和產(chǎn)生不定芽及不定根的能力,在適宜的培養(yǎng)條件下,用一部分組織可以培養(yǎng)出許多植株,并能保持原有植物的種性,特別是對于數(shù)量稀少的優(yōu)良品種和砧木,采用組織培養(yǎng)來進(jìn)行工廠化育苗具有重要意義。
獼猴桃的組織培養(yǎng)繁殖過程分為六個步驟,要比常見的嫁接、扦插等方法繁雜一些,但是各個方法具有的優(yōu)點與缺點都是不一樣的,所以掌握組織培養(yǎng)繁殖技術(shù)也具有一定的重要性,詳細(xì)的操作步驟請看以下介紹。
1.材料
組織培養(yǎng)的材料可以選用獼猴桃的莖段、莖尖、腋芽、葉片、葉梗、下胚軸、胚乳、幼胚、原生質(zhì)體等,均可作培養(yǎng)材料。在國外也有用根、果實組織(幼果果皮附近的組織)作接種材料的。常用的組織培養(yǎng)材料為獼猴桃莖段、莖尖和腋芽。
2.滅菌消毒
因各個器官組織的特性不同,無菌操作所用消毒藥品、濃度、操作方法、處理時間等也有所差異。常用消毒滅菌劑有多種,效果不盡相同,在實踐中應(yīng)根據(jù)材料摸索試驗,以探索出既達(dá)到消毒滅菌,而又不損傷材料的藥劑。
常用消毒滅菌劑及效果比較
基本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基,但培養(yǎng)材料不同,其組分也有所變化。
蔗糖和瓊脂的用量可根據(jù)不同需要進(jìn)行調(diào)整,培養(yǎng)基的酸堿度調(diào)至pH5.8。配好培養(yǎng)基,分裝于玻璃容器內(nèi),在120℃高壓蒸氣下滅菌30分鐘后備用。
MS培養(yǎng)基的基本組分如下表。
MS培養(yǎng)基的基本組分
外植體選取健壯的當(dāng)年生嫩枝上的莖段、莖尖或腋芽。將外植體用自來水沖洗2小時,用75%乙醇漂30秒鐘,用0.1%氯化汞溶液滅菌5~8分鐘,倒凈滅菌液,用無菌水沖洗3~4次。如果是莖段接種,則用消毒解剖刀刮去表皮,露出綠色皮層,再縱劈成2~4片,并剪成0.5~1.0厘米長的小段,小段不能帶有節(jié)部,接種在試管中的培養(yǎng)基上,每管2~4小段(試管30毫米×160毫米)。
如果是莖尖或腋芽培養(yǎng),每個試管的培養(yǎng)基上接種一個芽。莖尖應(yīng)剝?nèi)ッ患叭~片,留下黃綠色帶有1~2個葉原基的小葉片作培養(yǎng)材料。
上述外植體接種的基本培養(yǎng)基為MS,蔗糖濃度2%,pH5.8,添加玉米素0.1~30毫克/升、6-BA(6-芐基腺嘌呤)0.1~5毫克/升、IBA(吲哚丁酸)0.1~5毫克/升和NAA(萘乙酸)0.1~5毫克/升。
接種后將試管放在培養(yǎng)室的培養(yǎng)架上,培養(yǎng)溫度25±1℃,光強(qiáng)度1000勒克斯,每日照光12小時。
外植體培養(yǎng)一周后,產(chǎn)生愈傷組織,一個月可見到分化出來的小植株。待莖長到1~3厘米,即進(jìn)行繼代培養(yǎng)。采用切斷法,將其剪成約1厘米長莖段,接種到新的培養(yǎng)基中。以后每隔約30天進(jìn)行一次繼代培養(yǎng),每次的莖段增殖量約為3~4倍。
反復(fù)進(jìn)行,直到所需繁殖數(shù)量。根據(jù)成都生物所的試驗,待試管苗伸長到4~5厘米時進(jìn)行剪切,每次切成4段,每隔60天切一次,一年可切6次,即1個芽的繁殖系數(shù)為4的6次方,即4096株。
繼代培養(yǎng)切莖
試管內(nèi)繼代培養(yǎng)的小植株長到2厘米左右時,從基部切下,用吲哚丁酸(IBA)20~30毫克/升液浸泡2小時,再轉(zhuǎn)接在生根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根。
生根培養(yǎng)基的成分為MS培養(yǎng)基的大量元素減半,包括激素和蔗糖也要減半,其它成分不變。轉(zhuǎn)接生根培養(yǎng)時,要防止葉片接觸培養(yǎng)基,以利生根。經(jīng)培養(yǎng)10天左右,在基部切口即可產(chǎn)生不定根,20天左右成為真根,變成完整幼苗。待植株長到3~5厘米,則可進(jìn)行鍛煉、移栽。
組培苗是在嚴(yán)格的人工操控條件下長成的,對自然生態(tài)環(huán)境條件下能否適應(yīng),還需要一個過渡階段,這個過渡階段就是鍛煉。方法是:將試管苗轉(zhuǎn)移到較大的容器中培養(yǎng),使小苗生長健壯;或?qū)⒂忻绲脑嚬芤频阶匀还庹障?~3天,打開試管口2~3天,使試管苗得到鍛煉,然后移栽。
試管苗移栽時先用30℃左右溫水,洗凈苗上的瓊脂等培養(yǎng)基,再移入溫室栽植,不要直接移入露地栽植,因成活率很低。溫室保持20~25℃的溫度,95%的空氣相對濕度,土壤為腐殖土或人工配制的營養(yǎng)土。溫室中生長80天左右,葉可長到8片以上,株高6厘米以上,新根數(shù)量500條以上,長17厘米以上。然后再移栽到露地苗圃,成活率極高。
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