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在進(jìn)行疾病治療時(shí)，需要將藥物通過口服、注射等不同的方法途徑遞送到人體內(nèi)才能發(fā)揮作用。

而在我們?nèi)粘５目茖W(xué)實(shí)驗(yàn)研究中，往往需要使用慢病毒、腺相關(guān)病毒等工具注射到動(dòng)物體內(nèi)研究動(dòng)物機(jī)體功能及代謝路徑等，以觀察闡明疾病發(fā)生發(fā)展機(jī)制。

這時(shí)就需要選擇一定的注射方式，今天小編給大家介紹一下動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中各種不同給藥途徑的方法步驟，供大家參考。

1. 提取小鼠尾巴，將其放在鼠籠蓋或者手背上，并進(jìn)行適當(dāng)?shù)陌矒幔?/span>

2. 將小鼠裝入固定器中，蓋緊蓋子，并使尾巴朝外露出用酒精棉球擦拭小鼠尾巴或者用熱水、浴霸加熱，使其血管擴(kuò)張；

3. 將尾巴拉直，使其紅色靜脈清晰可見；

4. 距離鼠尾尖1/3處進(jìn)針，若進(jìn)針暢通無阻，則說明針頭在血管內(nèi)；

5. 檢查針管內(nèi)有無回血，如有，則可以注射；

6. 用棉球按壓注射點(diǎn)1min左右進(jìn)行止血；

7. 最后，將小鼠從固定器取下，放回鼠籠中。

1. 大鼠尾靜脈注射病毒量參考：文章“AAV9 supports wide-scale transduction of the CNS and TDP-43 disease modeling in adult rats”中給出：6周齡的年輕成年大鼠重約150g。文中AAV9 TDP-43 or AAV9 GFP, 一個(gè)典型的劑量是每kg大鼠給藥3 x 10¹³ - 1 x 10¹⁴ v.g。確保體積不超過標(biāo)準(zhǔn)建議注射量體積（250克大鼠250-500μL）。對(duì)于年輕的成年大鼠，推薦的注射體積是200μl。

2. 小鼠尾靜脈注射視頻手機(jī)登陸www.taogene.com進(jìn)入資訊“動(dòng)物注射”板塊觀看。

小鼠尾靜脈注射示意圖（圖片來自吉?jiǎng)P基因）

1. 將一只幼崽直接放在濕冰上30-60秒，以麻醉動(dòng)物。由于存在低溫相關(guān)并發(fā)癥（包括心室顫動(dòng)，組織缺氧和代謝性酸中毒）的風(fēng)險(xiǎn)，請勿將動(dòng)物置于冰上太久。文章中告知，30-60秒足以減緩小鼠運(yùn)動(dòng)以允許注射。如果需要更深的麻醉，吸入劑如1-2％的異氟烷可能是合適的;

2. 當(dāng)動(dòng)物在冰上時(shí)，向注射器中加入30μl伊文思藍(lán)染料;

3. 當(dāng)動(dòng)物完全麻醉時(shí)（仍然呼吸但在冰上缺乏運(yùn)動(dòng)），在顯微鏡下移動(dòng)它。對(duì)于右手注射，請將對(duì)著動(dòng)物的槍口朝向右側(cè)。將左手食指放在槍口上，左手中指放在耳塞尾部，使耳塞位于食指和中指之間;

4. 檢查耳朵前方的毛細(xì)血管，當(dāng)皮膚被操縱時(shí)會(huì)移動(dòng)。毛細(xì)管并不是目標(biāo)，而是識(shí)別顳/面靜脈識(shí)別很重要。接下來，找到毛細(xì)管下方的暗陰影靜脈，無論皮膚位置如何，毛細(xì)管都保持固定。顳靜脈呈陰影狀，向腹側(cè)背側(cè)，并進(jìn)入頸靜脈;

5. 進(jìn)入顳靜脈，針斜面向上。如果正確插入，可以通過皮膚觀察針斜角填充血液。然后慢慢壓下柱塞，注意靜脈沿著臉部側(cè)面漂白;

6. 讓針頭在靜脈內(nèi)保持10-15秒，以防止注射劑回流。

圖A：臨時(shí)注射平臺(tái)；圖B：手指位置；圖C：注射位點(diǎn)

說明：更多注意事項(xiàng)請參考文章“Intravenous Injections in Neonatal Mice”。

1. 從籠中提取小鼠尾巴，并將其放在手背上，進(jìn)行適當(dāng)安撫;

2. 左手握小鼠，用拇指、食指捏住小鼠頸背部，用無名指及小指固定其尾和后肢，腹部向上，頭呈低位;

3. 右手持注射器，插入小鼠腹部，注射部位為下腹部離腹白線約0.5cm 處，使針頭與小鼠腹部約成 30°角刺入腹腔，針頭刺入的速度要快，剛開始刺時(shí)會(huì)有一種明顯的抵抗力，那是因?yàn)槭笃ぞ哂许g性，后來突然會(huì)有一種抵抗力消失的感覺，說明針頭已刺入腹腔內(nèi)，此時(shí)回抽沒有回血，說明針頭沒有進(jìn)入臟器，就可以進(jìn)行注射。（注意：針頭刺入腹腔不宜超過 1cm，進(jìn)針動(dòng)作要輕柔，防止刺傷腹部器官）;

4. 注射完病毒后，緩緩拔出針頭，并輕微旋轉(zhuǎn)針頭，防止漏液;

5. 最后，將小鼠重新放回籠中，繼續(xù)飼養(yǎng)觀察。

小鼠腹腔注射示意圖（圖片來自吉?jiǎng)P基因）

說明：小鼠腹腔注射視頻手機(jī)登陸www.taogene.com進(jìn)入資訊“動(dòng)物注射”板塊觀看。

1. 通過腹腔注射安樂死和唑拉西泮（1：1,2.25 mg / kg體重）和鹽酸甲苯噻嗪（0.7 mg / kg體重）或替代品的混合物麻醉成年小鼠（即6-8周齡）；

2. 用0.5％的去氧腎上腺素和0.5％的托吡卡胺滴眼液擴(kuò)張瞳孔；

3. 準(zhǔn)備已經(jīng)加有1.5-2μl病毒微量注射器；

4. 為了方便注射，打開眼瞼，使眼睛露出赤道(equator),并在手術(shù)顯微鏡下觀察。保持眼睛露出赤道(equator)直到注射結(jié)束，防止在注射期間可能發(fā)生針的移位。將手指放在眼眶邊緣外以便牢牢握住眼球；

5. 在角膜表面涂抹一滴眼用粘彈性溶液；

6. 在角膜頂部放置一個(gè)小圓形蓋玻片，以顯示視網(wǎng)膜；

7. 使用30 G 1/2無菌針頭在角膜緣后面的一個(gè)小孔處穿孔進(jìn)行進(jìn)一步的視網(wǎng)膜下注射。為了方便，是孔位于右眼的下方，左眼的上方；

8. 將微量注射器的33 G鈍針穿過預(yù)穿孔并進(jìn)入視網(wǎng)膜下腔，直到感覺到輕度阻力的點(diǎn)為止；

9. 將病毒載體（比如1×10⁶TU /μl）輕輕注入視網(wǎng)膜下空間而不發(fā)生震顫，以避免不必要的組織損傷，然后輕輕取出針頭；

10. 在手術(shù)顯微鏡下注射后觀察視網(wǎng)膜下水泡的形成，以確保視網(wǎng)膜沒有出血；

11. 輕輕關(guān)閉眼瞼以覆蓋注射部位；

12. 將小鼠放回籠中，保證小鼠活力。

更多注意事項(xiàng)請參照文章“Limbal Approach-Subretinal Injection of Viral Vectors for Gene Therapy in Mice Retinal Pigment Epithelium”。

腦立體定位儀，常規(guī)手術(shù)器械，顱骨鉆，微量注射器，干棉球，1% 的戊巴比妥鈉，生理鹽水，1ml 注射器，小鼠 。

首先，用 1% 的戊巴比妥鈉，以腹腔注射的方式麻醉小鼠，注射量為 80mg / 100g 小鼠 ；

然后，從飼養(yǎng)籠中取出小鼠 。5-10min 后，麻醉劑起效 。待小鼠麻醉后，用剃毛器將小鼠頭部毛發(fā)剔除干凈 。

將麻醉小鼠剔毛后的固定到立體定位儀上 ；

固定時(shí)，先將小鼠門齒卡在適配器門齒夾上，輕輕壓上門齒夾橫桿，調(diào)整適配器高度和前后，使耳桿可以方便進(jìn)入小鼠外耳道；

左手托起小鼠頭部，將左側(cè)耳桿插入小鼠耳道，調(diào)節(jié)左右側(cè)耳桿使動(dòng)物頭部保持在 U 型開口的中心位置，先鎖緊固定一側(cè)耳桿，后旋緊另一側(cè)耳桿，使動(dòng)物頭部不能晃動(dòng)，同時(shí)旋緊門齒夾螺絲；

檢查是否固定成功：鼻對(duì)正中，頭部不動(dòng)，提尾不掉，目測大腦放置水平。用脫毛膏或者剃刀將需要手術(shù)部位的毛發(fā)去除。

然后用手術(shù)刀劃開小鼠頭部皮膚，去除顱骨表面結(jié)締組織，暴露前后囟。

根據(jù)腦圖譜，確定待注射腦區(qū)的位置參數(shù)，包含離 Bregma 和 Lambda 點(diǎn)的距離以及核團(tuán)深度。以 Bregma 為 0 點(diǎn)，按照預(yù)先確定好的坐標(biāo)移動(dòng)顱骨鉆，打開合適大小的骨窗（窗口盡量小但又不妨礙實(shí)驗(yàn)）。

小心地用顱骨鉆在注射位點(diǎn)處輕磨顱骨，將顱骨慢慢打薄，當(dāng)顱骨出現(xiàn)裂縫的時(shí)候，用醫(yī)用注射器的針頭小心挑破，防止損傷，如果在此過程中有出血，可以用很小的醫(yī)藥棉球拉成長條形將血吸走，鉆孔時(shí)一定要控制好，否則很容易在鉆通顱骨后一不小心鉆頭進(jìn)入腦組織，造成損傷。

用 PBS 沖洗微量注射器 ( 5μl 規(guī)格 ) 3-5 次；

先吸取 1μl 空氣，再吸取 1μl 稀釋好的病毒 ( 方便病毒充分注射進(jìn)腦 )，在空氣中測試注射器是否通暢；

將微量注射泵，微量注射器組裝好，置于鉆好的孔上方，針尖與顱骨平行 (Z=0)，微調(diào)注射器位置使之與之前鉆孔時(shí)位置相同。根據(jù)定好的深度將注射針緩慢下降。

1. 限制動(dòng)物，確保動(dòng)物的一條后腿自由并穩(wěn)定注射。固定動(dòng)物可能需要兩個(gè)人。如果動(dòng)物在注射期間可以動(dòng)，則針頭可能會(huì)導(dǎo)致肌肉損傷。動(dòng)物固定方法可以參考文章“Manual Restraint and Common Compound Administration Routes in Mice and Rats”；

2. 針應(yīng)垂直于動(dòng)物皮膚插入。使用適當(dāng)大小的注射器和針頭，近似斜面的角度將針頭插入，并將材料注入動(dòng)物的股四頭?。ù笸惹安浚┗虼笸韧鈧?cè)肌肉塊。不要注入后部肌肉，因?yàn)樗赡軙?huì)損傷坐骨神經(jīng)；

3. 如果動(dòng)物要接受多次肌肉注射，交替腿進(jìn)行注射。

1. 限制動(dòng)物自由，但是需要足夠松散，保證皮膚能夠移動(dòng)；

2. 如果動(dòng)物在皮下注射后要做常規(guī)處理，請不要使用頸背，此時(shí)可以使用背側(cè)臀部或側(cè)腹的皮膚。如果動(dòng)物要接受多次皮下注射，則換其他部位進(jìn)行注射；

3. 抓住皮膚，輕輕向上拉，形成“帳篷”形狀；

4. 使用適當(dāng)大小的注射器和針頭，將針頭以30-45°的角度插入拉起來的皮膚，然后注射。注射保持于拉起來皮膚的手指平行且盡量遠(yuǎn)離手指；

5. 如果注射成功，將會(huì)看到皮膚下的小腫脹。注射結(jié)束后，輕輕施加壓力以防止回流。

說明：小鼠皮下注射視頻手機(jī)登陸www.taogene.com進(jìn)入資訊“動(dòng)物注射”板塊觀看。

1. 對(duì)于皮內(nèi)注射，通常將動(dòng)物剃毛以便可以看到皮膚；

2. 用于多次皮內(nèi)注射的動(dòng)物的約束可能是困難的。在這種情況下，化學(xué)鎮(zhèn)靜可能是必要的；

3. 將適當(dāng)大小的針頭以15-30°的角度插入皮膚。針頭不要插入很遠(yuǎn)，注射遇到阻力即可。另一種方法是在注射部位附近輕輕捏住皮膚，并以非常小的角度插入針頭。這在小鼠中很有用，因?yàn)樗梢苑乐顾鼈冊谧⑸溥^程中移動(dòng)；

4. 如果注射成功，將會(huì)看到一個(gè)小皰。它會(huì)比周圍的皮膚更蒼白；

5. 注射后，輕輕施加壓力以防止回流。

1. 只對(duì)受限制的清醒動(dòng)物進(jìn)行強(qiáng)效灌胃。麻醉或鎮(zhèn)靜會(huì)增加誤吸的風(fēng)險(xiǎn);

2. 選擇使用適當(dāng)大小的口服喂食針。這些針頭的末端有球形尖端，以防止它們進(jìn)入氣管。所需的長度可以將受約束的動(dòng)物保持向上然后從嘴角開始測量確定；

3. 約束動(dòng)物，使其頭部和身體呈直線垂直，這會(huì)使食道變直，使喂食針更容易通過；

4. 將針的球形尖端插入動(dòng)物的嘴里，并在舌頭上方。一旦針頭到達(dá)正確位置，將針頭和注射器向上，輕輕按壓上顎，使動(dòng)物的鼻子朝向天花板。在給大鼠進(jìn)行胃內(nèi)給藥時(shí)，針可能需要在通過喉嚨后部時(shí)稍微改變方向，如果感受到針上的任何張力都表明需要調(diào)整位置;

5. 繼續(xù)將針?biāo)偷筋A(yù)定位置。針應(yīng)該很容易通過，動(dòng)物不應(yīng)該喘氣或嗆到，如果有阻力或動(dòng)物喘息或者窒息，立即停止并取下針頭。

說明：小鼠灌胃視頻登陸www.taogene.com進(jìn)入資訊“動(dòng)物注射”板塊觀看。

1. 剔除小鼠腰背部毛發(fā)，用75%酒精棉球消毒；

2. 將小鼠引誘至棉手套中，左手固定小鼠，暴露髂脊背部，右手持29 gauge注射針，待其安靜后找到髂脊。ICR小鼠L5椎間隙幾乎與髂脊平行，L6椎間隙距髂脊水平距離約為3 mm；C57BL/6小鼠L5椎間隙距髂脊水平距離約為1.5 mm，L6椎間隙距髂脊水平距離約為4 mm;

3. 以30°-45°角度插入中線皮膚，髂脊水平向尾部約3 mm處進(jìn)針（ICR小鼠）或髂脊水平向尾部約4 mm處進(jìn)針（C57BL/6小鼠），若針不能插入L6椎間隙，進(jìn)針角度緩慢下調(diào)，同時(shí)沿著棘突和乳突間的凹槽向前移動(dòng)針尖，直到插入L5椎間隙，針尖可以進(jìn)入到椎管約5 mm位置;

4. 針尖進(jìn)入椎管推入10 μL藥液，小鼠尾巴顫抖或突然甩動(dòng)則證明進(jìn)針成功;

說明：此方法成熟穩(wěn)定，無麻醉劑影響，不影響后續(xù)行為結(jié)果檢測，對(duì)小鼠產(chǎn)生刺激較小，可盡量減小對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。

1. 健康小鼠在做脊神經(jīng)結(jié)扎前1天禁食禁水；

2. 實(shí)驗(yàn)時(shí)，將小鼠背部毛發(fā)剔除，暴露出皮膚，用異氟烷呼吸麻醉；

3. 待小鼠進(jìn)入麻醉狀態(tài)后 ,用碘伏消毒后再用75%酒精棉球消毒，用11號(hào)刀片劃開小鼠皮膚，具體位置為髂脊中線偏左。開口大小一厘米左右;

4. 接下來，在腰背部中線偏外側(cè)劃開，用彎鑷沿脊柱方向鈍性分離肌肉，暴露第六腰椎橫突后，用棉球?qū)M突周圍血肉擦拭干凈，使用尖鑷鉗斷橫突，暴露出神經(jīng)，使用玻璃電極分離出第五腰神經(jīng)，用6-0絲線結(jié)扎，使用微量注射器沿神經(jīng)方向在神經(jīng)外膜下進(jìn)行注射；

5. 注射時(shí)注意速度緩慢勻速，隨后剪去線頭，將神經(jīng)回復(fù)原位置，縫合肌肉，用碘伏消毒，最后縫上皮膚，再次消毒傷口;

6. 將小鼠放置溫暖處待其蘇醒。

注意事項(xiàng)：在手術(shù)過程中密切注意小鼠呼吸情況，防止小鼠呼吸過深死亡。

以上就是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中各種不同給藥途徑的方法步驟，還想了解更多的AAV動(dòng)物實(shí)驗(yàn)注射方法，歡迎登陸吉?jiǎng)P商城官方網(wǎng)站查看相關(guān)資訊，近期更有中秋節(jié)秒殺活動(dòng)，產(chǎn)品最高可享59折，購物滿3000元更有抽獎(jiǎng)活動(dòng)等著你！