《生物分離與分析技術(shù)》考查試題
一、名詞解釋
1.藥物與藥品；
◆藥物：指能影響機體生理、生化和病理過程，用以預(yù)防、診斷、治療疾病和計劃生育的化學(xué)物質(zhì)。藥物包括有利于健康的催眠藥、感冒藥、退燒藥、胃藥、瀉藥等等各種藥品。藥物可在藥店購買。
◆藥品：是指用于預(yù)防、治療、診斷人的疾病，有目的地調(diào)節(jié)人的生理機能并規(guī)定有適應(yīng)癥或者功能主治、用法和用量的物質(zhì)，包括中藥材、中藥飲片、中成藥、化學(xué)原料藥及其制劑、抗生素、生化藥品、放射性藥品、血清、疫苗、血液制品和診斷藥品等。
2.國家標準品；
◆國家標準品：系用WHO正式頒布的標準品標定國家或某一實驗室的生物標準品，經(jīng)過協(xié)作研究和檢定，準確標明國際單位（IU），其穩(wěn)定性高，并經(jīng)國家藥品管理當局批準，成為國家標準品。
3.免疫源性與反應(yīng)源性
◆免疫原性：指某一制品使用后誘生免疫應(yīng)答反應(yīng)的能力。在疫苗接種情況下，此種反應(yīng)導(dǎo)致出現(xiàn)理想的特異體液免疫或細胞免疫應(yīng)答或二者兼之，一般情況下使被接種個體獲得對相關(guān)傳染病的保護。
◆反應(yīng)原性：能和特異性抗體或致敏淋巴細胞結(jié)合，發(fā)生特異性反應(yīng)的能力。
二、簡答題
1.簡述生物分離過程的特點。
答：（1）產(chǎn)品豐富：產(chǎn)品的多樣性導(dǎo)致分離方法的多樣性；
（2）絕大多數(shù)生物分離方法來源于化學(xué)分離；
（3）生物分離一般比化工分離難度大：
※成分復(fù)雜；
※懸液中的目標產(chǎn)物濃度低；
※生物活性條件相對溫和；
※生物產(chǎn)品要求高質(zhì)量；
※獲得高純度的干燥產(chǎn)品；
※衛(wèi)生。
因此，生物分離過程往往成本很高，在某些產(chǎn)品的生產(chǎn)過程中，分離成本可能占到總成本的80％以上。
（補充：常無固定操作方法可循；生物材料組成非常復(fù)雜；分離操作步驟多，不易獲得高收率；培養(yǎng)液（或發(fā)酵液）中所含目的物濃度很低，而雜質(zhì)含量卻很高；分離進程必須保護化合物的生理活性；生物活性成分離開生物體后，易變性、破壞；基因工程產(chǎn)品，一般要求在密封環(huán)境下操作。）
2.簡述超臨界流體萃取的原理及其特點。
答：超臨界流體萃取是利用超臨界流體具有的類似氣體的擴散系數(shù)，以及類似液體的密度（溶解能力強）的特點，利用超臨界流體為萃取劑進行的萃取單元操作。
利用超臨界流體的特殊性質(zhì)，使其在超臨界狀態(tài)下，與待分離的物料接觸，萃取出目的產(chǎn)物，然后通過降壓或升溫的方法，使萃取物得到分離。
其特點是密度接近液體，萃取能力強；粘度接近氣體，傳質(zhì)性能好；且安全、無毒、產(chǎn)品分離簡單，但設(shè)備投資較大。
3.常用的蛋白質(zhì)沉淀方法有哪些？簡述其作用機理。
（１）有機溶劑法：破壞蛋白質(zhì)分子的水化層，使之聚集成更大的分子團而沉淀。
（２）鹽析：破壞蛋白質(zhì)分子水化層，電荷中和，使之聚集成更大的分子團。
（３）化學(xué)沉淀法：通過化學(xué)試劑與目的產(chǎn)物形成新的化合物，改變?nèi)芙舛榷恋怼?/p>
4.何謂ELISA？簡述其分析過程。
答：ELISA即酶聯(lián)免疫吸附測定，是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用結(jié)合起來，靈敏性很高的一種新型的免疫酶測定技術(shù)。
ELISA過程是在一種固相載體——聚苯乙烯微量滴定板中進行的，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性?？乖皆诠滔噍d體上被稱為包被，加待測抗體，再加相應(yīng)酶標記抗體，生成“抗原-待測抗體-酶標記抗體”的復(fù)合物，再與該酶的底物反應(yīng)生成有色產(chǎn)物，待測抗體的定量與有色物質(zhì)產(chǎn)生成正比，因此借助分光分度儀計測定其吸光度，可計算出抗體的量。
5.結(jié)合SDS -PAGE電泳的分離原理說明未知蛋白質(zhì)分子量的測定方法。
答:SDS-PAGE是凝膠電泳的一種，其分離原理是基于不同分子量的蛋白質(zhì)（亞基）在電場中的遷移率不同，因此利用該技術(shù)測定未知蛋白質(zhì)（亞基）的分子量是十分方便的，具體的方法是利用標準分子量MARK，與樣品一同電泳，染色后根據(jù)標準分子MARK中已知分子量蛋白質(zhì)的遷移率與其分子量的對數(shù)值作圖，可得一標準曲線并擬合方程，再結(jié)合未知蛋白質(zhì)的遷移率即可計算得到大致的分子量。
6.常用的層析方法有哪些？請敘述其分離原理。
⑴ 離子交換層析（IEC）
基本原理：通過帶電的溶質(zhì)分子與離子交換劑中可交換的離子進行交換，從而達到分離的目的。
⑵ 疏水色譜（HIC）
基本原理：主要是利用蛋白質(zhì)分子表面上的疏水區(qū)域和介質(zhì)中的疏水基團之間的相互作用，無機鹽的存在能使相互作用力增強。
⑶ 親和層析（AC）
基本原理：是利用固定化配基與目的蛋白質(zhì)之間特異的生物親和力進行吸附，如抗體與抗原、受體與激素、酶與底物之間的作用。
⑷ 凝膠過濾
基本原理：是以具有大小一定的多孔性凝膠作為分離介質(zhì)，小分子能進入孔內(nèi)，在柱中緩慢移動，而大分子不能進入孔內(nèi)，快速移動，利用這種移動差別可使大分子與小分子分開。
7.何謂萃取的分配系數(shù)？其影響因素有哪些？
分配系數(shù)：在一定溫度、一定壓力下，某一溶質(zhì)在互不相溶的兩種溶劑間分配時，達到平衡后，在兩相中的濃度之比為一常數(shù)，這個常數(shù)稱為分配系數(shù)。
乳化作用。
pH值：影響弱酸或弱堿藥物的分配系數(shù)和藥物的穩(wěn)定性。
溫度和時間：藥物的穩(wěn)定性、分配系數(shù)。
溶劑的種類和用量及萃取方式。
