本發(fā)明屬于秸稈資源利用
技術(shù)領(lǐng)域：
，更具體地說(shuō)，涉及一種秸稈制備黃腐酸的方法。
背景技術(shù)：
：我國(guó)秸稈資源豐富，但多年以來(lái)一直未得到有效利用，焚燒秸稈帶來(lái)大氣污染已被命令禁止，當(dāng)前主流的秸稈處理模式為堆放田間腐爛、沼氣發(fā)電或收集制作生物質(zhì)燃料。但堆放田頭完全浪費(fèi)，沼氣發(fā)電幾乎沒(méi)有能夠收回成本的案例，生物質(zhì)燃料則同樣最終產(chǎn)生為熱能和電能，利潤(rùn)不足，不具有生態(tài)效應(yīng)，容易帶來(lái)二次污染。無(wú)論何種方法都沒(méi)有高效利用秸稈和產(chǎn)出價(jià)值；黃腐酸是腐殖酸中分子量較小的組分，能夠溶于水，黃腐酸具有多個(gè)官能基團(tuán)，能夠結(jié)合氨基酸、金屬離子和抗酸堿沖擊，對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育有明顯的促進(jìn)作用，能夠充當(dāng)土壤的緩沖調(diào)節(jié)劑，抗土壤干旱鹽堿化，因此近年來(lái)，黃腐酸作為一種高價(jià)值的有機(jī)肥料，得到了國(guó)家和政府的大力支持發(fā)展?，F(xiàn)有技術(shù)中秸稈制作出來(lái)的黃腐酸濃度較低，成本較為昂貴，且秸稈的利用率不高。針對(duì)上述問(wèn)題也進(jìn)行了相應(yīng)的改進(jìn)，如中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)朇N200610162041.6，公開(kāi)日為2009年6月10日，該專利公開(kāi)了一種利用微生物固體-半固體發(fā)酵工藝生產(chǎn)生化黃腐酸的方法，尤其是一種農(nóng)副產(chǎn)品加工廢料經(jīng)微生物多菌種固體-半固體混合發(fā)酵后，轉(zhuǎn)化成生化黃腐酸菌肥的生產(chǎn)工藝。本發(fā)明采用菌種選育技術(shù)，選育出了能夠高效轉(zhuǎn)化果渣成為生化黃腐酸的各類生產(chǎn)菌種，根據(jù)黃腐酸生成的過(guò)程，設(shè)計(jì)出適合黃腐酸生產(chǎn)的固體-半固體發(fā)酵工藝。該專利的不足之處在于：最終制成的黃腐酸濃度較低，以糖碳鏈為基礎(chǔ)制備的黃腐酸在使用性能上較低，且制備工藝復(fù)雜，成本較高。又如中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)朇N201110058374.5，公開(kāi)日為2012年12月5日，該專利公開(kāi)了利用稻草生產(chǎn)生化黃腐酸的方法，包括1)配備稻草秸桿和養(yǎng)分；2)稻草秸桿軟化處理：3)第一階段微生物發(fā)酵；4)第二階段微生物發(fā)酵：5)制備黃腐酸。本發(fā)明方法是以稻草秸稈為原料，篩選高效菌群組合，采用機(jī)械軟化處理—兩段式微生物發(fā)酵工藝進(jìn)行深度發(fā)酵，將稻草中的大分子碳水化合物降解成小分子活性黃腐酸類化合物。采用機(jī)械破碎處理解決了稻草生物降解中特殊屏障結(jié)構(gòu)的保護(hù)作用；同時(shí)，通過(guò)兩段式發(fā)酵有效解決了不同菌群對(duì)空氣的需求差異，有助優(yōu)勢(shì)菌群的培養(yǎng)，大大縮短了發(fā)酵周期，加強(qiáng)了發(fā)酵深度，大大提高了發(fā)酵效率和黃腐酸收率。該專利的不足之處在于：原料成本較高，步驟較多工藝復(fù)雜，粗放式發(fā)酵無(wú)法采用全自動(dòng)化生產(chǎn)，采用酸堿提取后易造成二次污染。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：1、要解決的問(wèn)題針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中秸稈利用率不高、制備黃腐酸成本較高的問(wèn)題，本發(fā)明提供一種秸稈制備黃腐酸的方法。本發(fā)明能高效高價(jià)值生態(tài)利用秸稈資源，且采用秸稈制備黃腐酸成本較低，周期短，可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化生產(chǎn)，黃腐酸的轉(zhuǎn)化率可達(dá)到秸稈：黃腐酸的比值接近于8:3，具有較高的推廣價(jià)值，并且適合大規(guī)模的制備。2、技術(shù)方案為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案。一種秸稈制備黃腐酸的方法，包括以下步驟：(1)制備HFM菌種液：放線菌秸稈培養(yǎng)基經(jīng)滅菌處理后接種自主篩選馴化的耐熱鏈霉菌(Streptomycesthermotolerans)實(shí)驗(yàn)室菌種代號(hào)HFM，37℃搖床震蕩培養(yǎng)20小時(shí)，得到HFM菌種液；(2)制備復(fù)合細(xì)菌菌液：在LB培養(yǎng)基中分別接種八個(gè)自主篩選和馴化的細(xì)菌菌種，37℃搖床培養(yǎng)24小時(shí)，得到不同的細(xì)菌菌種液；將八種不同的細(xì)菌菌種液混合配制成復(fù)合細(xì)菌菌種液；(3)制備HFM秸稈發(fā)酵液：配制秸稈發(fā)酵培養(yǎng)液，秸稈發(fā)酵培養(yǎng)液經(jīng)滅菌后接種HFM菌種液，培養(yǎng)得到HFM秸稈發(fā)酵液；(4)生物黃腐酸混合溶液的發(fā)酵：將步驟(3)制得的HFM秸稈發(fā)酵液經(jīng)滅菌處理后，接種復(fù)合細(xì)菌菌種液，曝氣培養(yǎng)，得到HFM秸稈裂解液，再向HFM秸稈裂解液中加入尿素，pH6.0～6.5，繼續(xù)曝氣培養(yǎng)，得到生物黃腐酸混合液；(5)過(guò)濾和濃縮：將步驟(4)制得的生物黃腐酸混合液經(jīng)濾網(wǎng)過(guò)濾，過(guò)濾后的生物黃腐酸混合液經(jīng)過(guò)蒸餾濃縮，獲得黃腐酸濃縮液或黃腐酸結(jié)晶。更進(jìn)一步的，所述步驟(1)中放線菌秸稈培養(yǎng)基包括如下質(zhì)量百分比的各組分：60～100目過(guò)篩秸稈粉0.3～0.4％，硫酸鎂0.05～0.1％，磷酸二氫鉀0.18～0.2％，硫酸銨0.2～0.25％，硫酸亞鐵0.005～0.01％，其余質(zhì)量為水。更進(jìn)一步的，所述步驟(2)中八個(gè)自主篩選和馴化的細(xì)菌菌種包括(Bacillusparalicheniformis)，尚無(wú)中文名，實(shí)驗(yàn)室菌種代號(hào)為XM1；暹羅芽孢桿菌(Bacillussiamensis)，實(shí)驗(yàn)室菌種代號(hào)為XM4；乳酸細(xì)桿菌(Microbacteriumlacticum)，實(shí)驗(yàn)室菌種代號(hào)為ZZ1；酪酸梭狀芽胞桿菌(Clostridiumbutyricum)，實(shí)驗(yàn)室菌種代號(hào)為Clr1；球狀紅球菌(Rhodococcusgloberulus)，實(shí)驗(yàn)室菌種代號(hào)為Se-6；腐生性葡萄球菌(Staphylococcussaprophyticussubsp.bovis)，實(shí)驗(yàn)室菌種代號(hào)為EM-5；無(wú)色桿菌屬(Achromobactermarplatensis)，實(shí)驗(yàn)室菌種代號(hào)為JIA；產(chǎn)堿菌屬(Advenellakashmirensis)，實(shí)驗(yàn)室菌種代號(hào)為EM1-6。更進(jìn)一步的，八種不同的細(xì)菌菌種液等比例混合配制成復(fù)合細(xì)菌菌種液。更進(jìn)一步的，所述步驟(3)中秸稈發(fā)酵培養(yǎng)液包括如下質(zhì)量百分比的各原料：60～100目過(guò)篩秸稈粉4.8～5％，硫酸鎂0.05～0.1％，磷酸二氫鉀0.18～0.2％，硫酸銨0.2～0.25％，硫酸亞鐵0.005～0.01％，其余質(zhì)量為水。更進(jìn)一步的，按照HFM菌種液：秸稈發(fā)酵培養(yǎng)液＝1:1000在秸稈發(fā)酵培養(yǎng)液內(nèi)接種HFM菌種液，經(jīng)培養(yǎng)得到HFM秸稈發(fā)酵液。更進(jìn)一步的，所述步驟(4)中按照復(fù)合細(xì)菌菌液：HFM秸稈發(fā)酵液＝1:1000在HFM秸稈發(fā)酵液內(nèi)接種復(fù)合細(xì)菌菌液，經(jīng)曝氣培養(yǎng)，得到HFM秸稈裂解液。更進(jìn)一步的，所述HFM秸稈裂解液內(nèi)加入尿素的含量為HFM秸稈裂解液中木質(zhì)素含量的1/12～1/10。更進(jìn)一步的，所述步驟(5)中生物黃腐酸混合液經(jīng)過(guò)250目濾網(wǎng)壓榨過(guò)濾。更進(jìn)一步的，過(guò)濾后的生物黃腐酸混合液再一次通過(guò)微濾膜除去殘余細(xì)菌。3、有益效果相比于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果為：(1)本發(fā)明在放線菌秸稈培養(yǎng)基內(nèi)接種耐熱鏈霉菌，鏈霉菌對(duì)培養(yǎng)基內(nèi)的秸稈粉末進(jìn)行生物發(fā)酵，且鏈霉菌本身具有較好的拮抗作用，能夠有效抑制放線菌秸稈培養(yǎng)基內(nèi)雜菌的影響；進(jìn)而再對(duì)HFM秸稈發(fā)酵液滅菌后接種復(fù)合細(xì)菌菌液，滅菌處理能夠?qū)FM菌絲的活性起到抑制作用；復(fù)合細(xì)菌菌液中的多種細(xì)菌對(duì)HFM秸稈發(fā)酵液進(jìn)行生物裂解，再使用尿素作為分子橋梁，經(jīng)曝氣培養(yǎng)，促進(jìn)復(fù)合細(xì)菌菌液中的多種細(xì)菌對(duì)黃腐酸的生化合成，得到的生物黃腐酸混合液經(jīng)過(guò)濾蒸餾濃縮得到黃腐酸濃縮液或黃腐酸結(jié)晶；整體的制備方法成本較低，黃腐酸的轉(zhuǎn)化率可達(dá)到秸稈：黃腐酸的比值接近于8:3；產(chǎn)物針對(duì)性強(qiáng)，秸稈的利用率也有所提高；(2)本發(fā)明將八種不同的細(xì)菌菌種液采用等比例混合制備成復(fù)合細(xì)菌菌種液，等比例的配合使得復(fù)合細(xì)菌菌種液成分均勻，具有較高的使用效果；這八種細(xì)菌的主要作用都是分解秸稈中復(fù)雜的碳鏈物質(zhì)和含氮物質(zhì)化合成自身物質(zhì)，不斷合成、不斷分解，最后形成生物的腐殖質(zhì)；(3)本發(fā)明將制備好的生物黃腐酸混合溶液經(jīng)過(guò)250目的濾網(wǎng)進(jìn)行過(guò)濾，使得能夠出去未分解的秸稈殘?jiān)c菌塊，過(guò)濾后的生物黃腐酸混合溶液較為純凈；并且通過(guò)微濾膜進(jìn)行更進(jìn)一步的過(guò)濾，除去殘余的細(xì)菌或其它物質(zhì)，經(jīng)過(guò)兩層過(guò)濾，黃腐酸的濃度在1.56％～1.86％之間，濃度較高，具有較高的使用價(jià)值。附圖說(shuō)明圖1為本發(fā)明的流程示意圖。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步進(jìn)行描述。實(shí)施例1一種秸稈制備黃腐酸的方法，包括以下步驟：(1)制備HFM菌種液：放線菌秸稈培養(yǎng)基經(jīng)滅菌處理后接種自主篩選馴化的耐熱鏈霉菌(Streptomycesthermotolerans)實(shí)驗(yàn)室菌種代號(hào)HFM，37℃搖床震蕩培養(yǎng)20小時(shí)，得到HFM菌種液；優(yōu)選的，放線菌秸稈培養(yǎng)基包括如下質(zhì)量百分比的各組分：60～100目過(guò)篩秸稈粉0.3～0.4％，硫酸鎂0.05～0.1％，磷酸二氫鉀0.18～0.2％，硫酸銨0.2～0.25％，硫酸亞鐵0.005～0.01％，其余質(zhì)量為水，該放線菌秸稈培養(yǎng)基組分簡(jiǎn)單且營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)全面，在進(jìn)行接種自主篩選馴化的耐熱鏈霉菌時(shí)，鏈霉菌對(duì)放線菌秸稈培養(yǎng)基內(nèi)的秸稈粉末進(jìn)行生物發(fā)酵，且鏈霉菌本身具有較好的拮抗作用，能夠有效抑制放線菌秸稈培養(yǎng)基內(nèi)雜菌的影響；(2)制備復(fù)合細(xì)菌菌液：在LB培養(yǎng)基中分別接種八個(gè)自主篩選和馴化的細(xì)菌菌種，37℃搖床培養(yǎng)24小時(shí)，得到不同的細(xì)菌菌種液；將八種不同的細(xì)菌菌種液混合配制成復(fù)合細(xì)菌菌種液；所述八個(gè)自主篩選和馴化的細(xì)菌菌種包括(Bacillusparalicheniformis)，尚無(wú)中文名，實(shí)驗(yàn)室菌種代號(hào)為XM1；暹羅芽孢桿菌(Bacillussiamensis)，實(shí)驗(yàn)室菌種代號(hào)為XM4；乳酸細(xì)桿菌(Microbacteriumlacticum)，實(shí)驗(yàn)室菌種代號(hào)為ZZ1；酪酸梭狀芽胞桿菌(Clostridiumbutyricum)，實(shí)驗(yàn)室菌種代號(hào)為Clr1；球狀紅球菌(Rhodococcusgloberulus)，實(shí)驗(yàn)室菌種代號(hào)為Se-6；腐生性葡萄球菌(Staphylococcussaprophyticussubsp.bovis)，實(shí)驗(yàn)室菌種代號(hào)為EM-5；無(wú)色桿菌屬(Achromobactermarplatensis)，實(shí)驗(yàn)室菌種代號(hào)為JIA；產(chǎn)堿菌屬(Advenellakashmirensis)，實(shí)驗(yàn)室菌種代號(hào)為EM1-6；且更進(jìn)一步的，八種不同的細(xì)菌菌種液采用等比例混合制備成復(fù)合細(xì)菌菌種液，等比例的配合使得復(fù)合細(xì)菌菌種液成分均勻，具有較高的使用效果；這八種細(xì)菌制備的復(fù)合細(xì)菌菌種液的主要作用都是分解秸稈中復(fù)雜的碳鏈物質(zhì)和含氮物質(zhì)化合成自身物質(zhì)，不斷合成、不斷分解最后形成生物的腐殖質(zhì)；所述LB培養(yǎng)基為常規(guī)培養(yǎng)基，LB培養(yǎng)基包括胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化鈉10g/L；(3)制備HFM秸稈發(fā)酵液：配制秸稈發(fā)酵培養(yǎng)液，秸稈發(fā)酵培養(yǎng)液經(jīng)滅菌后接種HFM菌種液，51℃培養(yǎng)12小時(shí)得到HFM秸稈發(fā)酵液；優(yōu)選的，所述秸稈發(fā)酵培養(yǎng)液包括如下質(zhì)量百分比的各原料：60～100目過(guò)篩秸稈粉4.8～5％，硫酸鎂0.05～0.1％，磷酸二氫鉀0.18～0.2％，硫酸銨0.2～0.25％，硫酸亞鐵0.005～0.01％，其余質(zhì)量為水；原料簡(jiǎn)單且營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)全面；(4)生物黃腐酸混合溶液的發(fā)酵：將步驟(3)制得的HFM秸稈發(fā)酵液經(jīng)滅菌處理后，接種復(fù)合細(xì)菌菌種液，24～40℃環(huán)境中曝氣培養(yǎng)2～3天后，得到HFM秸稈裂解液；再向HFM秸稈裂解液中加入尿素，尿素作為分子橋梁，促進(jìn)復(fù)合細(xì)菌菌液中的多種細(xì)菌對(duì)黃腐酸的生化合成；pH6.0～6.5，繼續(xù)曝氣培養(yǎng)4～5天，得到生物黃腐酸混合液；優(yōu)選的，所述HFM秸稈發(fā)酵液經(jīng)過(guò)巴氏滅菌，巴氏滅菌法是將緩和原料加熱至68～70℃，并保持此溫度30min以后急速冷卻到4～5℃進(jìn)行殺菌的一種方式，因?yàn)橐话慵?xì)菌的致死點(diǎn)均為溫度68℃與時(shí)間30min以下，所以將混合原料經(jīng)此法處理后，可殺滅其中的致病性細(xì)菌和絕大多數(shù)非致病性細(xì)菌；混合原料加熱后突然冷卻，急劇的熱與冷變化也可以促使細(xì)菌的死亡；使得能夠有效抑制HFM菌絲的活性，使得HFM秸稈發(fā)酵液內(nèi)無(wú)雜菌的干擾；(5)過(guò)濾和濃縮：將步驟(4)制得的生物黃腐酸混合液經(jīng)濾網(wǎng)過(guò)濾，過(guò)濾后的生物黃腐酸混合液經(jīng)過(guò)蒸餾濃縮，獲得黃腐酸濃縮液或黃腐酸結(jié)晶。優(yōu)選的，將生物黃腐酸混合液通過(guò)250目濾網(wǎng)壓榨過(guò)濾，除去未分解的秸稈殘?jiān)途鷫K，過(guò)濾后的生物黃腐酸混合溶液較為純凈；然后通過(guò)微濾膜(0.1微米)除去殘余細(xì)菌，經(jīng)過(guò)兩層過(guò)濾，所得溶液黃腐酸濃度在1.56％～1.86％；再經(jīng)過(guò)反滲透Ro膜(0.001微米)濃縮至5％左右，最后經(jīng)過(guò)蒸餾濃縮，獲得黃腐酸濃縮液或黃腐酸結(jié)晶；黃腐酸濃縮液或黃腐酸結(jié)晶最終濃度較高，具有較高的使用價(jià)值。采用上述方法制得的黃腐酸濃度較高，且秸稈的轉(zhuǎn)化率較高，可達(dá)到轉(zhuǎn)化率為秸稈：黃腐酸的比值接近于8:3，所得未濃縮前生物黃腐酸混合液中黃腐酸濃度在1.56％～1.86％之間，相比于以往利用秸稈制備黃腐酸成本較為昂貴、黃腐酸濃度低的問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種秸稈制備黃腐酸的方法，大大提高了秸稈的利用率與轉(zhuǎn)化率，且所需的原料成本較低，制備步驟較為簡(jiǎn)單，周期短，設(shè)計(jì)合理，可實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)化生產(chǎn)。實(shí)施例2基本同實(shí)施例1，優(yōu)選的，在步驟(3)中按照HFM菌種液：秸稈發(fā)酵培養(yǎng)液＝1:1000在秸稈發(fā)酵培養(yǎng)液內(nèi)接種HFM菌種液，這樣的比例設(shè)置能夠使得在短期過(guò)程中發(fā)酵過(guò)程好且又節(jié)約HFM菌種液；經(jīng)51℃培養(yǎng)12小時(shí)得到HFM秸稈發(fā)酵液；所述步驟(4)中按照復(fù)合細(xì)菌菌液：HFM秸稈發(fā)酵液＝1:1000在HFM秸稈發(fā)酵液內(nèi)接種復(fù)合細(xì)菌菌液，這樣的比例設(shè)置能夠使得在短期過(guò)程中發(fā)酵過(guò)稱好且又避免了復(fù)合細(xì)菌菌液的浪費(fèi)情況；24～40℃環(huán)境中曝氣培養(yǎng)2～3天后，得到HFM秸稈裂解液；所述HFM秸稈裂解液內(nèi)加入尿素的含量為HFM秸稈裂解液中木質(zhì)素含量的1/12～1/10，所述尿素的加入量經(jīng)過(guò)發(fā)明人反復(fù)多次實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，在保證不浪費(fèi)尿素的同時(shí)又能不影響黃腐酸的產(chǎn)量；且除了秸稈外，任何含木質(zhì)素高的原料都可以按照本發(fā)明所述的方法制備黃腐酸。實(shí)施例3基本同實(shí)施例2，本實(shí)施例中采用玉米秸稈進(jìn)行黃腐酸的制備，初始玉米秸稈的使用量為45g/L，將秸稈進(jìn)行粉碎成粉末，然后經(jīng)60目濾網(wǎng)進(jìn)行過(guò)篩，再進(jìn)行如下步驟的配制：(1)制備HFM菌種液：放線菌秸稈培養(yǎng)基包括如下質(zhì)量百分比的各組分：60目過(guò)篩秸稈粉0.4％，硫酸鎂0.1％，磷酸二氫鉀0.2％，硫酸銨0.2％，硫酸亞鐵0.005％，其余質(zhì)量為水，該培養(yǎng)基經(jīng)121℃，20min滅菌，滅菌后接種自主篩選馴化的耐熱鏈霉菌(Streptomycesthermotolerans)實(shí)驗(yàn)室菌種代號(hào)HFM，37℃搖床震蕩培養(yǎng)20小時(shí)，得到HFM菌種液；(2)制備復(fù)合細(xì)菌菌液：在LB培養(yǎng)基中分別接種八個(gè)自主篩選和馴化的細(xì)菌菌種包括(Bacillusparalicheniformis)，尚無(wú)中文名，實(shí)驗(yàn)室菌種代號(hào)為XM1；暹羅芽孢桿菌(Bacillussiamensis)，實(shí)驗(yàn)室菌種代號(hào)為XM4；乳酸細(xì)桿菌(Microbacteriumlacticum)，實(shí)驗(yàn)室菌種代號(hào)為ZZ1；酪酸梭狀芽胞桿菌(Clostridiumbutyricum)，實(shí)驗(yàn)室菌種代號(hào)為Clr1；球狀紅球菌(Rhodococcusgloberulus)，實(shí)驗(yàn)室菌種代號(hào)為Se-6；腐生性葡萄球菌(Staphylococcussaprophyticussubsp.bovis)，實(shí)驗(yàn)室菌種代號(hào)為EM-5；無(wú)色桿菌屬(Achromobactermarplatensis)，實(shí)驗(yàn)室菌種代號(hào)為JIA；產(chǎn)堿菌屬(Advenellakashmirensis)，實(shí)驗(yàn)室菌種代號(hào)為EM1-6，37℃搖床培養(yǎng)24小時(shí)，得到不同的細(xì)菌菌種液，將八種不同的細(xì)菌菌種液按照等比例混合配制成復(fù)合細(xì)菌菌種液；所述LB培養(yǎng)基為常規(guī)培養(yǎng)基，LB培養(yǎng)基包括胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化鈉10g/L；(3)制備HFM秸稈發(fā)酵液：配制秸稈發(fā)酵培養(yǎng)液，所述秸稈發(fā)酵培養(yǎng)液包括如下質(zhì)量百分比的各原料：60目過(guò)篩秸稈粉5％，硫酸鎂0.1％，磷酸二氫鉀0.2％，硫酸銨0.2％，硫酸亞鐵0.01％，其余質(zhì)量為水；秸稈發(fā)酵培養(yǎng)液經(jīng)121℃，20min滅菌后中按照HFM菌種液：秸稈發(fā)酵培養(yǎng)液＝1:1000在秸稈發(fā)酵培養(yǎng)液內(nèi)接種HFM菌種液，51℃培養(yǎng)12小時(shí)得到HFM秸稈發(fā)酵液；(4)生物黃腐酸混合溶液的發(fā)酵：將步驟(3)制得的HFM秸稈發(fā)酵液經(jīng)滅菌處理后，按照復(fù)合細(xì)菌菌液：HFM秸稈發(fā)酵液＝1:1000在HFM秸稈發(fā)酵液內(nèi)接種復(fù)合細(xì)菌菌液，28℃環(huán)境中曝氣培養(yǎng)2天后，得到HFM秸稈裂解液；再向HFM秸稈裂解液中加入尿素，尿素的加入量為0.6g/L，尿素作為分子橋梁，促進(jìn)復(fù)合細(xì)菌菌液中的多種細(xì)菌對(duì)黃腐酸的生化合成；pH6.0～6.5，28℃環(huán)境中繼續(xù)曝氣培養(yǎng)7天，得到生物黃腐酸混合液；(7)過(guò)濾和濃縮：此時(shí)將步驟(6)中生化反應(yīng)完成后的液體經(jīng)250目濾網(wǎng)壓榨過(guò)濾，除去未分解的秸稈殘?jiān)途鷫K，過(guò)濾后的生物黃腐酸混合溶液較為純凈；然后通過(guò)微濾膜(0.1微米)除去殘余細(xì)菌，經(jīng)過(guò)兩層過(guò)濾，所得溶液黃腐酸濃度在1.56％～1.86％；再經(jīng)過(guò)反滲透Ro膜(0.001微米)濃縮至5％左右，最后經(jīng)過(guò)蒸餾濃縮，獲得黃腐酸濃縮液或黃腐酸結(jié)晶。在步驟(6)中，對(duì)HFM秸稈裂解液中加入尿素后7天中的黃腐酸含量抽樣測(cè)定結(jié)果如下表1：天數(shù)1234567黃腐酸濃度0.356％0.433％1.262％1.496％1.565％1.616％1.613％表1根據(jù)測(cè)定結(jié)果可看出，采取本方案發(fā)酵的秸稈黃腐酸發(fā)酵液，其在第6天后濃度停止增長(zhǎng)，故該方案發(fā)酵黃腐酸的在28℃時(shí)，最適收獲時(shí)間是第6～7天；黃腐酸的制備周期較短，適合大規(guī)模的應(yīng)用。實(shí)施例4基本同實(shí)施例3，采用本發(fā)明所述的秸稈制備黃腐酸的方法對(duì)玉米秸稈進(jìn)行黃腐酸的發(fā)酵制作，最終的黃腐酸產(chǎn)品濃縮至20％濃度，再稀釋成不同濃度，配合常規(guī)氮磷鉀化肥試驗(yàn)，氮、磷、鉀的濃度分別為3mmol/L，0.6mmol/L和2.67mmol/L，在4種試驗(yàn)作物中使用的效果如下表2：表2根據(jù)表中數(shù)據(jù)可以看出，本黃腐酸產(chǎn)品對(duì)于生菜、白菜、萵筍的生長(zhǎng)均有較大提升，其中對(duì)白菜提升最大，其次是生菜、萵筍，而對(duì)茼蒿的生長(zhǎng)提升作用不大，對(duì)于白菜和生菜，200稀釋倍數(shù)的黃腐酸明顯好于350稀釋倍數(shù)組和500稀釋倍數(shù)組，對(duì)茼蒿來(lái)說(shuō)，200稀釋倍數(shù)組和350稀釋倍數(shù)組差異不大，但明顯好于500倍組；采用本發(fā)明所述的秸稈制備黃腐酸的方法可操作性強(qiáng)且黃腐酸的轉(zhuǎn)化率非常高，具有較高的使用價(jià)值。本發(fā)明所述實(shí)例僅僅是對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式進(jìn)行描述，并非對(duì)本發(fā)明構(gòu)思和范圍進(jìn)行限定，在不脫離本發(fā)明設(shè)計(jì)思想的前提下，本領(lǐng)域工程技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作出的各種變形和改進(jìn)，均應(yīng)落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁(yè)1 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