作者設計了一種新的淋巴瘤治療方法,將靶向激酶抑制與原位疫苗接種相結合。腫瘤內注射未甲基化的胞嘧啶二核苷酸(CpG)富集的寡脫氧核苷酸,一種toll樣受體9(TLR9)的激動劑,誘導自然殺傷細胞,巨噬細胞和抗原呈遞細胞的激活,控制腫瘤生長的局部位點。
依魯替尼是Bruton酪氨酸激酶的不可逆抑制劑,是B細胞受體下游信號通路中的關鍵酶,是對多種B細胞淋巴瘤的有效治療方法。腫瘤內注射CpG與依魯替尼全身治療相結合,不僅在注射部位,而且在遠處部位根除腫瘤。令人驚訝的是,這種組合抗腫瘤作用需要完整的T細胞免疫系統(tǒng),因為它不會發(fā)生在裸,重癥聯(lián)合免疫缺陷或T細胞耗盡的小鼠中。
此外,來自用腫瘤內CpG和依魯替尼治療的動物的T細胞阻止了新注射的腫瘤的生長。該結果表明,依魯替尼可誘導淋巴瘤細胞的免疫原性細胞死亡,并且通過Toll樣受體配體同時刺激腫瘤微環(huán)境中的抗原呈遞細胞可導致強大的全身性抗腫瘤免疫應答。
圖1.依魯替尼和CpG治療后的細胞存活率。
(A,D)H11淋巴瘤細胞;(B,E)BL3750淋巴瘤細胞;(C,F(xiàn))A20淋巴瘤細胞
(ABC)依魯替尼的毒性、(DEF)cpg的毒性
結論:依魯替尼有劑量依賴性的毒性,而只有A20對cpg較敏感
圖2.依魯替尼加腫瘤內CpG誘導依魯替尼敏感腫瘤的全身抗腫瘤作用
雙側成瘤,治療后對側腫瘤大小
(B-C)H11, (D) BL3750 ,(E)A20
結論:相對BL3750、A20,H11淋巴瘤對依魯替+cpg聯(lián)合療法較敏感,且產生較明顯的遠隔效應
圖3.依魯替尼加CpG組合的治療效果是T細胞依賴性的。
(A)SCID小鼠,
(B)裸鼠,
(C)通過IP注射抗CD4(GK1.5克隆)或抗CD8T細胞(2.43克?。┤コ齌細胞耗盡的野生型C57BL / 6小鼠(CD4 / CD8)或兩種T細胞。
結論:失去T細胞或者將T細胞敲除后,依魯替尼+cpg聯(lián)合療法對腫瘤的效果明顯降低,證明該聯(lián)合療法依賴CD4+T和CD8+T細胞
圖4.來自依魯替尼-CpG處理的小鼠的轉移T細胞阻止過繼宿主中的腫瘤生長
將CD8或CD4+T細胞與H11腫瘤細胞按100:1的比例混合,共注射給naive C57BL/6小鼠。
(B-D)分別來自幼稚小鼠的CD3,CD4或CD8T細胞。
(E-G)分別來自荷瘤動物,未處理,依魯替尼處理或CpG處理的CD3T細胞。
(H-J)分別來自用依魯替尼和CpG組合治療的小鼠的CD3,CD4或CD8T細胞。
結論:只有聯(lián)合療法誘導的T細胞有較明顯的抗腫瘤作用,且CD4+T與CD8+T細胞,都有較重要的作用
圖5.抗腫瘤T細胞反應
治療后第4天,取小鼠脾細胞與照射后的BL3750或H11細胞共培養(yǎng)24h。
(A) CD4 T細胞,產生IFN-γ的量
(B) CD8 T細胞,產生IFN-γ的量
結論:依魯替尼+cpg聯(lián)合療法,相比單藥,更能激活免疫細胞的活化(IFN-γ產生的量)
圖6.依魯替尼暴露的腫瘤細胞將其抗原呈遞給T細胞
H11腫瘤細胞與依魯替尼 (1MM) 孵育24小時后,再與小鼠脾細胞或純化的脾T細胞共同培養(yǎng)(這些小鼠已接受過ibrutinib+CpG聯(lián)合治療)
結論:經過ibrutinib 的處理的腫瘤細胞,能更好地激活T細胞(脾細胞或者T細胞與腫瘤細胞共培養(yǎng)后,能產生更多的IFN-γ)
本研究中描述的結果基于同源可移植的小鼠腫瘤模型,其具有其局限性但仍然可用于研究宿主免疫系統(tǒng)上各種療法之間的相互作用?;诖颂幪峁┑膶嶒灲Y果,將依魯替尼添加到淋巴瘤中局部注射的CpG的持續(xù)臨床試驗中具有強有力的理論基礎(NCT00880581和NCT01745354)。
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