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【檢測(cè)】微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制

前言

在實(shí)際工作中存在許多復(fù)雜因素影響微生物學(xué)檢驗(yàn),可能給檢驗(yàn)結(jié)果帶來偏差甚至錯(cuò)誤,因此必須對(duì)影響檢驗(yàn)結(jié)果的諸多因素采取控制手段保證檢驗(yàn)結(jié)果的正確性,不斷完善微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制。


1.檢驗(yàn)人員

(1)微生物檢驗(yàn)不能完全依賴全自動(dòng)鑒定儀器,檢驗(yàn)工作中每一步驟均需要有高度的主觀分析和判斷能力,與個(gè)人的經(jīng)驗(yàn).技能和微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)水平密切相關(guān)。


(2)除要求微生物檢驗(yàn)人員必須具備嚴(yán)肅認(rèn)真的工作態(tài)度,精密細(xì)致的觀察和操作習(xí)慣,注重個(gè)人衛(wèi)生外,還必須訓(xùn)練掌握微生物檢驗(yàn)技術(shù)。


(3)檢驗(yàn)人員應(yīng)執(zhí)行上崗前培訓(xùn)制度,上崗前培訓(xùn)合格方能上崗操作,還要主動(dòng)參加學(xué)習(xí)、培訓(xùn)、講座,學(xué)習(xí)新技術(shù),掌握微生物學(xué)檢驗(yàn)方法,標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)法律法規(guī)。


(4)參與編寫測(cè)試程序及儀器操作程序,學(xué)習(xí)質(zhì)量保證體系知識(shí)和計(jì)量學(xué)基本知識(shí)。


(5)參加各類水平測(cè)試和盲樣測(cè)試,提高檢測(cè)水平和分析問題,解決問題的能力。


(6)微生物學(xué)檢驗(yàn)室負(fù)責(zé)人應(yīng)定期對(duì)檢驗(yàn)人員進(jìn)行專業(yè)知識(shí)和操作熟練程度的考核,提高檢驗(yàn)人員的素質(zhì)。

2.培養(yǎng)基

1 為保證干粉培養(yǎng)基質(zhì)量指標(biāo),在實(shí)際工作中應(yīng)注意;

(1)加強(qiáng)包裝的密封性能;

(2)使用時(shí)盡量縮短開蓋時(shí)間;

(3)一般干性培養(yǎng)基放在低溫干燥的環(huán)境中保存,對(duì)于易受潮的品種,啟用后宜放入干燥器中保存;

(4)由于配制水分不同,啟用次數(shù)或時(shí)間增加,干粉培養(yǎng)基的pH值可能會(huì)有所變化,應(yīng)隨時(shí)略加調(diào)整。


2 培養(yǎng)基的配制應(yīng)嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法進(jìn)行操作,并做好原始記錄。


3 為保證培養(yǎng)基必須在玻璃容器,搪瓷或鋁鍋中進(jìn)行,如用銅,鐵器皿,會(huì)對(duì)微生物生長(zhǎng)有毒害作用;


4 配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)按檢驗(yàn)項(xiàng)目規(guī)定的配方添加,不得隨意增減或更改培養(yǎng)基成分。


5 要用專用的角匙取藥品,避免交叉污染而影響檢驗(yàn)結(jié)果;

培養(yǎng)基配制最好用蒸餾水或去離子水,避免使用自來水,因其中含有氯等抗菌物質(zhì);


6 不同類型的微生物對(duì)pH值的要求不同,配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)測(cè)調(diào)值,如測(cè)定結(jié)果與所要求的值不符,則用1N NaOH或1N HCL溶液進(jìn)行調(diào)節(jié)。


7 效果試驗(yàn)是指按不同的培養(yǎng)基接種相應(yīng)的菌株,觀察細(xì)菌的發(fā)肓,菌落形狀,色素,溶血等特征,據(jù)此判斷培養(yǎng)基是否符合要求。


3.檢驗(yàn)質(zhì)量

除按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)所需檢驗(yàn)項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè)外,在實(shí)際工作中還應(yīng)注意以下幾個(gè)方面,否則會(huì)影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性:


(1)在定量檢驗(yàn)時(shí)用重量法還是用體積法,檢驗(yàn)結(jié)果會(huì)有誤差,因?yàn)榇酥夭坏扔?的樣品,1ml和1g的化驗(yàn)結(jié)果絕不會(huì)相等。

一般固態(tài)的樣品宜用重量法,液體樣品宜用體積法。

但對(duì)粘性液體(如酸奶),如用體積法,會(huì)粘附一定量的樣品在吸管上,因此此類樣品最好用重量法。


(2)如檢樣需用用無菌水或無菌生理鹽水稀釋,則最好用均質(zhì)器或組織碎機(jī),以8000`10000轉(zhuǎn)/min的轉(zhuǎn)速處理1min,制成均勻的菌懸液。


(3)樣品稀釋時(shí),常會(huì)滯留少量樣品在吸管內(nèi)外,應(yīng)多加注意。

吸入液體后,應(yīng)沿管壁慢慢注入遞增的稀釋中,特別注意此時(shí)吸管尖端切不可碰到稀釋液中。


(4)在培養(yǎng)基注入檢樣,菌懸液時(shí),注意培養(yǎng)基溫度宜在45℃  -50℃ 之間,并使培養(yǎng)基與檢樣,菌懸液充分混合。


(5)微生物培養(yǎng)時(shí),應(yīng)根據(jù)要求選擇正確的培養(yǎng)溫度和時(shí)間。


(6)應(yīng)用無菌水或無菌生理鹽水作空白對(duì)照,如果在空白對(duì)照中檢出細(xì)菌,則可認(rèn)為培養(yǎng)基質(zhì)量存在問題或在操作過程中存在污染情況。

另外,采用標(biāo)準(zhǔn)菌種作陽性對(duì)照,觀察培養(yǎng)基的質(zhì)量情況。


(7)整個(gè)檢驗(yàn)過程應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作。


(8)及時(shí)檢查結(jié)果,做好原始數(shù)據(jù)記錄。


4.參考菌株及其保存

實(shí)驗(yàn)室要準(zhǔn)備好足夠種類和數(shù)量的參考菌株,滿足培養(yǎng)基,試劑盒和試劑質(zhì)量測(cè)試的需要。保存菌株要定期傳代,注意無菌操作,使菌株不污染,不死亡,不丟棄。


1 應(yīng)設(shè)專人妥善保管,菌株保存箱應(yīng)加鎖放置適宜環(huán)境,取出使用應(yīng)登記;


2 保存菌株應(yīng)建冊(cè)登記,基本項(xiàng)目應(yīng)包括菌種名稱、分離來源、分離日期、傳代日期、保存方法、主要性狀、保管者、領(lǐng)用者等;


3 對(duì)保存菌種,經(jīng)傳代數(shù)次后應(yīng)進(jìn)行一次系統(tǒng)生化反應(yīng),,血清學(xué)期成績(jī)特性等生物學(xué)性狀觀察,檢查其是否發(fā)生變異。

5.常見的參考菌株保存方法

細(xì)菌

(1)營(yíng)養(yǎng)要求不高的需氧細(xì)菌在胰胨大豆瓊脂斜面上能存活1年。

(2)需氧或厭氧菌的長(zhǎng)期儲(chǔ)存需冷凍干燥,或存放在-70 ℃。

(3)營(yíng)養(yǎng)要求不高的凍干菌種每隔5年要解凍分離重新凍干。

(4)細(xì)菌低溫冰凍保存時(shí)可懸浮于消毒去脂牛奶,含15%甘油的胰胨大豆肉湯或無菌馬血中。


真菌

(1)酵母菌按營(yíng)養(yǎng)要求不高的細(xì)菌同樣處理。

(2)霉菌在馬鈴薯葡萄糖瓊脂斜面上4 ℃儲(chǔ)存6 個(gè)月-1年,斜面上覆蓋消毒石蠟油可在室溫下長(zhǎng)期存放。

菌種保藏的方法

6.菌種保藏的方法

1定期移植保藏方法:

將菌種接種于適宜的斜面或液體培養(yǎng)基,也可進(jìn)行穿刺培養(yǎng),等生長(zhǎng)成健壯的菌體(對(duì)數(shù)期細(xì)胞,有性孢子或無性孢子)后,將菌種放置4 ℃冰箱保藏,每間隔一定時(shí)間需要重新移植培養(yǎng)一次。芽孢桿菌3-6個(gè)月移種一次,其它細(xì)菌每月移種一次。


2液體石蠟保藏法:

這種方法是定期移值保藏法的補(bǔ)充,在生長(zhǎng)良好的斜面表面覆蓋一層無菌的石蠟,液面高出培養(yǎng)基1cm,將其置試管架上以直立狀態(tài)低溫保藏,液體石蠟可以防止水分蒸發(fā),隔絕氧氣,所以能延長(zhǎng)保藏的時(shí)間。


3沙管保藏法,土壤保藏法


4麩皮保藏法


5蒸餾水保藏法


6液氮超低溫保藏法


7甘油保藏法


8冷凍干燥保藏法

冷凍干燥保藏法一般過程

(1)安瓿管---酸洗,水洗---烘干----滅菌

(2)配制保護(hù)劑----分裝----滅菌

(3)菌種---培養(yǎng)---制備菌懸液(加入2)----分裝安瓿管----預(yù)凍----真空干燥----裝在歧管上抽真空-----火焰上熔封安瓿管口----檢測(cè)真空----保藏

7.實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外質(zhì)量控制

(一)內(nèi)部質(zhì)量控制

為保證實(shí)驗(yàn)室連續(xù)評(píng)價(jià)結(jié)果的可靠性和精密度,必須對(duì)所用方法的重復(fù)性及再現(xiàn)性定期測(cè)定。對(duì)于不同的控制系統(tǒng),實(shí)驗(yàn)室必須建立限值,超過限值應(yīng)采取糾偏措施。


實(shí)踐中內(nèi)部質(zhì)量控制可包括:

(1)系統(tǒng)地使用一式雙份的菌落計(jì)數(shù)測(cè)定;

(2)由同一檢驗(yàn)人員和幾個(gè)檢驗(yàn)人員作平行樣;

(3)定期或不定期進(jìn)行盲樣測(cè)試。


(二)外部質(zhì)量控制

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)參加外部的質(zhì)量控制活動(dòng),對(duì)其開展的每一項(xiàng)檢測(cè)均應(yīng)參加相應(yīng)的室間質(zhì)量控制。


對(duì)有關(guān)實(shí)驗(yàn)室或管理機(jī)構(gòu)發(fā)出的測(cè)試樣品應(yīng)嚴(yán)格地當(dāng)作普通樣品一樣處理,這樣一種方法有助于實(shí)驗(yàn)室每天測(cè)試的準(zhǔn)確性和重復(fù)性,是對(duì)實(shí)驗(yàn)室所用的方法、試劑、設(shè)備、人員能力的測(cè)試。


從室間樣品測(cè)試中的錯(cuò)誤可以發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室的不足之處,對(duì)工作人員的教育改進(jìn)可以提高實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)質(zhì)量。


對(duì)返回的室間測(cè)定評(píng)級(jí)中存在的問題應(yīng)當(dāng)召集體員工討論,改進(jìn)措施(包括方法的改變,員工的改變,員工的再訓(xùn)練,培養(yǎng)基和試劑購(gòu)買來源的更換等)應(yīng)當(dāng)記錄在案。


某些項(xiàng)目缺少室間質(zhì)量控制,實(shí)驗(yàn)室可以設(shè)置室內(nèi)質(zhì)量控制,每半年自行評(píng)估一次。


經(jīng)常參加微生物實(shí)驗(yàn)室間質(zhì)控活動(dòng),有助于加強(qiáng)檢測(cè)人員的基本功訓(xùn)練,增強(qiáng)樣品檢測(cè)過程中“量”的概念。


實(shí)驗(yàn)室間的質(zhì)控可在國(guó)內(nèi)外范圍進(jìn)行,有能力的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)力爭(zhēng)參加國(guó)家際間質(zhì)控活動(dòng),樹立良好的檢驗(yàn)信譽(yù)。

結(jié)束語

微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制比較復(fù)雜,目前尚無統(tǒng)一規(guī)范,國(guó)內(nèi)各實(shí)驗(yàn)室條件參差不齊,要使微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制日臻完善,仍需廣大微生物檢驗(yàn)人員共同努力。


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