地黃為玄參科多年生草本植物地黃Rehmannia glutinosa Libibosch.的新鮮或干燥塊根，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有滋陰清熱、補(bǔ)血止血等功效，臨床應(yīng)用極廣，中醫(yī)常取其滋陰清熱之效用于糖尿病的治療。一般認(rèn)為，生地黃（簡稱生地）甘寒，有清熱涼血、養(yǎng)陰生津之功；熟地黃（簡稱熟地）甘溫，有滋陰補(bǔ)血，益精填髓之效。在古今糖尿病防治的中醫(yī)處方中，生地黃與熟地黃均有入藥，且比例相當(dāng)。為了弄清生地與熟地究竟哪個(gè)用于糖尿病治療更為合理，實(shí)驗(yàn)以此前復(fù)制成功的陰虛血瘀型糖尿病小鼠模型[1]為平臺(tái)，對二者的降糖降脂作用進(jìn)行了比較研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下：
1 材料與方法
1．1 生地與熟地樣品，從市場上購得生地黃，經(jīng)鑒定系玄參科植物地黃的干燥塊根。洗凈，悶潤，切厚片，干燥得生地。取上述生地，按每100g生地藥材加40g黃酒拌勻，裝入高壓鍋中隔水燉至黃酒被吸盡，烏黑色光澤，味轉(zhuǎn)甜，取出，曬至外皮粘液稍干時(shí)，切厚片，干燥即得熟地。將生地與熟地分別打成細(xì)粉，臨用時(shí)用蒸餾水分別配制成同樣濃度（含生藥量）的混懸液備用。養(yǎng)陰降糖片，正大青春寶藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，批號(hào)20120206。所有藥物的給藥劑量以g（生藥）/kg（體重）計(jì)。
1．2 動(dòng)物，ICR小鼠，清潔級(jí)，20 2g，全部♂，由浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。合格證號(hào)：SCXK（浙動(dòng)）2008-0033。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（浙）2008-0112。
1．3 試劑，四氧嘧啶，Sigma公司產(chǎn)品；葡萄糖試劑盒、膽固醇試劑盒、甘油三酯試劑盒、高密度脂蛋白膽固醇試劑盒、低密度脂蛋白膽固醇試劑盒，均為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品，上述試劑盒均在有效期內(nèi)使用。高脂飼料委托浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心加工，其中含基礎(chǔ)飼料 65%；蔗糖5%；蛋黃粉10%；豬油10%；全脂奶粉10%。
1．4 儀器，HITACHI-7020全自動(dòng)生化分析儀，日本產(chǎn)品。
1．5 方法
1．5．1 糖尿病小鼠模型制備[1]：取90只健康ICR小鼠，隨機(jī)分出10只為正常組動(dòng)物。其余小鼠先用高糖高脂飼料喂養(yǎng)1個(gè)月，于第31天禁食不禁水16h后，尾靜脈注射新鮮配制的濃度為2%四氧嘧啶生理鹽水溶液，劑量為50mg/kg 。正常對照組小鼠在禁食16h后于尾靜脈注射相應(yīng)體積的生理鹽水。上述小鼠經(jīng)過72h的自由飲食后，于尾靜脈取血測定血糖與膽固醇，選擇血糖值大于16.0mmol/l、膽固醇大于正常1.5倍的小鼠作為陰虛血瘀型糖尿病小鼠。
1．5．2 動(dòng)物分組與給藥: 取60只造模成功的小鼠按血糖值分層隨機(jī)分為6組,每組10只：模型組，陽性藥對照組（養(yǎng)陰降糖片10/g)，生地和熟地各大、小2個(gè)劑量組（10，5g生藥/g）。從造模第4天開始給藥，治療組小鼠分別灌胃給予生地、熟地及養(yǎng)陰降糖片混懸液，正常組和模型組小鼠灌胃給予相應(yīng)體積的蒸餾水，1次/d，連續(xù)2周。
1．5．3 實(shí)驗(yàn)觀測指標(biāo)：分別于給藥前（0d）、給藥第7天、給藥第14天于尾靜脈取血用血糖儀測小鼠的血糖值。末次給藥后小鼠禁食12h，口服葡萄糖2.5 g /k g，尾靜脈取血分別測定口服前（0h）、口服后0.5，1，2h的血糖值?？诜咸烟悄土繉?shí)驗(yàn)后小鼠摘眼球取血，離心分離血清。用自動(dòng)生化分析儀測定血清中甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）的含量。
1．6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 定量指標(biāo)以X s的形式表示，對兩組定量資料的結(jié)果，采用t檢驗(yàn)進(jìn)行兩組間均數(shù)的差異顯著性檢驗(yàn)。當(dāng)P<0.05時(shí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。>
2 結(jié)果
2．1 生地與熟地對四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖的影響
結(jié)果見表1。
結(jié)果見表2。表2結(jié)果表明，與正常組相比，模型組小鼠在口服葡萄糖負(fù)荷后0，5，1，2h血糖值顯著升高。與模型組相比，養(yǎng)陰降糖片和生地大小二個(gè)劑量組及熟地大劑量組能顯著降低糖尿病小鼠口服葡萄糖負(fù)荷0，5，1，2h血糖值，說明生地黃與熟地黃均可改善糖尿病小鼠的糖耐量，同樣劑量下生地黃的作用強(qiáng)于熟地黃。
結(jié)果見表3。表3結(jié)果表明，生地黃大、小二個(gè)劑量組與熟地黃大劑量組及陽性藥養(yǎng)陰降糖片組與模型組比較，血清TC、TG、LDL水平明顯下降，血清HDL-C水平明顯升高。說明生地與熟地均具有降脂作用；同樣劑量下，生地的降脂作用強(qiáng)于熟地。
3 討論
糖尿病是以慢性高血糖為特征的一組代謝性疾病，表現(xiàn)為糖類、脂類、蛋白質(zhì)代謝紊亂。大量研究表明，糖脂代謝紊亂是導(dǎo)致糖尿病并發(fā)癥的一個(gè)重要因素。目前西藥仍是治療糖尿病的主要藥物，但由于毒副作用和高昂的醫(yī)療費(fèi)用，從天然產(chǎn)物或中藥里篩選和發(fā)現(xiàn)降糖活性成分已引起廣泛關(guān)注。已發(fā)現(xiàn)的天然產(chǎn)物或中藥中降血糖活性成分有糖類、黃酮類、皂苷、萜類、糖蛋白、多肽、二苯乙烯類、生物堿、不飽和脂肪酸、含硫化合物、四氫吡喃類、吡咯化合物、有機(jī)酸等，同時(shí)研究表明中藥往往在降糖的同時(shí)具有降脂作用[2][3]。
地黃是最常用的中藥材之一，始載于《 神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品。中醫(yī)認(rèn)為，中藥生地具清熱涼血，養(yǎng)陰生津功效，為治療糖尿病的四大'圣藥'之一,在糖尿病治療方面具有悠久的歷史。文獻(xiàn)研究表明，在治療糖尿病的中藥復(fù)方中，生地使用率居前三位，而且在治療糖尿病復(fù)方中藥與中成藥制劑中也經(jīng)常含有生地。而熟地作為地黃的主要炮制品，在中醫(yī)糖尿病的臨床治療中也廣為應(yīng)用，特別是在抗糖尿病的中藥復(fù)方中，應(yīng)用熟地的頻率也相當(dāng)高。國內(nèi)外學(xué)者已對地黃的降糖作用進(jìn)行了大量研究，發(fā)現(xiàn)活性成分包括地黃梓醇、地黃低聚糖、地黃寡糖、地黃苷D等[2][4]。
養(yǎng)陰生津是地黃公認(rèn)的傳統(tǒng)功效，也是中醫(yī)用其治療糖尿病的主要理論依據(jù)。為此，本試驗(yàn)運(yùn)用成功復(fù)制的糖尿病小鼠模型，以此為平臺(tái)觀察比較生地與熟地對該型小鼠糖脂代謝的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，生地黃的降糖降脂作用優(yōu)于熟地黃。這為中醫(yī)運(yùn)用地黃防治糖尿病的處方遣藥提供了藥理學(xué)依據(jù)。如能結(jié)合二者的降糖有效成分分析，將更具有臨床指導(dǎo)意義，有待下一步深入研究探討。
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