本周hzangs在最新文獻(xiàn)中選取了11篇分享給大家，其中7篇提供中文摘要。JEV近期的變化很是引人注目，發(fā)文速度得到了明顯的提升，JEV的文章選擇表現(xiàn)出相較其他雜志的獨(dú)特性，他們更多的刊發(fā)方法學(xué)及技術(shù)方面的文章，同時(shí)兼顧功能性報(bào)道，相信未來是一個(gè)不錯(cuò)的囊泡領(lǐng)域?qū)I(yè)雜志！本周推薦的第1篇值得我們關(guān)注，文章介紹了心源性細(xì)胞來源細(xì)胞外囊泡可靠的內(nèi)參基因，這解決了qPCR內(nèi)參基因選擇的問題，雖然只是在心源性細(xì)胞外囊泡中使用，但它提供了一套內(nèi)參基因選擇的策略，值得我們關(guān)注；第2篇介紹了不同儲(chǔ)存條件溫度對(duì)囊泡的影響，這個(gè)是個(gè)很關(guān)鍵的問題，結(jié)論是囊泡最好現(xiàn)用現(xiàn)制，如何完好的保存囊泡是擺在大家面前亟待解決的問題；第3篇文章則介紹不同細(xì)胞來源囊泡的攝取效率可能存在差異；第4篇文章則介紹了微流控在細(xì)胞外囊泡分離純化方面的應(yīng)用，是一篇綜述，值得大家關(guān)注。相關(guān)文章的原文hzangs會(huì)在本周末上傳至論壇同名貼下，需要的可以到論壇下載。
1. A comprehensive method for identification of suitable reference genes in extracellular vesicles. 全面的使用多種方法學(xué)鑒定適合細(xì)胞外囊泡RT-qPCR分析的內(nèi)參基因。 [J Extracell Vesicles] IF? PMID：28815002
摘要：逆轉(zhuǎn)錄定量聚合酶鏈反應(yīng)（也就是我們平時(shí)說的RT-qPCR）是評(píng)估基因表達(dá)的最靈敏，經(jīng)濟(jì)和廣泛使用的方法之一。然而，這種方法的效用一直受到包括使用適當(dāng)參考基因的歸一化等許多問題的質(zhì)疑。細(xì)胞外囊泡（EV）生物學(xué)的興起進(jìn)一步強(qiáng)調(diào)了開發(fā)定制有效參考基因的急迫需求。 EV包含小RNA（包括microRNAs（miR））等獨(dú)特標(biāo)記。在本研究中，我們開發(fā)和驗(yàn)證了一種綜合策略，用于在治療相關(guān)的細(xì)胞類型——心源性細(xì)胞衍生的細(xì)胞外囊泡中鑒定高度穩(wěn)定的參考基因。我們使用參考基因評(píng)估的四種主要方法分析數(shù)據(jù)：NormFinder，GeNorm，BestKeeper和Delta Ct。獲得所有這些方法的加權(quán)幾何平均值用于最終排名。 RNA測序分析鑒定了miR-101-3p，miR-23a-3p和以前鑒定的細(xì)胞外囊泡參考基因：miR-26a-5p?；谛酒姆椒ǎ∟anoString）的分析鑒定了miR-23a，miR-217和miR-379作為穩(wěn)定候選物。 RT-qPCR驗(yàn)證顯示miR-23a-3p，miR-101-3p和miR-26a-5p的平均值是最穩(wěn)定的歸一化策略參考基因。在這里，我們證明使用多種算法的不同數(shù)據(jù)條件數(shù)據(jù)集綜合分析得到了可靠穩(wěn)定的參考基因，這將增加治療相關(guān)細(xì)胞外囊泡基因表達(dá)評(píng)估的可靠性。
PS：qPCR相信是目前最為方便的檢測RNA水平的方法，但是針對(duì)細(xì)胞外囊泡，目前依舊沒有太好的內(nèi)參基因，這篇文章則介紹了心源性細(xì)胞相關(guān)的細(xì)胞外囊泡可用的內(nèi)參基因，非常值得大家關(guān)注。
2. Effects of storage temperature on airway exosome integrity for diagnostic and functional analyses.儲(chǔ)存溫度對(duì)呼吸道來源外泌體完整性及診斷和功能特性的影響。 [J Extracell Vesicles] IF? PMID：28819550
摘要：細(xì)胞外囊泡含有母細(xì)胞的細(xì)胞生物分子。為了對(duì)外泌體含量和功能進(jìn)行可重復(fù)的研究，需要使儲(chǔ)存條件對(duì)呼吸道來源外泌體完整性的影響最小。本文中，我們比較新鮮分離的氣道外泌體的表面性質(zhì)和蛋白質(zhì)含量與冷藏或冷凍處理后的外泌體的差異。方法上我們通過差速超速離心純化的小鼠支氣管肺泡灌洗液（BALF）外泌體，立即檢測或在+ 4°C或-80°C儲(chǔ)存后再檢測。通過動(dòng)態(tài)光散射（DLS），透射電子顯微鏡（TEM）和電荷密度（ζ電位，ζ）評(píng)估外泌體結(jié)構(gòu)。通過無標(biāo)記的LC-MS / MS鑒定了外來蛋白質(zhì)含量，包括泄漏/解離的蛋白質(zhì)。最終我們發(fā)現(xiàn)新鮮分離的BALF外泌體具有95nm的平均直徑和傳統(tǒng)的特征形態(tài)。儲(chǔ)存對(duì)BALF外泌體的大小和含量有顯著影響。與新鮮相比，儲(chǔ)存在+ 4℃的外泌體直徑增加了10％，溶解后的樣品存在分散聚集體并且ζ電位下降。在-80℃下的儲(chǔ)存產(chǎn)生更大的影響，導(dǎo)致直徑增加25％，ζ電位顯著下降，并導(dǎo)致多層結(jié)構(gòu)的形成。在新鮮的外泌體中，我們鑒定出了1140個(gè)處于19個(gè)不同基因集合（gene set）的蛋白。在室溫下儲(chǔ)存后，鑒定出848個(gè)蛋白質(zhì)。在+ 4℃儲(chǔ)存的樣本中，與新鮮制備的外泌體洗滌上清相比，上清液部分出現(xiàn)224個(gè)蛋白質(zhì);這些蛋白質(zhì)代表外泌體泄漏或與外泌體松散結(jié)合的“周外蛋白質(zhì)”蛋白的解離。在-80℃儲(chǔ)存的制劑中，上清液中出現(xiàn)194個(gè)蛋白質(zhì)，表明不同的蛋白質(zhì)在不同的儲(chǔ)存溫度下從外泌體中泄漏出來。因此，我們認(rèn)為儲(chǔ)存會(huì)導(dǎo)致BALF外泌體在形態(tài)特征和蛋白質(zhì)含量方面的變化。為了保存外泌體蛋白質(zhì)含量和代表性功能，我們應(yīng)在分離后立即分析和使用氣呼吸道來源外泌體。
PS：外泌體的保存一直是一個(gè)大家爭論的問題。這篇文章以呼吸道來源的外泌體為研究對(duì)象，研究了不同保存溫度對(duì)外泌體的影響，最終結(jié)果表明，目前最好的辦法可能依舊是“外泌體要現(xiàn)用現(xiàn)制備！”。
3. Metastatic state of parent cells influences the uptake and functionality of prostate cancer cell-derived extracellular vesicles.轉(zhuǎn)移灶來源的病人細(xì)胞釋放的細(xì)胞外囊泡更容易被前列腺癌細(xì)胞和正常細(xì)胞攝取，同時(shí)更強(qiáng)烈的影響受體細(xì)胞的功能。 [J Extracell Vesicles] IF? PMID：28819549
摘要：細(xì)胞外囊泡（EVs）包括微囊泡和外泌體，他們能夠介導(dǎo)細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)，在癌癥進(jìn)展和轉(zhuǎn)移發(fā)展中具有深遠(yuǎn)的作用。細(xì)胞外囊泡的內(nèi)化可以促進(jìn)受體細(xì)胞的功能變化，其性質(zhì)取決于細(xì)胞外囊泡的分子組成和內(nèi)容物。我們假設(shè)癌母細(xì)胞的轉(zhuǎn)移階段將決定相應(yīng)的癌細(xì)胞衍生的EV的攝取效力和隨后的功能效應(yīng)。為了解決這個(gè)問題，我們比較了來自兩個(gè)轉(zhuǎn)移灶的前列腺癌細(xì)胞系（PC-3和LNCaP），人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶永生化原發(fā)性惡性前列腺上皮細(xì)胞（RC92a / hTERT）和良性上皮前列腺細(xì)胞系（PNT2）。通過高含量顯微鏡，共焦顯微鏡和流式細(xì)胞術(shù)分析發(fā)現(xiàn)，與來自原發(fā)性惡性RC92a / hTERT細(xì)胞或良性PNT2細(xì)胞的細(xì)胞外囊泡相比，由PC-3/LNCaP細(xì)胞分離的細(xì)胞外囊泡能夠被PC-3和LNCaP高效地內(nèi)化。 細(xì)胞外囊泡的攝取也受細(xì)胞周期的影響，與G0 / G1或S期相比，在G2 / M期細(xì)胞中觀察到更強(qiáng)的細(xì)胞外囊泡衍生的熒光信號(hào)。最后，在細(xì)胞外囊泡的受體細(xì)胞的功能上也觀察到差異。與來自良性細(xì)胞或原代癌細(xì)胞相比，來自轉(zhuǎn)移灶癌細(xì)胞的細(xì)胞外囊泡對(duì)PNT2細(xì)胞和PC-3細(xì)胞的增殖有明顯的促進(jìn)作用，而且PC-3細(xì)胞的遷移能力也被這些細(xì)胞外囊泡增強(qiáng)。
PS：這篇文章給大家提供了一個(gè)新的認(rèn)識(shí)，即惡性程度更高的腫瘤來源的細(xì)胞外囊泡更容易被攝取，這可能暗示我們應(yīng)當(dāng)關(guān)注腫瘤的這一特性，它可能是潛在的腫瘤微環(huán)境治療靶點(diǎn)！
4. Microfluidics for exosome isolation and analysis: enabling liquid biopsy for personalized medicine.微流控技術(shù)用于外泌體純化及分析：使個(gè)性化醫(yī)學(xué)液體活檢成為可能。 [Lab Chip] IF=5.59 PMID：28832692
摘要：外泌體，能夠包裹脂質(zhì)，蛋白質(zhì)，功能性信使RNA和微RNA及雙鏈DNA的最小尺寸細(xì)胞外囊泡（∽30-150nm），目前它已經(jīng)被證實(shí)是細(xì)胞間通訊的關(guān)鍵參與者。他們?cè)隗w液中廣泛存在，能夠保護(hù)其攜帶的貨物免受酶類降解，這一特性使其成為臨床應(yīng)用中十分具有吸引力的候選運(yùn)載體，其具有很大的潛力成為創(chuàng)新型的診斷和治療工具。但是臨床應(yīng)用中利用常規(guī)的分離和分析手段獲取高純度外泌體依舊具有挑戰(zhàn)性，常規(guī)方法面臨許多缺點(diǎn)，包括低產(chǎn)率和純度，處理時(shí)間長，成本高，標(biāo)準(zhǔn)化困難。在本文中，我們回顧和總結(jié)了一個(gè)目前比較有希望的分離純化解決方案即基于微流控技術(shù)的外泌體分析檢測和分析，微流控方法可以講大量樣本的外泌體分離，檢測和分析集成到一起，這有望推進(jìn)基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用，同時(shí)也為基于外泌體的個(gè)性化醫(yī)學(xué)液體活檢鋪平了道路。
PS：外泌體的分離和純化分析方法是目前該領(lǐng)域亟待解決的問題，針對(duì)這一問題目前主要有沉淀、色譜和微流控三大原理為基礎(chǔ)的不同分離方法。就目前的形式看，微流控依舊是未來最有可能應(yīng)用于臨床細(xì)胞外囊泡分離檢測的手段，它能夠?qū)悠贩蛛x純化及分析集成于一體，同時(shí)具有簡單易操作、易標(biāo)準(zhǔn)化和易高通量化等特點(diǎn)，隨著該技術(shù)在臨床應(yīng)用的鋪開，其成本也會(huì)隨著應(yīng)用頻率的提升而逐漸下降。Hzangs一直認(rèn)為，著眼未來的外泌體臨床應(yīng)用，微流控分離分析方法較之沉淀和色譜具有不可替代的優(yōu)勢，值得我們關(guān)注。
5. Acute myeloid leukemia transforms the bone marrow niche into a leukemia-permissive microenvironment through exosome secretion. 急性髓性白血病細(xì)胞來源的外泌體能夠改變骨髓“龕”結(jié)構(gòu)，使其促進(jìn)白血病發(fā)展并抑制正常造血過程。 [Leukemia] IF=12.10 PMID：28816238
摘要：關(guān)于白血病細(xì)胞如何改變骨髓（BM）的內(nèi)部“龕”結(jié)構(gòu)微環(huán)境以促進(jìn)自身的生長和逃避化學(xué)療法知之甚少。在這里，我們提供的數(shù)據(jù)表明，急性骨髓性白血?。ˋML）爆發(fā)能夠通過外泌體的分泌將BM細(xì)胞重塑成支持白血病生長和抑制正常造血過程的骨髓微環(huán)境。移植AML細(xì)胞或AML衍生的外泌體能夠增加間充質(zhì)基質(zhì)祖細(xì)胞數(shù)量，并阻斷體內(nèi)骨吸收發(fā)育及骨的形成。用AML衍生的外泌體預(yù)處理能夠是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物產(chǎn)生加速AML生長的微環(huán)境。相反，通過靶向Rab27a（參與外泌體釋放的重要調(diào)節(jié)因子）破壞AML細(xì)胞中外泌體的分泌，能夠顯著延緩了白血病的發(fā)展。在BM基質(zhì)細(xì)胞中，AML衍生的外泌體能夠誘導(dǎo)DKK1的表達(dá)，DKK1是正常造血和成骨的抑制因子，從而促成成骨細(xì)胞流失。相反，使用DKK1抑制劑治療能夠延遲AML進(jìn)展并延長AML移植小鼠的生存期。此外，AML衍生的外泌體誘導(dǎo)BM基質(zhì)細(xì)胞中造血干細(xì)胞支持因子（例如CXCL12，KITL和IGF1）的廣泛下調(diào)，并降低其支持的正常造血功能?？傊?，本研究揭示了AML發(fā)病機(jī)理的新特征，揭示了AML細(xì)胞如何產(chǎn)生增強(qiáng)白血病細(xì)胞增殖和存活并抑制造血過程的自我強(qiáng)化白血病“龕”結(jié)構(gòu)。
PS：外泌體在白血病過程中的促進(jìn)作用。這一研究豐富了我們對(duì)白血病細(xì)胞自我促進(jìn)的認(rèn)識(shí)。是一篇不錯(cuò)的參考和學(xué)習(xí)文獻(xiàn)。
6. Red blood cells release microparticles containing human argonaute 2 and miRNAs to target genes of Plasmodium falciparum.血紅細(xì)胞釋放微囊泡中包涵人ago2和miRNAs能夠靶向惡性瘧原蟲。 [Emerg Microbes Infect] IF=5.61 PMID：28831191
摘要：紅細(xì)胞（RBC）是瘧疾寄生蟲（瘧原蟲）感染后攝取營養(yǎng)的原料倉和作為逃避宿主免疫系統(tǒng)的避難所。最近的研究報(bào)道了瘧疾患者循環(huán)系統(tǒng)中細(xì)胞外囊泡（微粒，MPs）含量的顯著提升。然而，目前還不清楚這些細(xì)胞外囊泡是如何產(chǎn)生的，以及它們的生物學(xué)功能。在這項(xiàng)研究中，我們從正常的紅細(xì)胞和瘧原蟲感染的紅細(xì)胞（iRBC）的培養(yǎng)基中分離MP，比較其數(shù)量和來源，并通過深度測序分析其miRNA。我們發(fā)現(xiàn)在iRBCs培養(yǎng)基中分離得到的MP的數(shù)量要大于正常RBCs的培養(yǎng)基分離量。進(jìn)一步研究表明，在這些MPs中，發(fā)現(xiàn)人類argonaute 2（hAgo2）與數(shù)百種miRNA結(jié)合。將這些hAgo2-miRNA復(fù)合物轉(zhuǎn)移到寄生蟲中，我們發(fā)現(xiàn)這些復(fù)合物能夠通過與編碼PfEMP1的基因家族var基因的A和B結(jié)合，miR-451/140下調(diào)基本瘧疾抗原PfEMP1的表達(dá)。我們的數(shù)據(jù)表明，通過釋放MPs，成熟的紅細(xì)胞對(duì)瘧疾感染具有天生的抵抗能力。這些研究還揭示了紅細(xì)胞基因突變主要發(fā)生在瘧疾流行地區(qū)的人群以及使用miRNA作為瘧疾患者新藥的可能性。
PS：國內(nèi)研究者的一篇不錯(cuò)的文章。文章研究了瘧原蟲對(duì)紅細(xì)胞細(xì)胞外囊泡的影響，并發(fā)現(xiàn)了紅細(xì)胞對(duì)瘧原蟲的天生抗性，值得我們學(xué)習(xí)和了解一下。
7. C1-Inhibitor Decreases the Release of Vasculitis-Like Chemotactic Endothelial Microvesicles. C1抑制劑在血管炎病人中能都降低趨化性內(nèi)皮細(xì)胞微粒的釋放。 [J Am Soc Nephrol] IF=8.49 PMID：28289183
摘要：激肽系統(tǒng)在血管炎期間被激活并且可能有助于慢性炎癥。 C1抑制劑是激肽系統(tǒng)的主要抑制劑。在這項(xiàng)研究中，我們研究了內(nèi)皮細(xì)胞來源微囊泡上激肽B1受體的存在及其對(duì)炎癥過程的促進(jìn)作用。與對(duì)照組（n = 15）相比，通過流式細(xì)胞術(shù)分析鑒定發(fā)現(xiàn)，急性血管炎患者（n = 12）具有明顯較高的循環(huán)系統(tǒng)內(nèi)皮微泡水平，并且這些微泡顯著的表現(xiàn)為激肽B1受體陽性（P <0.001） 。與來自正常細(xì)胞的微泡相比，衍生自受處理后的人胚胎腎細(xì)胞的B1受體陽性微泡顯著誘導(dǎo)了嗜中性粒細(xì)胞的趨化作用，B1受體拮抗劑阻斷了這種作用。同樣，患者血漿能夠誘導(dǎo)嗜中性粒細(xì)胞趨化性，通過降低微泡水平和通過阻斷B1受體可以降低這一效果。我們使用灌注系統(tǒng)來研究患者血漿（n = 6）和對(duì)照血漿（n = 6）對(duì)腎小球內(nèi)皮細(xì)胞釋放微泡的影響。相比對(duì)照樣品，患者樣品明顯誘導(dǎo)了更多的B1受體陽性內(nèi)皮微泡的釋放，通過減少灌注樣品中的微泡能夠消除這種作用。灌注C1抑制劑能夠抑制病人血漿對(duì)腎小球內(nèi)皮細(xì)胞B1受體陽性內(nèi)皮微泡釋放的促進(jìn)作用。因此，B1受體陽性內(nèi)皮微泡可能通過誘導(dǎo)嗜中性粒細(xì)胞趨化性而促進(jìn)慢性炎癥，探討C1抑制劑對(duì)這些微泡的抑制作用從而降低嗜中性粒細(xì)胞誘發(fā)的炎癥是潛在治療方法。
PS：相對(duì)比較專業(yè)的研究性論文，介紹了內(nèi)皮微粒對(duì)中性粒細(xì)胞的招募及對(duì)慢性炎癥的影響。
8. Extracellular vesicles: Taking metabolism on the road. 細(xì)胞外囊泡：在傳遞的路上進(jìn)行代謝過程。 [Nat Chem Biol] IF=12.71 PMID：28820875
PS：前些日子曾經(jīng)在nature旗下子刊發(fā)布過一篇關(guān)于細(xì)胞外囊泡攜帶具有活性的代謝酶的相關(guān)報(bào)道。這是對(duì)該報(bào)道的一篇評(píng)論性文章，關(guān)注這一領(lǐng)域的朋友不妨讀一讀。
9. Exosomes Derived From Natural Killer Cells Exert Therapeutic Effect in Melanoma. 自然殺傷細(xì)胞來源的外泌體對(duì)黑色素瘤具有治療作用。 [Theranostics] IF=8.85 PMID：28819459
PS：看題目就能知道這篇文章想說什么。專業(yè)領(lǐng)域內(nèi)的朋友值得關(guān)注一下。
10. Glioblastoma stem-like cells secrete the pro-angiogenic VEGF-A factor in extracellular vesicles.膠質(zhì)母細(xì)胞瘤干性樣細(xì)胞釋放細(xì)胞外囊泡包涵促進(jìn)血管生成的VEGF-A因子。 [J Extracell Vesicles] IF? PMID：28815003
PS：JEV發(fā)表的一篇關(guān)于細(xì)胞外囊泡特定內(nèi)容物的研究性論文，介紹了腫瘤細(xì)胞釋放的細(xì)胞外囊泡攜帶VEGF-A因子并發(fā)揮功能。
11. Angiogenic Mechanisms of Human CD34+ Stem Cell Exosomes in the Repair of Ischemic Hindlimb.人CD34陽性干細(xì)胞來源外泌體在缺血性下肢損傷修復(fù)中促血管生成的機(jī)制。 [Circ Res] IF=11.55 PMID：28298297
PS：缺血損傷修復(fù)過程中干細(xì)胞外泌體的作用機(jī)制，相關(guān)領(lǐng)域的朋友值得關(guān)注一下。
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