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一、實(shí)驗(yàn)原理：食品中的蛋白質(zhì)在催化加熱的條件下被分解，產(chǎn)生的氨與硫酸結(jié)合生成硫酸銨。堿化蒸餾使氨游離，用硼酸吸收后以硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定，根據(jù)酸的消耗量計(jì)算氮的含量，再乘以換算系數(shù)，即為蛋白質(zhì)含量。

二、試劑及配置

1）.所需試劑

2）.試劑配置（本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的三級(jí)水）

三（1）手動(dòng)凱氏定氮方法

儀器設(shè)備

1.天平：感重為1mg

2.定氮裝置圖（如下圖所示）

3.裝置分解說(shuō)明：

4.分析步驟講解：

a.樣品的處理：稱取充分混勻的固體試樣0.2g--2g、半固體試樣2g--5g或液體試樣10g--25g(相當(dāng)于30mg--40mg氮），精確度為0.001g，移入干燥的100ml、250ml、或500ml定氮瓶中，加入0.4g硫酸銅、6g硫酸鉀及20ml硫酸，輕搖后于瓶口放一小漏斗，將瓶以45°角斜支于有小孔的石棉網(wǎng)上。小心加熱，待內(nèi)容物全部碳化，泡沫完全停止后，加強(qiáng)火力，并保持瓶?jī)?nèi)液體沸騰，至液體呈藍(lán)綠色并澄清透明后，再繼續(xù)加熱0.5h--1h。取下放冷，小心加入20ml水，放冷后，移入100ml容量瓶中。并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水中刻度線，混勻備用。同時(shí)做試劑空白試驗(yàn)。

b.測(cè)定過(guò)程：按照上圖裝置安裝好定氮蒸餾裝置，向水蒸氣發(fā)生器內(nèi)裝水至2/3，加入數(shù)粒玻璃珠，加甲基紅乙醇溶液數(shù)滴及數(shù)毫升的硫酸，以保持水呈酸性，加熱煮沸水蒸氣發(fā)生器內(nèi)的水并保持沸騰。

c.向接受瓶?jī)?nèi)加入10.0ml硼酸溶液及1--2滴A混合指示劑或B混合指示劑，并是冷凝管的下端插入液面下，根據(jù)試樣中的氮含量，準(zhǔn)確吸取2.0ml--10.0ml試樣處理液由小玻杯注入反應(yīng)室，以10ml水洗滌小玻杯并使之流入反應(yīng)室，立即將玻塞蓋緊，并進(jìn)行水封。夾緊螺旋夾，開(kāi)始蒸餾。蒸餾10min后移動(dòng)蒸餾液就收瓶。盡快以硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定至終點(diǎn)，如用A混合知識(shí)也，中間顏色為灰藍(lán)色；如用B混合指示液，終點(diǎn)顏色為淺灰紅色。同時(shí)做試劑空白。

（2）自動(dòng)凱氏定氮儀

稱取充分混勻的固體試樣0.2g--2g、半固體樣品試樣2g--5g或液體試樣10g--25g（相當(dāng)于30mg--40mg氮），精確至0.001g，至消化管中，再加入0.4g硫酸銅、6g硫酸鉀及20ml硫酸用于消化爐進(jìn)行消化。當(dāng)消化爐溫度達(dá)到420℃之后，繼續(xù)消化1h，此時(shí)消化管中的液體呈綠色透明狀，取出冷卻后加入50ml水，于自動(dòng)凱氏定氮儀（使用前氫氧化鈉溶液，鹽酸或硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液以及含有混合指示劑A或B的硼酸溶液）上實(shí)現(xiàn)自動(dòng)加液、蒸餾、滴定和記錄滴定數(shù)據(jù)的過(guò)程。

四、分析結(jié)果及表述

五、精密度要求

在重復(fù)條件下或得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算數(shù)平均數(shù)的10%。

一、實(shí)驗(yàn)原理

食品中的蛋白質(zhì)在催化加熱條件下被分解，分解產(chǎn)生的按與硫酸結(jié)合生成硫酸銨，在pH4.8的乙酸鈉-乙酸緩沖溶液中與乙酰丙酮和甲醛反應(yīng)生成黃色的3,5-二乙酰-2，6-二甲基-1,4-二氫化吡啶化合物。在波長(zhǎng)400nm下測(cè)定吸光度值，與標(biāo)準(zhǔn)錫類比較定量，結(jié)果乘以換算系數(shù)，即為蛋白質(zhì)含量。

二、分析步驟

1.試樣的消解：混勻樣品加入定氮瓶中，加入0.1g硫酸銅和4g硫酸鉀以及5ml硫酸，緩慢加熱待全部碳化后進(jìn)行定容操作。

2.試樣溶液的制備：吸取試樣或?qū)嶋H空白消化液與容量瓶?jī)?nèi)，搖勻加入氫氧化鈉進(jìn)行中和，滴入乙酸溶液，并加水稀釋。

3.繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：吸取氨氮標(biāo)準(zhǔn)使用溶液與10ml比色管，加入4.0ml乙酸鈉-乙酸緩沖溶液及4.0ml顯色劑，稀釋混勻，水域加熱15min，冷卻至室溫后根據(jù)吸光度值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

一、實(shí)驗(yàn)原理

試樣在900℃---1200℃高溫下燃燒，燃燒過(guò)程中產(chǎn)生混合氣體，其中的碳、硫等干擾氣體和鹽類被吸收管吸收，氮氧化合物唄全部還原成氮?dú)猓纬傻牡獨(dú)鈿饬魍ㄟ^(guò)熱導(dǎo)檢測(cè)器（TCD)進(jìn)行檢測(cè)。

二、分析步驟

按照儀器說(shuō)明書(shū)要求城區(qū)0.1g--1.0g充分混勻的試樣（精確度至0.0001g），用錫箔包裹后置于樣品盤(pán)上。試樣進(jìn)入燃燒反應(yīng)爐（900℃--1200℃）后，在純高氧（≥99.99%）中充分燃燒。燃燒爐中的產(chǎn)物（NOx）被載氣二氧化碳或氦氣運(yùn)送至還原爐（800℃）中，經(jīng)還原聲稱氦氣后檢測(cè)其含量。

注： 本方法第一法當(dāng)稱樣量為5.0g時(shí)，檢出限為8mg/100g。

        本方法第二法當(dāng)稱樣量為5.0g時(shí)，檢出限為0.1mg/100g