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牛初乳是指母牛分娩后5 d內分泌的乳汁,由于有苦澀味,加熱易凝固等特點,過擊一般不作原料乳應用而喂?;虮粭壷?。近年來,牛初乳的營養(yǎng)保健作用日益受到重視。大量研究表明,牛初乳具有很高的營養(yǎng)價值,含有豐富的生物活性物質,具有調節(jié)人體代謝,提高機體免疫力和抗感染的功能 但有關其抗衰老作用的系統研究報道很少。我們參照“保健食品的功能學評價程序和檢驗方法”研究了牛初乳粉對雌性小鼠部分臟器組織抗氧化酶活力、過氧化脂質含量及對果蠅壽命的影響,期探索牛初乳粉的抗衰老作用。
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1 材料與方法
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1.1 材料--本文來自益生康健網(yeecare.com)
1.1.1 牛初乳粉由烏魯木齊奶業(yè)研究所提供。它是該所采用冷凍干燥和輻照滅菌等方法制成的牛初乳制劑。--本文來自益生康健網(yeecare.com)
1.1.2 美國野生型黑腹果蠅由華西醫(yī)科大學營養(yǎng)與食品衛(wèi)生學教研室提供
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1.1.3 昆明種雌性小鼠由新疆醫(yī)學動物實驗中心提供,13~1s月齡。
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1.1.4 小鼠飼料參照AOAC配方配制“、:蛋白質10.O(酪蛋白)、植物油8.0 、混合鹽5.0%、混合維生素1 0 、纖維素(瓊脂)1.0 、淀粉75.O
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1.1.5 果蠅基礎飼料 玉米粉10.0 、紅糖5.O 、瓊指1.5 苯甲酸0.3 、干酵母粉1.0 、水82.2 。
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1.2 試劑與儀器
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1.2.1 試劑焦性沒食子酸(遵義市第二化工廠)、硫代巴比妥酸(上海酵母廠)、牛血清白蛋白(上海長陽生化制藥廠)。二甲腫酸鈉(Nacalai tesque inc)、四乙氧基丙烷(FIuka)、5,5一二硫對一二硝基苯甲酸(Fluka)。
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1.2.2 儀器721一分光光度計(上海第三分析儀器廠)、勻漿器、離心機、恒溫水浴箱、恒溫箱、干燥箱、電子天平、培養(yǎng)管。
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1.3 方法
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1.3.1 小鼠部分臟器組織抗氧化酶活力和過氧化脂質含量測定
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1.3.1.1 分組及喂養(yǎng)方法將小鼠隨機分為3個實驗組和1個對照組,試驗組小鼠飲用蒸餾水配制的牛韌乳粉乳液(濃度分別為9.0 g/L、45.0 g,L和225.0 g/L),對照組小鼠飲用蒸餾水,各組小鼠均食用AOAC飼料,喂養(yǎng)30 d。1 3.1.2 血樣稀釋液制備取鼠血10m 加入1 ml雙蒸水中,充分振搖,使之全部溶血測定。
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1.3.1.3 腎、肝、心肌組織勻漿制備剪取一定量的所需臟器,稱重,剪碎,至玻璃勻漿器中,加入冷生理鹽水,打成勻漿(10 ,w/V),以3 000 r/rain離心30min,取上清液測定。
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1.3.1.4 腎、肝、心肌組織超氧化物歧化酶(SOD)活力測定采用酃苯三酚自氧化法。組織蛋白質含量測定采用考馬斯亮藍法。
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1.3.1.5 腎、肝、全血各胱甘肽過氧化物酶(GSH Px)活力測定采用DTNB直接法
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1.3 1.6 腎、肝、心肌組織丙二醛(MDA)含量測定采用硫代巴比妥酸比色法
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1.3.2 果蠅壽命試驗收集12 h內羽化的果蠅,用乙醚麻醉后,區(qū)分雌雄。將果蠅隨機分成3個劑量組和1個對照組,各劑量組飼料含受試物濃度分別為0.2 、1.O 和5.0 每組雌雄果蠅各40~50只。培養(yǎng)管規(guī)格為3 cmX]3 ct33.,每只管內培養(yǎng)基厚度為0.5~1.0cm,用雙層無菌紗布封口。果蠅分組1w后給予受試物。培養(yǎng)管平放于溫度25士1℃、相對濕度62 的恒溫箱內,每4 d更換1次培養(yǎng)基,每天定時統計果蠅死亡數目,直到全部死亡。培養(yǎng)基牯住等因素造成的死亡不計算在內。規(guī)定每個果蠅生存時間的代數和除以果蠅數目即為該組平均壽命;前半數果蠅存活天數的均值為半數死亡期}每組雖后死亡的10只果蠅存活天數的平均數為該組的最高壽命。
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2 結果
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2.1 牛初乳粉對小g,Cgp~抗氧化酶活性和過氧化脂質含量的影響
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2.1.1 牛初乳粉對小鼠腎、肝、心肌組織SOD活力的影響。
可見,中、高劑量組小鼠腎、心肌組織SOD活力高于對照組小鼠,差別有顯著性;各劑量組小鼠肝組織中SOD活力有增加的趨勢,和對照組比較差別無顯著性。
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2.1.2 牛初乳粉對小鼠腎、肝、壘血GSH Px活力的影響
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可見:高劑量組小鼠腎、肝和各劑量組小鼠壘血GSH Px活力高于對照組,差別均有顯著統計學意義;中、低劑量組小鼠腎、肝組織中GSH-Px活力與對照組比較,差別無顯著性。
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2.1.3 牛韌乳粉對小鼠腎、肝、心肌組MDA形成的影響
中、高劑量組小鼠肝及高劑量組小鼠心肌組織中MDA含量低于對照組,差別具有顯著性;各劑量組小鼠腎組織中MDA含量與對照組比較,差別無顯著性。
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2.2 牛初乳粉對果蠅壽命的影響
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2.2.1 牛初乳粉對果蠅半數死亡期的影響。
可見;雌性果蠅半數死亡期延長的幅度為34.8 ~83.2 ,雄性果蠅半數死亡期延長的幅度為4 6 ~83.9 。除0.2 組雄性果蠅外,其余各組雌雄果蠅半數死亡期與對照組比較,差別均有顯著性。
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2.2.2 牛初乳粉對果蠅平均壽命的影響。
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可見:雌性果蠅平均壽命延長幅度為17.7 ~40.1 ,雄性果蠅平均壽命延長幅度為13.7 ~30.7%。
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2.2.3 牛初乳粉對果蠅最高壽命的影響。
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牛初乳粉延長了雌性果蠅的最高壽命,幅度為3.5 ~8 1 ,中、高劑量組與對照組比較,差別有顯著性;各劑量組雄性果蠅最高壽命與對E 組比較,差別無顯著性。
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3 討論
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自由基是一類具有高度化學反應活性的含氧基團,主要指超氧陰離子•07和氫氧自由基•OH,它們是需氧生物體內代謝正常產物,在機體內具有殺菌和參與前列腺素合成等積塤作用。在正常情況下,機體代謝不斷產生自由基,同時又不斷被機體存在的酶促和非酶促系統清除。隨著增齡,機體清除自由基的能力減弱,過剩的自由基睫組織細胞生物大分子的化學結構發(fā)生破壞性改變,組織器官的機能逐步發(fā)生紊亂,機體逐漸趨于衰老。MDA是細胞膜脂質過氧化的終產物之~,溯定其含量可間接估計脂質過氧化的程度,它能與蛋白質發(fā)生交聯,產生脂褐質,此物是老年斑的主要成份 MDA含量的增加除了與上面提到的自由基生成異常有關外,還可能是由于機體瞻質過氧化保護系統的抗氧化能力降低所致 本實驗觀察到喂高劑量牛初乳的小鼠肝、心肌組織MDA含量明顯低于對照組,表明牛初乳扮可以提高小鼠機體的抗氧化能力,降低MDA含量。
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生物體內存在多種防御自由基損傷的抗氧化酶類,SOD和GSH Px是比較重要的兩種:SOD能催化•0f生成H 0 ,以清除•O 對細胞的毒害作用。GSH-Px是帆體存在的一種含酉清除自由基的酶系統,可將 O 分解,阻斷脂質過氧化鏈鎖反應,它是反映機體抗氧化能力的重要因素 本研究結果表明,牛初乳粉中高劑量組小鼠腎、心肌組織SO D活力和高劑量組小鼠腎、肝、全血GSH-Px活力均明顯高于對照組小鼠,提示牛初乳粉可以通過提高機體抗氧化酶的生物合成而增加活力束抑制機體的脂質過氧化反應。
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周之輝等用隨機雙盲對照法在老年人群中服用牛乳提取物(BCE)3個月.觀察抗衰老作用。結果表明,BCE能提高老年人體內總超氧化物岐化酶(SOD)和錳一超氧化物岐化酶(Mn SOD)活力,降低脂質過氧化物含量。馬寧 、等用牛初乳制劑喂養(yǎng)_犧尿病大鼠15 d后,紅細胞SOD活力明顯高r}}通飲食組小鼠,而MDA含量則降低;葉惟冷吼等給嚴重燙傷人鼠服l啊牛初乳脂質營養(yǎng)液25 d,顯著提高了太鼠體內脂溶性維生索、3_胡蘿l、素和SOD的水平、降低了LPO 的含量:配喝牛初乳具有機自rh基損傷的作用。本研究結果與上述報道的結果具響一致性。
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從本文結果可見,牛初乳粉延長了雌雄果蠅的半數死亡期和平均壽命以盟雌性果蠅的最高壽命。在抗衰老藥物的評定標準方面有兩種不同意見:一些學者認為能延長生物平均壽命的藥物屬抗衰老藥物,另一些學者則認為只有能延長生物齲高壽命的藥物屬抗衰老藥物。葉恩賜 等認為半數死亡天數町代替千均壽命或是高壽命作為果蠅壽命試驗的指標。從果蠅壽命試驗的整體結果來看,牛初乳粉延長了果蠅的壽命。牛初乳粉對果蠅壽命的影響如同對小鼠體內抗氧化酶和過氧化脂廄的影響一樣,總的趨勢都是高濃度優(yōu)于中、低濃度。并且在延長黑腹果蠅半數死亡期、平均壽命及最高壽命方面表現出性別上的差異,即對雌性果蠅效果優(yōu)于雄性果蠅;這種差異是什么因素造成的尚有待研究。
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