蓖麻毒素的分離與提純近年來,從蓖麻中提取分離蓖麻毒素又是一個(gè)新的研究熱點(diǎn)。首先,是因?yàn)楸吐槎舅赜泻芎玫乃幱脙r(jià)值,如用于醫(yī)藥、農(nóng)藥,特別是用于抗腫瘤的靶向藥物。其次,在檢測中制備標(biāo)準(zhǔn)樣品是必備的。前人在研究蓖麻毒素的分離與提純方法時(shí)，提出了不同的分離與提純方法。溫燕梅等在“蓖麻不同部位殺蟲活性成分蓖麻堿的提取及含量”一文中提出了用微波輔助提取蓖麻不同部位的蓖麻堿。蓖麻的提取 蓖麻不同部位在鼓風(fēng)干燥箱 50 ℃下烘至恒重，粉碎，用乙醚回流提取 2 h，去除其中的油脂和色素，自然晾干備用。 按照參考文獻(xiàn)[5]方法，稱取 30 g，以料液質(zhì)量比 1∶20加入水，在微波爐以中高火作用 15 min，趁熱過濾，將濾渣重復(fù)上述步驟再提取 1 次。 將兩次的粗提取液合并，攪拌均勻，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，然后用鼓風(fēng)干燥箱于 70 ℃下烘干成膏狀，用索氏提取器加入乙醇回流提取 2 h 并濃縮至30 mL 左右，讓其緩慢冷卻析出結(jié)晶。鄭成在“蓖麻堿的提取、純化、改性及其殺蟲活性研究”一文中也是用微波輔助的方法進(jìn)行提取蓖麻堿。趙丹在“蓖麻毒蛋白的提純及殺蟲效果研究”一文中提出用 Nicolson 等的方法提純毒蛋白。稱取 40.0g 脫殼蓖麻籽，120ml0.lmol/L pH7.2 磷酸緩沖液勻漿，4℃冰箱中抽提 24 小時(shí)，4000rm/min 離心 20min，小心去除表面脂肪層取上清液，上清液中加入固體NH 42SO4至 30飽和度，4 oC 冰箱過夜。4O00rm/min 離心 20min，取上清。上清液中加入固體NH 42SO4飽和度 50，4 oC冰箱保存 8h，4000rm/min 離心 20min，棄上清液。將沉淀用適量 001mol/L pH.72 磷酸緩沖液溶解，在 001mol/L pH.72 磷酸緩沖液中透析去鹽。用PEG10000 覆蓋透析袋至于 4℃冰箱中過夜，濃縮得粗提取液。選用 2*25cm 層析柱，將 Sepharose 4B 緩慢裝入層析柱中，避免產(chǎn)生氣泡和斷層，以0.01mol/LpH7.2 磷酸緩沖液平衡 12h，用核酸蛋白檢測儀檢測 28Onm 波長的吸收峰。將濃縮的粗毒液緩慢加入層析柱中，動作輕柔避免破壞膠面。使蓖麻毒素充分吸附在柱上。用 0.01mol/LpH7.2 磷酸緩沖液洗脫，核酸蛋白檢測儀檢測280nm 波長下吸收峰，直至吸光值下降至 0.1 以下。用 0.01mol/LpH7.2 磷酸緩沖液透析收集液除去半乳糖，EPG10000 適當(dāng)濃縮后，備用。用 0.01mol/LpH7.2磷酸緩沖液平衡并洗脫，蛋白檢測儀檢測 28Omn 吸光值，收集吸收峰。高寶巖在“蓖麻毒蛋白的提取及分析”一文中也是此方法提純收集毒蛋白的。而他在“蓖麻堿的提取及光譜研究”一文中是用，取上面所得蓖麻餅粕干粉 20g, 裝入索氏提取器回流料斗, 燒瓶中加入 200mL 乙醇, 水浴加熱提取 8-10h, 提取液采用減壓低溫蒸餾可回收大部分乙醇, 剩下少許樣品溶液進(jìn)行真空干燥 4h, 干燥后所剩物質(zhì)溶于 20mL 熱水中, 冷卻后用 4℃乙醚進(jìn)一步萃取以除去少量殘余的油脂, 連續(xù)萃取 3- 4 次, 所得水溶液采用低溫真空干燥箱干燥, 所得產(chǎn)物為①。用乙腈反復(fù)洗滌①, 洗滌液合并 , 真空干燥得蓖麻堿②, 進(jìn)一步精制可將②溶于乙醇, 在乙醇中重結(jié)晶。趙青余等在“蓖麻堿的分離鑒定及其含量測定方法的研究”一文中用蓖麻餅 500 g, 加水 2 000 mL, 加熱煮沸并保持微沸, 提取 3 次, 每次 2 h, 合并水提液, 減壓濃縮至粘稠膏狀, 加入氯仿回流提取 3 次, 合并氯仿提取液, 減壓濃縮至干, 用乙醚沖洗多次除去油脂后, 用無水乙醇重結(jié)晶, 得無色棱柱狀結(jié)晶 I。此結(jié)晶就是蓖麻堿。張海悅在“蓖麻堿的提取純化及結(jié)構(gòu)分析”一文用的方法與上述相同，就是溶劑的順序和選擇及溫度有一點(diǎn)點(diǎn)區(qū)別。王春龍?jiān)凇氨吐閴A的化學(xué)提取及其在黑大豆上的應(yīng)用”一文中用氯仿、乙醇、甲醇三種不同化學(xué)溶劑分別從蓖麻籽殼和干燥的子葉中提取蓖麻堿。（1） 從蓖麻籽殼中提取蓖麻堿的化學(xué)提取方法 用氯仿作為溶劑進(jìn)行提取 將經(jīng)過通風(fēng)干燥過的蓖麻籽殼分別稱取 30 克、40 克、50 克，用食品粉碎機(jī)粉碎，粉碎效果達(dá)到能夠通過 100 目雙層篩布程度。加入乙醚和石油醚混合液12，固液比l4，放入超聲波儀中超聲 20 分鐘，并不斷用玻璃棒攪拌，取出后靜止停放，待上層混合液澄清時(shí)將其傾出。反復(fù)上述操作 3 次后，通過低溫干燥器進(jìn)行干燥，得到松散的蓖麻籽殼。配置濃度為 30 稀鹽酸水溶液，將稱取的蓖麻籽殼按固液比 120 分別置于所配置的稀酸溶液中進(jìn)行煎煮，煎煮時(shí)間為 2h、4h、6h，煎煮次數(shù)為 3 次。經(jīng)過 2h 煎煮后，將上述的稀酸溶液分別收集，用中速濾紙進(jìn)行過濾，然后將濾液置于分液漏斗中，倒入石油醚進(jìn)一步去除油脂、蹂質(zhì)等物質(zhì)，濾液與石油醚混合比例為12，反復(fù)操作 3 次，去除雜質(zhì)后將濾液回收，用濃氨水將溶液調(diào)為中性后，將濾液通過濃縮得到粘稠的膏狀物后稱取質(zhì)量。然后進(jìn)行第二次煎煮，煎煮時(shí)間仍為 2h，收集稀酸溶液，用中速濾紙進(jìn)行過濾，去除雜質(zhì)，濾液濃縮后稱取質(zhì)量，再進(jìn)行第三次煎煮，操作方法同上。煎煮時(shí)間 4h、6h 的方法同上。經(jīng)過上述方法即可得到蓖麻堿的粗提物，稱取從蓖麻籽殼中提取的蓖麻堿粗提物 5g，經(jīng)硅膠展拌后包于濾紙包內(nèi)，分別放入 500ml 裝有 200ml 氯仿的索式提取器內(nèi)進(jìn)行回流提取，回流時(shí)間設(shè)為 2h、4h、6h、8h、12h，回流提取后將溶液收集，通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收大部分氯仿，附著在旋轉(zhuǎn)瓶內(nèi)的淡黃色物質(zhì)為蓖麻堿生物總堿，將其轉(zhuǎn)移至容量瓶中，再次通過乙醇在超聲波儀中進(jìn)行脫色洗滌，蒸去乙醇，既得無色針狀結(jié)晶蓖麻堿生物總堿。稱取其質(zhì)量，進(jìn)行比較。用乙醇作為溶劑進(jìn)行提取 經(jīng)過上述方法即可得到蓖麻堿的粗提物，稱取蓖麻籽殼中提取的蓖麻堿粗提物 5g，經(jīng)硅膠展拌后包于濾紙包內(nèi)，分別放入50Oml 裝有 20Oml75乙醇的索式提取器內(nèi)進(jìn)行回流提取，回流時(shí)間設(shè)為2h、4h、6h、8h、12h，回流提取后將溶液收集，通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收大部分乙醇，附著在旋轉(zhuǎn)瓶內(nèi)的褐色物質(zhì)為蓖麻堿生物總堿，將其轉(zhuǎn)移至容量瓶中，再次通過乙醇在超聲波儀中進(jìn)行脫色洗滌，蒸去乙醇，既得無色針狀結(jié)晶蓖麻堿生物總堿。稱取其質(zhì)量，進(jìn)行比較。用甲醇作為溶劑進(jìn)行提取 經(jīng)過上述方法即可得到蓖麻堿的粗提物，稱取從蓖麻籽殼中提取的蓖麻堿粗提物 5g，經(jīng)硅膠展拌后包于濾紙包內(nèi)，分別放入 500ml 裝有 20Oml 甲醇的索式提取器內(nèi)進(jìn)行回流提取，回流時(shí)間設(shè)為2h、4h、6h、8h、12h，回流提取后將溶液收集，通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收大部分甲醇，附著在旋轉(zhuǎn)瓶內(nèi)的褐色物質(zhì)為蓖麻堿生物總堿，將其轉(zhuǎn)移至容量瓶中，再次通過乙醇在超聲波儀中進(jìn)行脫色洗滌，蒸去乙醇，既得無色針狀結(jié)晶蓖麻堿生物總堿。稱取其質(zhì)量，進(jìn)行比較。在蓖麻籽殼中，其結(jié)果是蓖麻總堿的提取乙醇為提取溶劑效果最佳，其次是甲醇，再次是氯仿。蓖麻子葉中也是用上述三種方法提取蓖麻堿，其結(jié)果是從蓖麻子葉粗提物中提取蓖麻總堿以乙醇為提取溶劑效果最佳，其次是甲醇，再次是氯仿。
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