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生物安全二級(jí)及以上實(shí)驗(yàn)室條件和生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室級(jí)別的個(gè)人防護(hù)，如一次性醫(yī)用防護(hù)服、護(hù)目鏡、雙層手套、醫(yī)用防護(hù)口罩（如3M公司的1860/9132醫(yī)用N95口罩，口罩必須做氣密性檢測(cè)）、防護(hù)靴套?？谡值确雷o(hù)用品的佩戴一定要正確，否則等同于無(wú)防護(hù)。三級(jí)防護(hù)的個(gè)人需保證休整時(shí)間，連續(xù)工作4個(gè)小時(shí)以上會(huì)因缺氧而導(dǎo)致乏力、頭暈等不良反應(yīng)。需正確識(shí)別高強(qiáng)度工作狀態(tài)下的身體不適與病毒感染引起的早期癥狀的區(qū)別，避免產(chǎn)生不必要的心理壓力。

中東呼吸綜合征冠狀病毒（MERS）可在呼吸道樣本、血液和糞便樣本中檢出，同科屬的新型冠狀病毒（2019-nCoV）潛在具有上述特性。目前的資料表明：經(jīng)呼吸道飛沫傳播是2019-nCoV的主要傳播途徑，亦可通過(guò)接觸傳播（如手-口途徑、糞-口途徑）。因此來(lái)自2019-nCoV感染病人的非呼吸道樣本也具有潛在的感染性，應(yīng)盡量避免暴露環(huán)節(jié)（如不開(kāi)蓋的血常規(guī)檢測(cè)模式）以及避免產(chǎn)生氣溶膠（離心后靜置）。不可避免的暴露性操作（如開(kāi)蓋等）應(yīng)在生物安全柜中進(jìn)行。由于感染者和非感染者難以區(qū)分，應(yīng)將所有樣本視為具有感染性（標(biāo)準(zhǔn)預(yù)防），在條件不允許的情況下可不設(shè)立獨(dú)立的檢測(cè)空間，但工作人員必須佩戴外科口罩或醫(yī)用防護(hù)口罩等個(gè)人防護(hù)措施，并保證環(huán)境的生物安全。對(duì)疑似病人樣本給予更高的重視，對(duì)處理后樣本、廢棄物及環(huán)境執(zhí)行更嚴(yán)格、頻繁的消毒滅菌措施（見(jiàn)下述第6條）。

可依據(jù)“國(guó)衛(wèi)辦醫(yī)函【2020】53號(hào)”文件執(zhí)行。

院內(nèi)運(yùn)輸：樣本由醫(yī)護(hù)人員采集后，放入兩層一次性密封袋內(nèi)密封，置于樣本轉(zhuǎn)運(yùn)箱后，與樣本運(yùn)送人員交接，樣本由專(zhuān)人運(yùn)送入實(shí)驗(yàn)室。樣本運(yùn)送過(guò)程中，運(yùn)送人員應(yīng)佩戴帽子、一次性外科口罩、手套、隔離衣。

院外運(yùn)輸：按照《可感染人類(lèi)的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定》（衛(wèi)生部令第45號(hào)）要求執(zhí)行。

文獻(xiàn)及指南報(bào)道，56℃ 30 min可滅活冠狀病毒，我們的初步試驗(yàn)表明，干浴（烤箱或恒溫箱）56℃ 30min或50℃ 60min的滅活方式不影響呼吸道樣本中RNA病毒的檢測(cè)（見(jiàn)圖1）。時(shí)間所限，我們對(duì)于此次新冠病毒的評(píng)估尚未完成，將在再版中更新這一內(nèi)容。

圖1 不同滅活方式對(duì)PCR檢測(cè)結(jié)果的影響

根據(jù)上述結(jié)果，并綜合其它資料，為了減少感染樣本對(duì)人和環(huán)境的潛在危害，我們初步推薦：呼吸道樣本（微生物等培養(yǎng)目的除外）先56℃干浴 60 min，靜置10 min至室溫（避免氣溶膠），然后進(jìn)行處理。

但必須強(qiáng)調(diào)的是，病毒滅活效果與其所在基質(zhì)成分有關(guān)，因?qū)嶒?yàn)條件所限，我們無(wú)法評(píng)估該方法滅活病毒的真實(shí)效果。此外，我們選擇干浴后靜置10 min是基于我們現(xiàn)有的樣本量及實(shí)驗(yàn)條件。理論上，干浴后靜置的時(shí)間越長(zhǎng)，產(chǎn)生氣溶膠的風(fēng)險(xiǎn)越小。基于此，干浴處理后的樣本仍視為具有感染性，其后續(xù)處理應(yīng)視同未滅活的樣本。

對(duì)檢測(cè)完成后的疑似病人樣本采用雙層塑料袋密封；對(duì)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生的廢液和槍頭等置于含0.5%～1%有效氯的含氯消毒液的廢液缸。上述物品經(jīng)壓力蒸汽滅菌處理。詳見(jiàn)《新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室生物安全指南》（第三版）。

依據(jù)方便（臨床采樣和檢驗(yàn)科檢測(cè)）和安全原則對(duì)項(xiàng)目組合進(jìn)行安排。2019-nCoV核酸檢測(cè)項(xiàng)目宜單獨(dú)申請(qǐng)，單獨(dú)采樣，方便檢測(cè)。其它呼吸道病毒核酸檢測(cè)項(xiàng)目（流感、腺病毒、呼吸道合胞病毒等）則可單獨(dú)和/或組合申請(qǐng)。所有呼吸道樣本均應(yīng)視為潛在的感染源，并做相應(yīng)處理和防護(hù)。更重要的是建立一套完善的有關(guān)2019-nCoV檢測(cè)的管理機(jī)制，涵蓋項(xiàng)目申請(qǐng)、檢測(cè)時(shí)限、報(bào)告時(shí)間、報(bào)告方式、對(duì)內(nèi)對(duì)外聯(lián)系，以及分析前、中、后各種環(huán)節(jié)。

對(duì)潛在含有2019-nCoV的呼吸道樣本的操作應(yīng)在生物安全柜（biosafety cabinet）中進(jìn)行，工作狀態(tài)下遵守操作規(guī)程可保證工作人員不受侵害。生物安全柜檢定合格方能使用（包括外觀和功能、潔凈度等級(jí)、垂直氣流平均風(fēng)速、工作窗口進(jìn)風(fēng)平均風(fēng)速、照度、噪音、氣流狀態(tài)）。

操作注意事項(xiàng)：

⑴風(fēng)機(jī)運(yùn)行至少5min后方可開(kāi)始操作；

⑵柜內(nèi)盡量少放物品，以免影響氣流循環(huán)；

⑶避免干擾氣流，不良行為包括手臂頻繁出入，操作者身后人員頻繁走動(dòng)，阻擋空氣格柵；

⑷在中后部操作，并不影響透過(guò)玻璃擋板觀察；

⑸柜內(nèi)不可進(jìn)行文字工作；

⑹風(fēng)機(jī)運(yùn)行至少5 min后方可關(guān)機(jī)；

⑺工作完成后、每天下班前，使用適當(dāng)消毒劑擦拭表面。

無(wú)論防護(hù)條件是否滿(mǎn)足要求，標(biāo)準(zhǔn)預(yù)防、不定期通風(fēng)和手衛(wèi)生是最重要的防護(hù)措施。

此外，必須牢記三個(gè)防控要素。

⑴人員：必須有安全意識(shí)，不能麻痹大意，以往及當(dāng)下的經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)表明安全意識(shí)越強(qiáng)，感染的幾率越小。

具體措施：

①無(wú)論是否處于工作狀態(tài)，無(wú)論是否在病房或是其它環(huán)境，佩戴口罩，不到萬(wàn)不得已的情況，比如吃飯、喝水，都不要摘下，如果需要摘下口罩，強(qiáng)烈建議先進(jìn)行手消毒再摘下口罩；

②醫(yī)務(wù)人員盡量避免集體就餐，最好是分次就餐，減少小范圍群體性暴露；

③直接面對(duì)病人的窗口工作人員和接觸呼吸道樣本的相關(guān)人員必須嚴(yán)格執(zhí)行生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室級(jí)別的個(gè)人防護(hù)。

⑵操作：必須視所有樣本為潛在感染源，實(shí)行標(biāo)準(zhǔn)預(yù)防措施。對(duì)高危的呼吸道樣本（檢測(cè)核酸或抗原）在送達(dá)實(shí)驗(yàn)室之前滅活（見(jiàn)上述方法和圖1），可最大程度減少生物危害。處理呼吸道樣本必須在生物安全柜中進(jìn)行，操作過(guò)程輕柔避免飛濺。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生的污物必須高壓滅菌后才能運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室。

⑶環(huán)境：桌面、儀器、固定設(shè)施及地面至少每日采用0.5%～1%含氯消毒液擦拭。含氯消毒液（注意，洗必泰[氯己定]不能有效滅活病毒）、75%的酒精等消毒物品應(yīng)隨手可及，便于隨時(shí)消毒。PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)束后應(yīng)紫外照射房間及相關(guān)設(shè)施以消除核酸污染，同時(shí)殺滅病毒。紫外消毒時(shí)必須保證門(mén)窗緊閉。

呼吸道樣本（包括咽拭子、鼻咽拭子、鼻咽抽取物、痰液、呼吸道抽取物、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液等）均可。為了減少污染流程可相對(duì)固定一種樣本類(lèi)型及操作簡(jiǎn)便的方法，以便更好實(shí)施（除特殊情況下需采集特定的樣本）。對(duì)自動(dòng)核酸提取方法而言，采用帶病毒保存液的咽拭子或鼻咽拭子可避免開(kāi)蓋添加生理鹽水的步驟。采樣人員必須嚴(yán)格執(zhí)行生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室級(jí)別的個(gè)人防護(hù)。樣本采集質(zhì)量嚴(yán)重影響檢測(cè)結(jié)果，需對(duì)采樣人員進(jìn)行專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)，如咽拭子采集應(yīng)擦拭兩側(cè)腭弓和咽、扁桃體的分泌物。

目前RNA提取方法眾多，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)選擇簡(jiǎn)便、高效的核酸提取方法。我們當(dāng)前使用的蛋白酶K消化，磁珠分離的全自動(dòng)核酸提取方法證明有效。由于2019-nCoV感染是突發(fā)事件，各種試劑通過(guò)快審進(jìn)入臨床最大程度解決了臨床急需，但當(dāng)前存在以下兩方面的問(wèn)題給結(jié)果的報(bào)告和解釋造成了較大的困擾。

⑴不同試劑盒陽(yáng)性檢出率存在較大差別；

⑵一部分試劑盒檢測(cè)ORF1ab和E及N基因，另一部分試劑盒只檢測(cè)ORF1ab和N基因，部分試劑的單陽(yáng)性結(jié)果占陽(yáng)性結(jié)果的20%以上。

另一個(gè)值得關(guān)注的問(wèn)題是試劑的選擇還需與實(shí)驗(yàn)室的硬件設(shè)備相匹配，如有的儀器對(duì)PCR擴(kuò)增管有特別要求（100μL或者200μL）等。

基于上述問(wèn)題，我們建議以陽(yáng)性、可疑和陰性三種結(jié)果進(jìn)行報(bào)告，對(duì)單陽(yáng)性的結(jié)果及可疑結(jié)果建議采用不同試劑盒進(jìn)行復(fù)核，并進(jìn)行備注（圖2）。部分地區(qū)可將陽(yáng)性和可疑的樣本送CDC確證。

圖2 同濟(jì)檢驗(yàn)科2019-nCoV核酸檢測(cè)報(bào)告模板

參考文獻(xiàn)：

1. 國(guó)家衛(wèi)生健康委辦公廳關(guān)于醫(yī)療機(jī)構(gòu)開(kāi)展新型冠狀病毒核酸檢測(cè)有關(guān)要求的通知.國(guó)衛(wèi)辦醫(yī)函【2020】53號(hào)

2. 關(guān)于印發(fā)新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行第四版）的通知. 國(guó)衛(wèi)辦醫(yī)函【2020】77號(hào)

3. 新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室生物安全指南（第三版）

4. Real-Time RT-PCR Panel for Detection 2019-Novel Coronavirus.

https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/lab/rt-pcr-detection-instructions.html

5.https://mp.weixin.qq.com/s/uWiOOpfxQH4c77rAFXfNgQ