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今天，由國內(nèi)外二十家實驗室負(fù)責(zé)人聯(lián)名撰寫的一篇名為“Questions about NgAgo”的學(xué)術(shù)論文在Protein Cell雜志上發(fā)表（Burgess et al., 2016），首次公開以公開發(fā)表學(xué)術(shù)論文的形式提出無法重復(fù)韓春雨的NgAgo實驗，將針對韓春雨的NgAgo技術(shù)的爭論推入了一個新的階段。這二十家實驗室都來自于中外知名的大學(xué)和研究所，在基因編輯領(lǐng)域具有相關(guān)經(jīng)驗和技術(shù)。這些作者中包括了多名前一段時間實名發(fā)聲無法重復(fù)韓春雨實驗結(jié)果的科學(xué)家, 在這篇學(xué)術(shù)論文中，他們將自己重復(fù)韓春雨論文失敗的實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行了發(fā)表。因為實驗結(jié)果的整理整合和學(xué)術(shù)論文的發(fā)表需要較長的時間，學(xué)術(shù)刊物上面發(fā)表的學(xué)術(shù)質(zhì)疑文章往往會晚于學(xué)術(shù)同行之間交流以及在其他平臺上的質(zhì)疑。但通過學(xué)術(shù)期刊發(fā)表無法重復(fù)的實驗數(shù)據(jù)，無疑是最為學(xué)術(shù)的質(zhì)疑方式。這些數(shù)據(jù)表明這些實驗室在按照韓春雨描述的實驗和檢測方法進(jìn)行重復(fù)實驗的過程中，無法檢測到NgAgo介導(dǎo)的基因編輯的產(chǎn)生。

盡管韓春雨提出細(xì)胞污染影響實驗結(jié)果等可能性，但國內(nèi)外二十家具有基因編輯經(jīng)驗的實驗室都發(fā)生同樣問題導(dǎo)致陰性結(jié)果的可能性極低。據(jù)筆者了解，這些實驗室都是進(jìn)行了多次實驗確定了一致的陰性實驗結(jié)果后才選擇發(fā)表這些數(shù)據(jù)的。因此韓春雨需要明確回應(yīng)質(zhì)疑，用自己的原始實驗數(shù)據(jù)以及第三方重復(fù)的證據(jù)和實驗細(xì)節(jié)來厘清科學(xué)的事實真相。

A圖表明NgAgo和dDNA所產(chǎn)生的GFP降低效應(yīng)只是來自于gDNA而無關(guān)乎NgAgo的表達(dá)與否，因為將PUC19質(zhì)粒（不表達(dá)NgAgo的質(zhì)粒）和gDNA共同表達(dá)也可以達(dá)到同等水平的GFP表達(dá)抑制。作為陽性對照的CRISPR系統(tǒng)可以有效的降低GFP從質(zhì)粒上表達(dá)的強(qiáng)度。B圖顯示經(jīng)過CRISPR編輯的質(zhì)粒發(fā)生了突變，可以被Surveyor assay（基因編輯領(lǐng)域通用的檢測靶向突變的方法）檢測。而NgAgo和gDNA處理過的樣品中在質(zhì)粒上則檢測不到任何的突變。

多家實驗室按照韓春雨NBT論文中的方法，使用其發(fā)表的gDNA（圖中標(biāo)記為不同的編號，與韓的文章對應(yīng)），均無法檢測到定點的基因編輯的發(fā)生。

為了大家能夠更好的了解這一爭議的相關(guān)概念，特介紹以下內(nèi)容。

什么是基因

基因是遺傳信息的功能單元，其功能信息編碼于脫氧核糖核酸（DNA）的特定堿基序列之中。除了基因以外，大量的DNA序列也編碼調(diào)控基因表達(dá)的信息。

基因的DNA序列會通過RNA介質(zhì)編碼蛋白質(zhì)的合成，而蛋白質(zhì)執(zhí)行細(xì)胞中的主要生物學(xué)功能。因此基因的信息是生命最重要的根本信息。

什么是基因編輯技術(shù)

基因編輯技術(shù)是多種不同技術(shù)的統(tǒng)稱，都是指通過設(shè)計不同的蛋白實現(xiàn)針對特定基因或基因組位點的精確修改。通過修改生命基本信息的編碼（DNA序列），基因編輯技術(shù)可以改變不同細(xì)胞或生命體的性狀，并且編輯后的基因可以遺傳到后代?；蚓庉嫾夹g(shù)威力巨大，其開發(fā)和應(yīng)用不僅為科學(xué)研究，也為疾病治療、農(nóng)作物改良等關(guān)系到國計民生的重要應(yīng)用領(lǐng)域提供了極其有力的工具。

韓春雨的論文講了什么

今年5月份，河北科技大學(xué)的韓春雨副教授及其研究團(tuán)隊在生物技術(shù)的頂尖期刊Nature Biotechnology上發(fā)表了一篇科學(xué)論文，介紹了他們建立的一種叫做NgAgo的新型基因編輯技術(shù)(Gao et al., 2016)。基于2014年一篇Nature論文的啟發(fā)(Swarts et al., 2014)，他們在微生物中發(fā)現(xiàn)了一種蛋白（NgAgo）可以作為高效的基因編輯工具。在幾種不同的人類細(xì)胞系中，根據(jù)韓春雨團(tuán)隊的論文描述，通過單鏈的DNA分子介導(dǎo)，NgAgo可以定位到特定的基因組位點，并進(jìn)行基因組DNA序列的編輯。

什么是學(xué)術(shù)論文的重復(fù)

根據(jù)文章中的數(shù)據(jù)，NgAgo的基因編輯效率可以媲美目前最為高效的CRISPR技術(shù)，并且在某些方面還具有獨特的優(yōu)勢，一時間引發(fā)了學(xué)術(shù)界乃至社會大眾的贊揚(yáng)和關(guān)注。

當(dāng)一個重要的研究成果被發(fā)表后，意味了這篇論文里面的內(nèi)容已經(jīng)成為了大眾所共有的知識（public knowledge），也成為了未來這一方向科學(xué)研究的基礎(chǔ)，因此很多科研同行都會對其進(jìn)行重復(fù)并以此為基礎(chǔ)進(jìn)行下一步的工作?？茖W(xué)的發(fā)展就是靠著無數(shù)的科學(xué)家不斷的根據(jù)彼此的最新進(jìn)展一起推動的。所以當(dāng)一篇論文發(fā)表后，其主要結(jié)論可以被其他科學(xué)家重復(fù)并進(jìn)一步發(fā)展，是科學(xué)發(fā)展的基礎(chǔ)。這也是為什么科研論文的可重復(fù)性是至關(guān)重要的。

然而至今已經(jīng)有近半年的時間，國內(nèi)外的同行對于NgAgo基因編輯的可重復(fù)性產(chǎn)生了大量的質(zhì)疑，至今沒有得到一個清楚的結(jié)論。隨著前幾天在Cell Research上面發(fā)表的利用NgAgo在斑馬魚中進(jìn)行基因敲降的研究（Qi et al., 2016)，以及今天在Protein Cell在線發(fā)表的質(zhì)疑文章（Burgess et al., 2016），學(xué)術(shù)界的同行將其利用NgAgo嘗試進(jìn)行基因編輯而未能得到預(yù)期結(jié)果的數(shù)據(jù)發(fā)表在學(xué)術(shù)刊物上，為厘清NgAgo技術(shù)的可重復(fù)性問題提供了實驗數(shù)據(jù)。

科學(xué)實驗的重復(fù)，是指具有同等實驗條件的實驗室使用與論文中描述一樣的樣品、試劑、嚴(yán)格按照論文中的實驗流程進(jìn)行實驗，以期達(dá)到和論文中一樣的實驗結(jié)果。因此Cell Research上面發(fā)表的利用NgAgo在斑馬魚中進(jìn)行基因敲降的研究并不屬于對于韓春雨論文的重復(fù)工作，而屬于對于該技術(shù)的其他應(yīng)用（但未能在斑馬魚中檢測到NgAgo的基因編輯能力）。而在Protein Cell發(fā)表的這篇論文（Burgess et al., 2016）則屬于嚴(yán)格的重復(fù)實驗。這些重復(fù)實驗的數(shù)據(jù)表明，這二十幾個實驗室均無法重復(fù)出韓春雨論文中的結(jié)果，因此就在學(xué)術(shù)的平臺上要求韓春雨給予一個清楚詳細(xì)的答復(fù)。

學(xué)術(shù)論文、專利以及商業(yè)秘密

簡單的說，學(xué)術(shù)論文是由科研工作者發(fā)表在學(xué)術(shù)刊物（有些情況也包括學(xué)術(shù)會議）的詳細(xì)描述其科學(xué)發(fā)現(xiàn)和進(jìn)展的文章。雖然不同刊物的形式和具體要求各有不同，但其基本功能都是一樣的，即通過論文的發(fā)表，將自己的研究成果與全世界分享，從而推動整個科學(xué)的發(fā)展。科學(xué)家發(fā)表學(xué)術(shù)論文，就是為了其他的科學(xué)家可以認(rèn)同并獲益于自己建立的理論，使用自己發(fā)明的實驗方法。因此一般來說，科學(xué)家最在意的是自己的論文發(fā)表后是不是能夠被同行接受，其結(jié)果是不是能夠被同行重復(fù)。只有當(dāng)一個科學(xué)家的工作不斷的被本領(lǐng)域接受，其發(fā)明的方法被更多的人重復(fù)、應(yīng)用、并進(jìn)一步發(fā)展，這個科學(xué)家的學(xué)術(shù)聲譽(yù)才會不斷得到提升。一篇論文的發(fā)表只需要經(jīng)過審稿人（一般是三位）和編輯的認(rèn)可，不是對于里面描述結(jié)果的絕對確認(rèn)。學(xué)術(shù)論文發(fā)表后，才是真正對于這個工作的檢驗的開始。

有很多知識和技術(shù)具有巨大的商業(yè)價值，個人、科研機(jī)構(gòu)或企業(yè)可以選擇申請專利，來保護(hù)從這些研究成果中獲利的權(quán)利。專利制度其實是為了鼓勵大家分享自己所掌握的知識（尤其是具有商業(yè)價值的）所建立的一套體系。專利發(fā)明人將自己的研究成果詳細(xì)的在專利申請中進(jìn)行描述（很多時候比學(xué)術(shù)論文還要詳細(xì)），并將其分享給整個社會。與學(xué)術(shù)論文的根本區(qū)別在于，如果另外一方想要利用這一技術(shù)或知識來創(chuàng)造商業(yè)利益，則需要獲得專利所有者的授權(quán)并支付相應(yīng)報酬。因此，無論是專利還是學(xué)術(shù)論文，都是知識和技術(shù)共享的途徑。在很多情況下，一個科研團(tuán)隊建立了具有商業(yè)價值的技術(shù)，會選擇先進(jìn)行專利申請，再發(fā)表學(xué)術(shù)論文，這樣其成果可以被科研同行無償使用以推動科學(xué)的發(fā)展，建立學(xué)術(shù)聲譽(yù)，同時對于該技術(shù)產(chǎn)業(yè)化有興趣的公司則需要獲得專利的授權(quán)。

出于各種不同的考慮，很多企業(yè)或研究團(tuán)隊也會選擇不分享特定的技術(shù)和知識，而是自己應(yīng)用以獲得相關(guān)的商業(yè)利益，這些就可以作為商業(yè)秘密。為了其保密性，這類知識既不會發(fā)表科研論文，也不會申請相關(guān)專利。

回到韓春雨論文的可重復(fù)性問題

韓春雨團(tuán)隊的NgAgo的技術(shù)不僅發(fā)表了科研論文，也在發(fā)表前進(jìn)行了專利的申請，并不屬于商業(yè)秘密的范疇，因此有義務(wù)將所有的技術(shù)細(xì)節(jié)詳細(xì)的描述清楚，從而確保其他同行可以重復(fù)其工作，并進(jìn)行下一步的發(fā)展。按照韓之前的說法，科學(xué)的爭議需要通過學(xué)術(shù)刊物的平臺來討論，那么這一篇相關(guān)于NgAgo重復(fù)失敗的學(xué)術(shù)論文已經(jīng)將同行們無法重復(fù)的科研數(shù)據(jù)進(jìn)行了發(fā)表，下面就需要韓春雨進(jìn)行正面的回應(yīng)了。我們拭目以待。

Burgess S, Cheng L, Gu F, Huang J, Huang Z, Lin S, Li J, Li W, Qin W, Sun Y, Songyang Z, Wei W, Wu Q, Wang H, Wang X, Xiong J, Xi J, Yang H, Zhou B, Zhang B. Questions about NgAgo. Protein Cell, DOI 10.1007/s13238-016-0343-9 (2016)

Gao, F., Shen, X. Z., Jiang, F., Wu, Y. & Han, C. DNA-guided genome editing using the Natronobacterium gregoryi Argonaute. Nat Biotechnol, doi:10.1038/nbt.3547 (2016).

Swarts, D. C. et al. DNA-guided DNA interference by a prokaryotic Argonaute. Nature, 507, 258-261, doi:10.1038/nature12971 (2014).

Qi J, Dong Z, Shi Y, Wang X, Qin Y, Wang Y, Liu D. NgAgo-based fabp11a gene knockdown causes eye development defects in zebrafish. Cell research, doi:10.1038/cr.2016.134(2016)

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