如何抓出“艾滋病病毒”
作者：周宗（上海中冶醫(yī)院）
審核：吳洪巧 (山東大學(xué)附屬濟南市中心醫(yī)院)
SIFIC官微科普團隊微生物及檢驗小組
今年12月1日是第29個世界艾滋病日。截至2015年底，中國發(fā)現(xiàn)現(xiàn)存活的艾滋病病毒感染者共計57.7萬人，經(jīng)測算估計全國人群總感染率0.06%，即每1萬人中有6人“染艾”，仍有32.1%感染者未被發(fā)現(xiàn)。
艾滋病患者早期無異常癥狀，常常被人們所忽略。往往發(fā)現(xiàn)癥狀的時候，艾滋病就已經(jīng)到了晚期，治療已經(jīng)極為不容易。所以，在感染早期及時的進行艾滋病檢測，是一項很重要的工作。
那么如何發(fā)現(xiàn)艾滋病感染者，艾滋病的檢測方法有哪些呢？
艾滋病診斷
一、急性期
診斷標(biāo)準(zhǔn)：病人近期內(nèi)有流行病學(xué)史和臨床表現(xiàn)，結(jié)合實驗室HIV抗體由陰性轉(zhuǎn)為陽性即可診斷，或僅實驗室檢查HIV抗體由陰性轉(zhuǎn)為陽性即可診斷。
80%左右HIV感染者感染后6周初篩試驗可檢出抗體，幾乎100%感染者12周后可檢出抗體，只有極少數(shù)患者在感染后3個月內(nèi)或6個月后才檢出。
急性期通常發(fā)生在初次0?部分感染者出現(xiàn)HIV病毒血癥和免疫系統(tǒng)急性損傷所產(chǎn)生的臨床癥狀。大多數(shù)患者臨床癥狀輕微，持續(xù)1～3周后緩解。臨床表現(xiàn)以發(fā)熱最為常見，可伴有咽痛、盜汗、惡心、嘔吐、腹瀉、皮疹、關(guān)節(jié)疼痛、淋巴結(jié)腫大及神經(jīng)系統(tǒng)癥狀。
二、無癥狀期
診斷標(biāo)準(zhǔn)：有流行病學(xué)史，結(jié)合HIV抗體陽性即可診斷，或僅實驗室檢查HIV抗體陽性即可診斷。
可從急性期進入無癥狀期，或無明顯的急性期癥狀而直接進入此期。此期持續(xù)時間一般為6～8年。其時間長短與感染病毒的數(shù)量和型別、感染途徑、機體免疫狀況的個體差異、營養(yǎng)條件及生活習(xí)慣等因素有關(guān)。
三、艾滋病期
診斷標(biāo)準(zhǔn)：有流行病學(xué)史、實驗室檢查HIV抗體陽性，加下述各項中的任何一項，即可診斷?1?，即可診斷為艾滋病?；蛘逪IV抗體陽性，而CD4＋T淋巴細胞數(shù)
?。?）原因不明的持續(xù)不規(guī)則發(fā)熱38℃以上，>1個月；
?。?）慢性腹瀉次數(shù)多于3次/日，>1個月；
?。?）6個月之內(nèi)體重下降10%以上；
?。?）反復(fù)發(fā)作的口腔白念珠菌感染；
?。?）反復(fù)發(fā)作的單純皰疹病毒感染或帶狀皰疹病毒感染；
（6）肺孢子菌肺炎（PCP）；
?。?）反復(fù)發(fā)生的細菌性肺炎；
?。?）活動性結(jié)核或非結(jié)核分枝桿菌病；
?。?）深部真菌感染；
?。?0）中樞神經(jīng)系統(tǒng)占位性病變；
?。?1）中青年人出現(xiàn)癡呆；
（12）活動性巨細胞病毒感染；
?。?3）弓形蟲腦??；
?。?4）青霉菌感染；
?。?5）反復(fù)發(fā)生的敗血癥；
?。?6）皮膚黏膜或內(nèi)臟的卡波濟肉瘤、淋巴瘤。
機體免疫功能檢查
主要是中度以上細胞免疫缺陷包括：CD4+T淋巴細胞耗竭，外周血淋巴細胞顯著減少，CD4
艾滋病檢測
一、檢測時間
艾滋病檢測的最佳檢測時間，不良性行為等高危行為后，一般需要2-4周時間就可以檢測出艾滋病HIV抗體。時間越往后，檢測的準(zhǔn)確性就越高，絕大多數(shù)被HIV感染的人，在4周后就能產(chǎn)生足夠多的抗體，這個數(shù)量能夠滿足使用目前的HIV抗體測試方法檢測出HIV陽性。如果不良性行為后3個月查的是陰性，6個月后再查，6個月的結(jié)果也是陰性就可以排除您是艾治病了。
二、檢測方法
1、抗體檢測
主要有酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）和免疫熒光試驗（IFA）。ELISA用去污劑裂解HIV或感染細胞液提取物作抗原，IFA用感染細胞涂片作抗原進行抗體檢測，如果發(fā)現(xiàn)陽性標(biāo)本應(yīng)重復(fù)一次。為防止假陽性，可做Westernblot（WB，蛋白印跡法）進一步確證。
WB法是用聚丙烯酰胺凝膠電泳將HIV蛋白進行分離，再經(jīng)傳移電泳將不同蛋白條帶轉(zhuǎn)移于硝酸纖維膜上，加入病人血清孵育后，用抗人球蛋白酶標(biāo)抗體染色，就能測出針對不同結(jié)構(gòu)蛋白抗體，如抗gp120、gp41、P24抗體，特異性較高。
快速檢測法，也稱為金標(biāo)法，也是抗體檢測的一種方法，根據(jù)免疫層析法的原理，用于HIV抗體檢測的定性檢測。
抗體通常是在感染后3～8周能夠被檢測出來。目前，大多應(yīng)用雙抗原夾心法，這種方法具有很好的靈敏性和特異性?？贵w檢測由初篩和確認試驗組成，初篩試驗呈陽性的必須進行確認試驗。酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)方法有一定的靈敏度，且操作簡單、快速，適合對大量樣品的檢測。因此，是目前臨床通用的初篩檢測方法。
國際上有3種確認試驗方法，包括免疫印跡試驗、條帶免疫試驗及免疫熒光試驗，目前以免疫印跡試驗最為常用。
2、抗體抗原檢測
酶聯(lián)免疫吸附試驗
ELISA法的基本原理是免疫反應(yīng)物通過化學(xué)或免疫學(xué)的方法形成酶結(jié)合物，酶結(jié)合物能與待檢樣品中相應(yīng)的抗原或抗體結(jié)合成為免疫復(fù)合物,然后加入酶底物,經(jīng)酶的催化或水解作用,無色底物產(chǎn)生顏色,用肉眼、分光光度計觀察結(jié)果。
免疫印跡試驗
免疫印跡試驗主要用于確認試驗，基本原理是HIV全病毒抗原經(jīng)過SDS?PAGE電泳,將分子量大小不等的蛋白帶分離開來,然后再把這些已經(jīng)分離的不同蛋白帶電轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上。將此膜切割成條狀,每一條硝酸纖維素膜上均含有經(jīng)電泳分離過的HIV病毒抗原。將待檢血清樣品用稀釋液稀釋成1/100,再把它直接加到硝酸纖維素膜上,恒溫震蕩,使其充分接觸反應(yīng),血清中若含有抗HIV抗體,就會與膜條上的抗原帶相結(jié)合。加入抗人IgG酶結(jié)合物和底物后,即可使有反應(yīng)的抗原抗體結(jié)合帶呈現(xiàn)紫褐色,根據(jù)出現(xiàn)條帶情況判定結(jié)果。有報告說，免疫印跡試驗的特異性不是很好, 有大約2%的假陽性率，但免疫印跡試驗依然是目前最常用的HIV確認試驗。
免疫熒光試驗(IFA)
基本原理為應(yīng)用H?9或HUT78培養(yǎng)細胞作為載體,用HIV感染細胞,該細胞內(nèi)就會含有HIV抗原,將HIV感染的淋巴細胞涂于玻片上,固定，制備為抗原片,加入待檢血清，待檢血清中的抗 HIV抗體與抗原結(jié)合后,再與熒光素標(biāo)記的抗人Ig結(jié)合,在熒光顯微鏡下可見到細胞內(nèi)有黃綠色熒光。
3、快速檢測
其特點是方便、快速（10分鐘出結(jié)果）、準(zhǔn)確、是篩查艾滋病患者的首選方法。
一種是血檢試紙，一種是唾液試紙。唾液檢測試紙只有一種美國艾威爾的唾液檢測試紙，正規(guī)艾滋病檢測試紙生產(chǎn)批號均可以國家食品藥物監(jiān)督管理局查詢，目前也沒有出現(xiàn)過艾滋病試紙的假貨之類的情況出現(xiàn)。
膠體金法（金標(biāo)）人類免疫缺陷病毒（HIV 1/2）抗體檢測試劑盒是應(yīng)用膠體金免疫層析技術(shù)建立的靈敏、特異、操作簡便的一步法HIV 1/2抗體定性檢測試劑。用于定性檢測人血清或血漿樣本中的HIV 1型和HIV 2型的特異性抗體，以輔助診斷HIV感染，其陽性結(jié)果需用免疫印跡法確認。
結(jié)語
艾滋病不僅僅給社會，給家庭，都帶來沉重的經(jīng)濟負擔(dān)和社會問題，要及早發(fā)現(xiàn)艾滋病，及早治療，杜絕將病毒再次傳給他人。
圖文編輯：小小牧童
審稿：高曉東 馬嘉睿
