《中醫(yī)基礎(chǔ)理論》實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)
（供中醫(yī)、骨傷、針灸專業(yè)用）
河南中醫(yī)學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論學(xué)科
《中醫(yī)基礎(chǔ)理論》實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)
供中醫(yī)、骨傷、針灸專業(yè)用
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
1、實(shí)驗(yàn)前必須預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及與實(shí)驗(yàn)有關(guān)的理論。
2、實(shí)驗(yàn)時(shí)要注意觀察動(dòng)物的性別、體重、日期、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮徒o藥的劑量與方法等，準(zhǔn)確地記錄觀察到的數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)完畢對結(jié)果分別加以整理，分析出實(shí)驗(yàn)結(jié)果，寫出結(jié)論，按時(shí)交實(shí)驗(yàn)報(bào)告。
3、必須保持實(shí)驗(yàn)室安靜，精神集中，互相合作進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
4、愛護(hù)儀器，節(jié)約藥品，動(dòng)物，水電。
5、實(shí)驗(yàn)前后須清點(diǎn)器材，藥品，損壞要登記，故意損壞要賠償。
6、實(shí)驗(yàn)室保持整潔，實(shí)驗(yàn)后將儀器，用具整理洗凈，放回原處，動(dòng)物尸體放在指定地點(diǎn)。
實(shí)驗(yàn)一 部分常規(guī)實(shí)驗(yàn)操作
[目的]
通過本實(shí)驗(yàn)，學(xué)習(xí)和掌握動(dòng)物的幾種給藥方法和常規(guī)操作方法。
[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物]
18—22g小白鼠6只（雄性）。
[實(shí)驗(yàn)器械]
OT注射器 2副
注射針頭5# 2只
注射針頭6# 2只
臺稱天平 1架
灌胃器 2只
生理鹽水
[實(shí)驗(yàn)方法]
1、小白鼠的捉持法和給藥途徑
（1）捉持法：先用右手從鼠籠中捉住鼠尾提起，放在實(shí)驗(yàn)臺上，在其向前爬行時(shí)，用左手拇指和食指抓住小白鼠兩耳和頭頸部皮膚。然后將鼠體置于左手心中，把后肢拉直，用右手無名指及小指按住尾巴和后肢，前肢可用中指固定。這樣可作注射和灌胃等操作。
注意：小白鼠一般不會咬人，但動(dòng)作要輕柔，迅速。
（2）灌胃法：以左手捉住小鼠，使腹部朝上，頸部拉直，右手持配有灌胃液的注射器，自口角插入口腔，再從舌背沿咽后壁向下進(jìn)入食道、胃。如果手法正確，灌胃器很容易進(jìn)入，若遇阻力或灌時(shí)不通暢，則表示針頭未插入胃內(nèi)，必須拔出后按上述方法重新操作。
注意：動(dòng)物要固定好，頭頸部保持正直；插入方向沿口角入，不可太猛，以免刺破食道誤入氣，造成死亡。
（3）注射法（腹腔）：左手抓小白定的方法同上，右手持注射器，取45角度將針頭從下腹部向頭刺入腹腔，抽注射器，若無回血或尿液，即可注射。
注意：針頭刺入不宜太近上腹部或太深，以免刺破內(nèi)臟；針頭與腹腔角度不宜太小，否則容易刺入皮下。
實(shí)驗(yàn)二 氣的推動(dòng)作用
[目的]
從注射人參小鼠與對照組間游泳時(shí)間的差異。以體現(xiàn)氣對機(jī)體的推動(dòng)作用。
[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物]
18—22g小白鼠6只（雄性）。
[實(shí)驗(yàn)器械]
動(dòng)物夾 2只
長把鑷子 1把
玻璃缸 2只
藥用天平 1臺
OT注射器 2付
注射針頭6# 2只
鐵絲 若干
[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物]0.9% Na a溶液，1：1紅參水提液。
[實(shí)驗(yàn)方法]
1、以18-22g重雄性小白鼠，尾部系上其重量10%的負(fù)荷。
2、放入溫水（26-27℃）中游泳。
3、以小白鼠第一次無力沖出水面為界，記錄時(shí)間。
4、最后取游泳時(shí)間相近的小鼠，隨機(jī)分組。
5、篩選后第二天，分出二組。
實(shí)驗(yàn)組：小鼠腹腔注射紅參水提液0.08ml/10g（生藥6g/kg）。
對照組：小鼠腹腔注射0.9% Na U溶液0.08ml/10g。
6、注射30分鐘后，按上述條件作游泳試驗(yàn)，記錄小鼠游泳持續(xù)時(shí)間（分別為第一次無力沖出水界及死亡時(shí)間）。
7、比較兩組游泳持續(xù)時(shí)間，試分析其原理。
[實(shí)驗(yàn)結(jié)果]
[討論]
實(shí)驗(yàn)三 氣的防御作用
[目的]
觀察小白鼠在氣旺和氣不旺的時(shí)候，對惡劣條件（缺氧）的抵抗能力。
[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物]
18—22g小白鼠10只（雄性）。
[實(shí)驗(yàn)器械]
天平稱 1臺
秒表 1架
注射器（1ml） 2付
注射針6# 2只
125 廣口瓶 10只
125 廣口瓶橡皮塞 10只
紗布 若干
納石灰 50g 1：1生曬人參水提液
生理鹽水
[實(shí)驗(yàn)方法]
1、將生曬人參1：1濃度水煎至所需量，冷卻待用。
2、稱取納石灰0.5g10份，分別包于紗布內(nèi)，置于廣口瓶中。
3、取18—22g雄性小白鼠10只，分二組，一組為實(shí)驗(yàn)組，一組為對照組，稱好體重，作好標(biāo)記。
4、將實(shí)驗(yàn)組小白鼠注入生曬人參水提液以0.08ml/10g的劑量注入腹腔中，對照組注入同等的生理鹽水。
5、用藥半小時(shí)后，將小白鼠放入廣口瓶中，迅疾用橡皮塞緊瓶口，同時(shí)按下秒表。
6、仔細(xì)觀察小白鼠窒息致死的時(shí)間，并記錄備案。
[注意事項(xiàng)]
1、掌握注射劑量。
2、藥后必達(dá)30分鐘后方可置于瓶中。
3、藥物注射必在腹腔中，必須在腹腔內(nèi)淺刺，不能刺入肝臟等臟器，以免損傷內(nèi)臟致死，影響結(jié)果。
[實(shí)驗(yàn)結(jié)果]
[討論]
實(shí)驗(yàn)四 “氣能攝血”試驗(yàn)
[目的]
觀察補(bǔ)氣藥人參對生理情況下和病理情況下小白鼠出凝血的影響，進(jìn)一步加深對“氣能攝血”理論的認(rèn)識。
[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物]
18—22g小白鼠（雄性）10只
[實(shí)驗(yàn)器材]
灌胃器 2只 秒表 1只
玻片 2塊 藥用天平 1臺
OT注射器 2付 手術(shù)剪 1把
注射針頭6# 2只 濾紙、棉花 若干
1：1吉林生曬參浸煎液，肝素 2ml
生理鹽水
[實(shí)驗(yàn)方法]
1、將小白鼠隨機(jī)分為二組，每組10只，作好標(biāo)記編號。
2、實(shí)驗(yàn)組和對照組均在小白鼠尾巴遠(yuǎn)端1/3處取血，測定出凝血時(shí)間。
出血時(shí)間測定法：
用手術(shù)煎將小白鼠尾巴遠(yuǎn)端1/3處煎斷，讓血液自然流出，自血液流出時(shí)開始計(jì)時(shí)，每隔半分鐘用干燥濾紙自創(chuàng)口處吸干流出的血液（注意濾紙不要接觸創(chuàng)面），直至血液停止。將濾紙上的血跡之和除以“2”即為出血時(shí)。
凝血時(shí)間測定法：
用干燥棉球輕輕拭去第一滴血，以清潔干燥的載玻片接取繼續(xù)流出的血液一大滴，直徑約為5—10毫米，并立即開始計(jì)時(shí)。于2分鐘后，每隔半分鐘用干燥針頭挑動(dòng)血液一次，至見到纖維蛋白絲為止。自血液流出至出現(xiàn)纖維蛋白絲的時(shí)間即為凝血時(shí)間。
3、實(shí)驗(yàn)組：1：1人參液0.1ml/10g/日灌入，每日一次×3天。
對照組：生理鹽水0.1ml/10kg/日灌入，每日一次×3天。
4、第三天下午兩組小白鼠均在尾巴1/2處取血，測定出凝血時(shí)間。
5、第四天腹腔注射肝素3u/g，按體重給藥。
6、半小時(shí)后在小白鼠尾巴近體1/3處取血測定出凝血時(shí)間。
[實(shí)驗(yàn)結(jié)果]
[討論]
實(shí)驗(yàn)五 肺通調(diào)水道
[目的]
通過減少肺的通氣量，觀察對尿量的影響，從而了解肺通調(diào)水道，為水之上源的生理功能。
[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物]
兔2kg左右，雌雄不限。
[實(shí)驗(yàn)器械]
哺乳動(dòng)物手術(shù)器械；兔解剖臺；兔“丫”型氣管插管；膀胱插管；眼科煎；注射器（5M1、20ml）及針頭；量筒；馬利氏氣鼓；記紋鼓及描記系統(tǒng)；受滴裝置；絲線；橡皮管；棉花；紗布。
20%烏拉坦溶液；生理鹽水。
[實(shí)驗(yàn)方法]
1、用20%烏拉坦溶液，以1g/kg劑量緩慢注入兔耳緣靜脈，麻醉后固定于兔解剖臺上，亞剪去頸部，腹部手術(shù)部位的毛。
2、沿頸部正中切開皮膚5-7cm，分離肌肉，暴露并分離氣管，穿線，在甲狀軟骨環(huán)下做“┷”形切口，一手將搏線提起，一手將氣管插管送入，用線固定。
3、氣管插管的一邊與一短橡皮管相接，另一邊通過一橡皮管與馬利氏氣鼓，描記裝置相連。
4、在恥骨聯(lián)合上方，沿正中線作一約3cm切口，將膀胱底部牽拉至切口外，在膀胱下方穿一線，然后在膀胱底部作一小切口，（應(yīng)避開血管），插入膀胱插管，結(jié)扎（注意切勿將輸尿管一起扎住）。然后通過小塑料管與受滴裝置相連。
5、先觀察記錄10分鐘呼吸，尿量曲線作為對照。
6、用食指堵塞或用止血鉗鉗夾氣管插管開口端的短橡皮管，減少肺通氣量，再觀察記錄10分鐘呼吸，尿量曲線。
7、恢復(fù)正常肺通氣量，再次觀察呼吸尿量的變化，并做對照分析。
[注意事項(xiàng)]
1、手術(shù)過程應(yīng)盡量減少出血，手術(shù)后可用溫?zé)幔?/span>38℃）生理鹽水紗布復(fù)蓋創(chuàng)面。
2、做膀胱插管插管觀察時(shí)，應(yīng)注意盡量避免受膀胱內(nèi)壓和膀胱收縮的影響。
3、在實(shí)驗(yàn)過程中如無尿，可以在觀察前后三次尿量時(shí)，經(jīng)耳緣靜脈各注射生理鹽水（T37℃左右）10℃
[實(shí)驗(yàn)結(jié)果]
[討論]
實(shí)驗(yàn)六 寒濕傷胃實(shí)驗(yàn)
[目的]
通過冷水浸漬大白鼠四肢的應(yīng)激性刺激，誘發(fā)其胃潰瘍，從而說明“寒濕傷胃”。
[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物]
大白鼠（200～250g）1只，或豚鼠。
[實(shí)驗(yàn)器材]
中型干燥器（直徑10-15cm）1個(gè)，10ml注射器1支，脫脂棉少許，解剖器械一套。
[實(shí)驗(yàn)藥物]
乙醚10ml左右，0.4%中性福爾馬林溶液10ml。
[實(shí)驗(yàn)方法]
1、將大白鼠禁食48小時(shí)。
2、在干燥器底部輔以厚度約2cm，并浸過5-10ml乙醚的脫脂棉，將大白鼠放在干燥器內(nèi)鋪有防蟲網(wǎng)的隔板上，蓋上干燥器蓋，約20-30分鐘，大白鼠進(jìn)入麻醉狀態(tài)。
3、取出大白鼠，將其四肢固定于鼠板上，待其清醒后，浸入20℃左右的水槽中，水面浸至劍突水平。
4、20小時(shí)后，將動(dòng)物處死，擦干皮膚立即剖檢，先將幽門用線結(jié)扎，然后用注射器抽0.4%的中性福爾馬林溶液10ml，自食道注入胃內(nèi)，拔出針頭，結(jié)扎賁門，在兩結(jié)扎線的兩端，切斷食道及十二指腸，摘下全胃，30分鐘后，沿大彎剖開，辨別。通常在腺胃部可見咖啡色的出血點(diǎn)及局灶性粘膜缺損，病變小，僅1mm左右，深部不超過肌層。
[注意事項(xiàng)]
1、麻醉程度以觀察動(dòng)物狀態(tài)來判斷，大而深的呼吸開始時(shí)，則有麻醉致死的危險(xiǎn)。
2、福爾馬林溶液一定要注入胃中，以便固定胃粘膜組織，不致因剖開有胃腔而收縮，影響對病變的觀察。
[實(shí)驗(yàn)結(jié)果]
[討論]
實(shí)驗(yàn)七 冷熱環(huán)境中蟾蜍腸系膜微循環(huán)血液流速的改變
[目的]
用不同溫度刺激被試動(dòng)物，觀察在室溫及禁熱情況下被試動(dòng)物血液運(yùn)行的快慢，血管管經(jīng)的大小及其變化。從而了解機(jī)體血運(yùn)對寒熱環(huán)境的不同反應(yīng)，加深對寒熱特性的理解。
[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物]
大蟾蜍 1只 有孔蛙板 1只
[實(shí)驗(yàn)器材
]剪刀 1把 探針 1根
鑷子 1把 光學(xué)顯微鏡 1架
任氏液 1瓶 大頭針 若干
標(biāo)記筆 1支 冰箱 1只
水浴恒溫箱 1只
[實(shí)驗(yàn)方法]
1記錄室溫、用探針毀壞蟾蜍的脊髓及腦，使之四肢癱軟，然后用剪刀剪開蛙側(cè)腹，將腸系膜用大頭針固定在蛙板上，放置于顯微鏡下。
2在5-10分鐘內(nèi)，找到一根易于分辨的（最好有分枝）的微血管，用記號筆在載物臺上做好標(biāo)記，以便尋找。仔細(xì)觀察這根血管的血流流速，在紙上描繪其形態(tài)，制定其流速等級（參見下面標(biāo)準(zhǔn)）記錄觀察時(shí)間后，將蛙板放入0℃以下的冰箱冷冰室里。
3 30分鐘后取出蛙枝，立即將其放到顯微鏡下，依照記號迅速找到原先的血管，觀察血流流速的變化，判定流速等級，記錄時(shí)間。
4 5分鐘后，將蛙板放入溫度為45℃的水溫恒溫箱內(nèi)架上，10分鐘后取出蛙板速將其放到顯微鏡下，觀察同一血管血流流速的變化，到定流速等級，記錄時(shí)間。
5記錄上述結(jié)果并逐項(xiàng)分析其原因。
（1）線流：血液快，呈光滑的索條狀，毫無顆粒，形如塑料帶。
（2）線粒流血流：呈光滑的索條狀，稍有顆粒感形如綢帶。
（3）粒線流：血流較快，連續(xù)成線，有明顯顆粒感，形如布帶。
（4）粒流血流較慢，軸流，緣流混雜如泥沙流，形如麻帶。
（5）粒緩流：血流呈泥沙狀，連續(xù)緩慢流動(dòng)。
（6）粒擺流：血流呈泥沙狀，前后擺動(dòng)似能向前流動(dòng)。
（7）停滯：血流停滯不動(dòng)。
[實(shí)驗(yàn)結(jié)果]
[討論]
實(shí)驗(yàn)八 恐則氣下實(shí)驗(yàn)
[實(shí)踐原理]恐懼，在心理學(xué)中認(rèn)為是一種企圖擺脫逃避危險(xiǎn)的情緒，引起恐懼的關(guān)鍵因素，則缺乏處理或擺脫可怕情景或事物的力量或能力。在強(qiáng)烈的恐懼狀態(tài)下，往往伴隨著機(jī)體的應(yīng)激變化，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為在情緒狀態(tài)下與植物性神經(jīng)系統(tǒng)聯(lián)系非常密切。祖國醫(yī)學(xué)認(rèn)為七情過激，可造成體內(nèi)氣機(jī)失常，“恐則氣下”就是指恐懼過度可使腎氣不固，氣泄以下出現(xiàn)二便失禁等等的病理變化。
[實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>]
本實(shí)踐是將小白鼠置于一個(gè)無處逃避的封閉電擊籠中給予電擊引起強(qiáng)烈疼痛導(dǎo)致小白鼠極度的恐懼。
[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物]
小白鼠6只，藥理一一生理實(shí)驗(yàn)多用儀一臺及附件電擊籠兩只。
籠底有并列的粗銅片，銅片間距約0.3厘米，粗銅片相間地分別與電源兩極相連接，當(dāng)籠里通電時(shí)，由于鼠的四肢分別站在兩組銅絲上而受到刺激。
[實(shí)驗(yàn)方法]
1、將藥理一一生理實(shí)驗(yàn)多用儀按說明書上聯(lián)接完畢，開啟電源，將交流電壓輸出調(diào)在70-75V后關(guān)閉電源。
2、將小白鼠按大小配對，隨機(jī)分成2組，分別放小甲乙籠，甲籠聯(lián)接多用儀，乙籠則不聯(lián)任何儀器。
3、開啟多用儀給予電擊5分鐘，觀察兩組被試動(dòng)物在電擊初、中、后期的狀態(tài)變化及二便排泄情況，停止刺激后，繼續(xù)觀察10分鐘。
4、將小白鼠取出，收集甲、乙籠內(nèi)糞便，分別記錄顆粒數(shù)并在天平上稱重。
5、分析結(jié)果，并寫出實(shí)驗(yàn)報(bào)告。
[實(shí)驗(yàn)結(jié)果]
[討論]
實(shí)驗(yàn)九 六味地黃丸對氯化鈣致小鼠心律失常的保護(hù)作用
[原理]氯化鈣誘發(fā)心律失常的作用機(jī)理較復(fù)雜，它不僅與鈣離子對心臟的直接作用有關(guān)，而且與腎上腺素能神經(jīng)對心臟的影響也有關(guān)，試驗(yàn)觀察預(yù)先給于六味地黃丸對氯化鈣致小鼠心律失常的保護(hù)作用，
[目的] 探討中醫(yī)滋陰法的作用機(jī)理。
[實(shí)驗(yàn)材料]動(dòng)物：小鼠。器材：心電圖機(jī)、陰極示波器、小鼠固定板。藥品與試劑：六味地黃丸2g生藥/ml水煎液，奎尼丁1mg/ml，10% CaCl2溶液。
[實(shí)驗(yàn)方法]取小鼠30只，隨機(jī)分為3組，生理鹽水5ml/kg，奎尼丁10mg/kg，六味地黃丸9g/kg，灌胃1小時(shí)后，烏拉坦腹腔注射麻醉，記錄II導(dǎo)聯(lián)心電圖，靜脈注射CaCl2100mg/kg。6秒鐘內(nèi)推完，立即記錄小鼠出現(xiàn)室性停搏數(shù)。
[注意]1、本方法用大鼠更易操作，奎尼丁10mg/kg靜脈給藥5分鐘后，快速靜脈注射CaCl2 110mg/kg（3秒鐘注完）。2、有個(gè)別大鼠靜注CaCl2后呼吸高度抑制，最后導(dǎo)致心跳過緩而停搏，這種情況不應(yīng)當(dāng)作心律失?，F(xiàn)象。3、本實(shí)驗(yàn)大鼠觀察指標(biāo)以室早、室速、室顫出現(xiàn)時(shí)間，Ca2+拮抗劑藥物可以推遲發(fā)生。
[評價(jià)]1、本實(shí)驗(yàn)方法較難控制，若CaCl2量減少，雖也有室速，室顫發(fā)生，但大部分動(dòng)物不出現(xiàn)或出現(xiàn)很輕的心律失常，如偶發(fā)室早。若CaCl2劑量增大，則大部分動(dòng)物出現(xiàn)死亡。故一般以出現(xiàn)室顫及死亡動(dòng)物數(shù)為評價(jià)指標(biāo)。2、CaCl2靜脈推注快慢以及動(dòng)物體質(zhì)對動(dòng)物發(fā)生心律失常有很大關(guān)系，若預(yù)先破壞大鼠中樞與支配心臟的交感神經(jīng)有關(guān)部位，或給予神經(jīng)節(jié)阻滯劑或腎上腺素能阻滯劑，對靜脈注射大量CaCl2誘發(fā)心律失常有部分的對抗作用。
[實(shí)驗(yàn)結(jié)果]
[討論]
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